慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病脑脊液中T细胞内细胞因子的分析.pdf
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1、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病脑脊液中T 细胞内细胞因 子的分析 张昆 南 吴晓牡 杨志刚( 江西省 人民医 院神经内科, 南昌, 3 3 0 0 0 6 ) 摘要 目 的 探讨慢性炎症性脱 髓鞘性多发性神经病( C I D P ) 患者的脑脊液( C S F ) 中C D 4 ,细胞内 部分细胞因子的变化特点。 方 法 对1 0 位 C I D P 患者和1 2 位 非炎症性神经疾病( O N D ) 患者用流式细胞仪测定其C S F 中和周围血( P B ) 中C D 4 r 细胞内细 胞 因 子I F N J y 和I L - 4 o 结果 与O N D 相比 较, 在C I D P 的
2、C S F 中C D 4 I F N - 丫 I L 4 一 T 细 胞的 百分比 显著地提高, C D 4 T 细胞的细胞 内I F N - y l l “比例也明显 增加。 同 时C S F 中T 细胞内细胞因 子的比 率较P B 中 要高。 结论 C I D P 是以1 型辅助性T 细胞的反应 占 优势, 同时 也说明利用流式细 胞仪测定C I D P 的C S F 中C D 4 + T 细胞的I F N - y , I L -0标 记是有意义的。 关 键词 C I D P ; C S F ; 细 胞内 细胞因子 中圈分类号: R - 3 3 1 C I D P 是 针 对 周 围 神
3、经 髓 鞘 的自 身 免 疫 性 疾 病。 例, 帕 金 森病3 例, 肌 萎 缩 性 侧索 硬 化2 例, 阿 尔默 胖神经活组织切片的免疫组化研究显示C D 4 二 和海获病2 例和 癫痛2 例。 C I D P IIlh 床过程是 慢性进行 C D 8 T细胞总是伴随有激活巨噬细胞浸润而无B 细性的6 例, 缓解复发4 例, 单相型2 例。 所有的C I D P 胞 或免 疫 球蛋 白 沉 积, 表 明T 细 胞在 发 病 过 程中 的患 者 显 示累 及 运动 支 配, 除 了1 个 之 外 所 有的 都是 重要性n .2 1趋化因子 对于炎 症部 位T 细胞聚集 起重对 称性累 及。
4、 要作用。 最近在C I D P 的C S F 中的 趋化因 子的 研究1 .2 样 本收 集: 所有患者抽取5 m l C S F 和P B o C S F 样 揭示了 趋化因子的增加, 主要是T h l 细胞正引起注品立刻以8 0 0 转/ m i n 4 离心5 m in o 在C I D P 患者中, 意, 例 如C X C L 1 0 ( I P - 1 0 ) P .n , 与C X C R 3 的 最 高表 达用 于 细 胞内 细 胞因 子 分析 的 样品 中C S F 细 胞 数为 相一致。 C X C R 3 对于C X C L 1 0 是趋化因子受体, 并2 0 士 1 0
5、 / m l 。) , 在O N D病 人 1 0 士 5.0/ml. 且对于T h l 细胞在排神经活组织切片检查中的侵1 .3 使用流式细胞仪分析细胞内细胞因子: 小心去 袭 性T 细 胞 趋 化因 子 受体 来 说 是 明 确的3 1。 但 是, 除C S F 上清 液, 细胞沉 淀用5 0 0 m 1 R P M 1 1 6 4 0 含 C S F 中趋化因子增加的意义仍然不清楚,正如在工 0 %的胎牛血清重悬。置2 4 孔培养平板( B e c t o n C I D P 中无C S F 淋巴细胞异常增多,而 且在这种情D ic k i n s o n , L i n c o l n
6、 P a r k , N J , U S A ) 中, 混匀后加人刺 况下无任何研究表明细胞成分有任何变化。激剂2 5 n g / m l p h o r b o l 1 2 - m y r i s t a te 1 3 - a c e t a t e ( P M A , 此 外, 在C I D P 的C S F 中 细 胞因 子, 例如I L - S i g m a ,S t. L o u i s , M 0 , U S A ) , 1 .0 p .g / m l I o n o m y c in ( S i g - l a , I L - 1 (3 , I L - 2 , I L - 6
7、, I L - 1 0 , I F N - y , T N F - a和单m a ) 和 I O M / m l b r e f e l d i n A ( S i g m a ) , 在3 7 0 C , 5 % C O 2 核细胞集落刺激因 子( M - C S F ) 在酶联免疫吸附 试验条件下培养4 h 。 用含0 . 1 %B S A ( b o v i n e s e r u m a lb u - ( E L I S A ) 中 发 现 是 阴 性的 1 t , 14 1: 了 在 一 项比 较 早的 研m i n ) 的P B S ( p h o s p h a te b u f
8、 f e re d s a l i n e )冲 洗液即 究 中 显 示I L - 6 增 加 16 1。 目 前的 研 究主 要 集中 于 利 用0 . 1 % B S A - P B S 5 m l 冲 洗2 次, 加荧 光 标记 的 抗 体 流式细胞仪直接测定细胞内细胞因子 产物C D 4 T P C 5 - C D 4 ( C l o n e 1 3 B 8 .2 , B e c t o n D i c k i n s o n ,S a n J o s e , 细胞, 和多元免疫荧光测定仪测定C I D P 的C S F 悬C A ,U S A ) 1 0 m l , 4 9 C 避光
9、条件下染色 1 5 m i n , 0 . 1 % 液中各种不同的细胞因子和化学因子水 平16 .1 1。 这些B S A - P B S 5 m 1 冲洗 I 次。加细胞膜通透性增强液 研究是用来阐明C S F间隙免疫平衡的独特性。 另( B e c t o n D i c k i n s o n ) 3 m l , 4 C , 避光条件下 1 5 m i n 以 外, 由 于C S F 被 认 为比 外P B 更 能 反 映 血 神 经 屏障增 强 细 胞 膜 通透 性, 0 . 1 % B S A - P B S 5 m 1 冲 洗I 次 。 内的事件, 我们试图探测每个炎症性神经 病的
10、临床加荧光标记的单克隆抗体 F I T C - I F N - g ( C lo n e 有 效 C S F 标志。2 5 7 2 3 . 1 1 , B e c t o n D i c k in s o n )和 P E - I L - 4 ( C l o n e 1材料和方法3 0 1 0 .2 1 1 ,B e c t o n D i c k i n s o n ) , 4 0 C 避光条件下染色3 0 1 . 1 一 般资 料: C I D P 患者1 0 例, 男5 例 , 女5 例; 平m in , 0 . 1 % a B S A - P B S 5 m l 冲 洗2 次 后 加P
11、 B S 5 0 0 m 1 , 均 年 龄 ( 5 0 士 1 0 . 2 岁 ) 。 O N D 患者1 2 例, 男7 例, 女5 用流 式 细 IN 仪E p i c s X L s y s t e m I I ( B e c k m a n C o u l t e r , 例, 平均年龄( 4 9 t 1 4 .5 ) 岁。O N D组包括脑梗塞3 F L , U S A ) 测定分析。 测定的细胞被限定为淋巴 细胞, 江西医药 2 0 0 5 年 第40卷 第1 1 期 分析的细胞不少于5 0 0 个。对于P B , 如前面 描述的 一样, 但需加红细胞溶解剂5 m 1 , 室温1
12、 0 m i n , 离心 法分离白细胞。 测定的细胞被限 定为淋巴细胞, 分 析的 细胞不少于1 0 0 0 0 个。 每一种单克隆抗体的阳 性细胞的 百分率被测定。 1 . 4 统计分析: 实验数据以平均值t 标准差表示, 两 样本 均数比 较采 用 检 验 进行 显 著 性分 析, P 0 . 0 5 有统计学意义。 统计用M ic ro s o f t E x c e l 9 7软件处 理。 2结果 2 . 1 在 C S F细胞和 P B之间比较细胞内细胞因子产 生。在C I D P 和O N D的I F N - y * I L - 4 - C D 4 T 细胞百 分率在C S F
13、细 胞中明 显比 在P B 中 高 ( P 0 .0 5 ) o I F N - y * I L - 4 细 胞 百 分 率 在C S F 细 胞中 明 显 比 在P B 中高。细 胞内I F N - y / I L - 4 比率 I F N - y I L - 4 - C D 4 T 细胞 百分 率除I F N - y - I L - 4 C D 4 “ P 细胞 百分 率) 在 C S F 细胞中 明显比 在P B中 高( P 0 . 0 5 ) o C S F 与P B 的I F N - y - I L - 4 C D 4 T 细 胞百分率相比 较, 在C I D P 无明显降低( P
14、5 0 . 0 5 ) , 在P B 则明显降低( P 0 .0 5 ) . 2 .2比较 C I D P和O N D的 C S F和 P B C D 4 * 细胞内细 胞因 子 产 生 。 在C S F 中 , I F N - 丫 I L - 4 一 细 胞 百分 率 在C I D P 明 显 增 加 ( P 0 .0 0 1 ) 。 而 在P B 中, 其 百 分 率 无明 显 差异 。 I F N - y I L - 4 细 胞 百 分 率 在C S F 和 在 P B 中 均 无明 显 差 异 。 I F N - y / 1 L 一比 率 在C S F 中 明 显增加( N0 ,0 5
15、 ) , 在P B中 无明 显差异。 I F N - -y I L - 4 细 胞比 例 在C S F 和 在P B 中 均 无 明 显 差 异 ( 附 表) 。 附裹C S F 和 P B中 C 0 4 T 细胞 内细 胞 因子的分析 O N D (n = 1 2 ) C I D P (n = 1 0 ) PH 降 C S F降 )P B ( 9 0 ) C S F ( 9 = C I D P 与O N D比较P 0 .0 5 3讨论 此研究是通过流式细胞仪测定分析 C I D P患者 C S F 细胞内细胞因子产物的变化。即 使在无C S F 淋 巴 细胞异常增多 时,我 们的 方法亦成功
16、地测出细胞 内 细胞因 子产物。 由于C S F 细胞极脆弱及他们的数 目 有限, 故在细胞水平评价C S F 的细 胞因子的确困 难。 在目 前的研究中, 甚至在缺乏C S F 淋巴细胞异 常增多时, 亦发现C I D P 病人I F N - y “ C D 4 T 细胞明 显增加, 可见在C I D P 患者其C S F 较O N D患者有更 大的T h l 变 化。 M a t h e y 等 指 出T h l 细 胞因 子 的m R N A 表 达, 例 如I F N - y , T N F - a 和I L - 2 , 在C I D P 病人膝神经活组 织 切片 检查中 是上调的D
17、I。 但是, 在C S F 悬液中, I L - 2 几 乎 在 任 何 疾 病中 都 不 能 被 检 测 到, 而 且T N F - a 和I F N - , 浓度的 增加 无统计 学意义。虽然 一个 E L T S A研究已经证明在一小部分有严重残疾的 C I D P 患 者 血 清 中, T N F - 。 浓 度 增 加 t9 1。 对 于I F N - y , 细胞内细胞因 子分析优于细 胞外细胞因子测定; 可 能是因为细胞内细胞因子分析直接测定每个细胞潜 在的细 胞因子 产物, 因此, 总数量不被其他的因素冲 淡, 例如大量的频繁的C S F 更换。 虽然通过细胞内 细胞因子分析,
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- 关 键 词:
- 慢性 炎症 脱髓鞘 多发性 神经病 脑脊液 细胞内 细胞因子 分析
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