慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病脑脊液中T细胞内细胞因子的分析.pdf

慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病脑脊液中T 细胞内细胞因 子的分析 张昆 南 吴晓牡 杨志刚( 江西省 人民医 院神经内科， 南昌, 3 3 0 0 0 6 ) 摘要 目 的 探讨慢性炎症性脱 髓鞘性多发性神经病( C I D P ) 患者的脑脊液( C S F ) 中C D 4 ，细胞内 部分细胞因子的变化特点。 方 法 对1 0 位 C I D P 患者和1 2 位 非炎症性神经疾病( O N D ) 患者用流式细胞仪测定其C S F 中和周围血( P B ) 中C D 4 'r 细胞内细 胞 因 子I F N J y 和I L - 4 o 结果 与O N D 相比 较， 在C I D P 的C S F 中C D 4 ' I F N - 丫 I L 4 一 T 细 胞的 百分比 显著地提高， C D 4 'T 细胞的细胞 内I F N - y l l “比例也明显 增加。 同 时C S F 中T 细胞内细胞因 子的比 率较P B 中 要高。 结论 C I D P 是以1 型辅助性T 细胞的反应 占 优势， 同时 也说明利用流式细 胞仪测定C I D P 的C S F 中C D 4 + T 细胞的I F N - y , I L -0标 记是有意义的。 关 键词 C I D P ; C S F ; 细 胞内 细胞因子 中圈分类号: R - 3 3 1 C I D P 是 针 对 周 围 神 经 髓 鞘 的自 身 免 疫 性 疾 病。 例， 帕 金 森病3 例， 肌 萎 缩 性 侧索 硬 化2 例， 阿 尔默 胖神经活组织切片的免疫组化研究显示C D 4 二 和海获病2 例和 癫痛2 例。 C I D P IIlh 床过程是 慢性进行 C D 8 T细胞总是伴随有激活巨噬细胞浸润而无B 细性的6 例， 缓解复发4 例， 单相型2 例。 所有的C I D P 胞 或免 疫 球蛋 白 沉 积， 表 明T 细 胞在 发 病 过 程中 的患 者 显 示累 及 运动 支 配， 除 了1 个 之 外 所 有的 都是 重要性n .2 1趋化因子 对于炎 症部 位T 细胞聚集 起重对 称性累 及。 要作用。 最近在C I D P 的C S F 中的 趋化因 子的 研究1 .2 样 本收 集: 所有患者抽取5 m l C S F 和P B o C S F 样 揭示了 趋化因子的增加， 主要是T h l 细胞正引起注品立刻以8 0 0 转/ m i n 4 离心5 m in o 在C I D P 患者中， 意， 例 如C X C L 1 0 ( I P - 1 0 ) P .n ， 与C X C R 3 的 最 高表 达用 于 细 胞内 细 胞因 子 分析 的 样品 中C S F 细 胞 数为 相一致。 C X C R 3 对于C X C L 1 0 是趋化因子受体， 并2 0 士 1 0 / m l 。) ， 在O N D病 人 1 0 士 5.0/ml. 且对于T h l 细胞在排神经活组织切片检查中的侵1 .3 使用流式细胞仪分析细胞内细胞因子: 小心去 袭 性T 细 胞 趋 化因 子 受体 来 说 是 明 确的3 1。 但 是， 除C S F 上清 液， 细胞沉 淀用5 0 0 m 1 R P M 1 1 6 4 0 含 C S F 中趋化因子增加的意义仍然不清楚，正如在工 0 %的胎牛血清重悬。置2 4 孔培养平板( B e c t o n C I D P 中无C S F 淋巴细胞异常增多，而 且在这种情D ic k i n s o n , L i n c o l n P a r k , N J , U S A ) 中， 混匀后加人刺 况下无任何研究表明细胞成分有任何变化。激剂2 5 n g / m l p h o r b o l 1 2 - m y r i s t a te 1 3 - a c e t a t e ( P M A , 此 外， 在C I D P 的C S F 中 细 胞因 子， 例如I L - S i g m a ,S t. L o u i s , M 0 , U S A ) , 1 .0 p .g / m l I o n o m y c in ( S i g - l a , I L - 1 (3 , I L - 2 , I L - 6 , I L - 1 0 , I F N - y , T N F - a和单m a ) 和 I O M / m l b r e f e l d i n A ( S i g m a ) ， 在3 7 0 C , 5 % C O 2 核细胞集落刺激因 子( M - C S F ) 在酶联免疫吸附 试验条件下培养4 h 。 用含0 . 1 %B S A ( b o v i n e s e r u m a lb u - ( E L I S A ) 中 发 现 是 阴 性的 1' t , 14 1: 了 在 一 项比 较 早的 研m i n ) 的P B S ( p h o s p h a te b u f f e re d s a l i n e )冲 洗液即 究 中 显 示I L - 6 增 加 16 1。 目 前的 研 究主 要 集中 于 利 用0 . 1 % B S A - P B S 5 m l 冲 洗2 次， 加荧 光 标记 的 抗 体 流式细胞仪直接测定细胞内细胞因子 产物C D 4 'T P C 5 - C D 4 ( C l o n e 1 3 B 8 .2 , B e c t o n D i c k i n s o n ,S a n J o s e , 细胞， 和多元免疫荧光测定仪测定C I D P 的C S F 悬C A ,U S A ) 1 0 m l , 4 9 C 避光条件下染色 1 5 m i n , 0 . 1 % 液中各种不同的细胞因子和化学因子水 平16 .1 1。 这些B S A - P B S 5 m 1 冲洗 I 次。加细胞膜通透性增强液 研究是用来阐明C S F间隙免疫平衡的独特性。 另( B e c t o n D i c k i n s o n ) 3 m l , 4 C , 避光条件下 1 5 m i n 以 外， 由 于C S F 被 认 为比 外P B 更 能 反 映 血 神 经 屏障增 强 细 胞 膜 通透 性， 0 . 1 % B S A - P B S 5 m 1 冲 洗I 次 。 内的事件， 我们试图探测每个炎症性神经 病的临床加荧光标记的单克隆抗体 F I T C - I F N - g ( C lo n e 有 效 C S F 标志。2 5 7 2 3 . 1 1 , B e c t o n D i c k in s o n )和 P E - I L - 4 ( C l o n e 1材料和方法3 0 1 0 .2 1 1 ,B e c t o n D i c k i n s o n ) , 4 0 C 避光条件下染色3 0 1 . 1 一 般资 料: C I D P 患者1 0 例， 男5 例 ， 女5 例; 平m in , 0 . 1 % a B S A - P B S 5 m l 冲 洗2 次 后 加P B S 5 0 0 m 1 , 均 年 龄 ( 5 0 士 1 0 . 2 岁 ) 。 O N D 患者1 2 例， 男7 例， 女5 用流 式 细 IN 仪E p i c s X L s y s t e m I I ( B e c k m a n C o u l t e r , 例， 平均年龄( 4 9 t 1 4 .5 ) 岁。O N D组包括脑梗塞3 F L , U S A ) 测定分析。 测定的细胞被限定为淋巴 细胞， 江西医药 2 0 0 5 年 第40卷 第1 1 期 分析的细胞不少于5 0 0 个。对于P B ， 如前面 描述的 一样， 但需加红细胞溶解剂5 m 1 , 室温1 0 m i n , 离心 法分离白细胞。 测定的细胞被限 定为淋巴细胞， 分 析的 细胞不少于1 0 0 0 0 个。 每一种单克隆抗体的阳 性细胞的 百分率被测定。 1 . 4 统计分析: 实验数据以平均值t 标准差表示， 两 样本 均数比 较采 用 检 验 进行 显 著 性分 析， P 0 . 0 5 有统计学意义。 统计用M ic ro s o f t E x c e l 9 7软件处 理。 2结果 2 . 1 在 C S F细胞和 P B之间比较细胞内细胞因子产 生。在C I D P 和O N D的I F N - y * I L - 4 - C D 4 'T 细胞百 分率在C S F 细 胞中明 显比 在P B 中 高 ( P 0 .0 5 ) o I F N - y * I L - 4 ' 细 胞 百 分 率 在C S F 细 胞中 明 显 比 在P B 中高。细 胞内I F N - y / I L - 4 比率 I F N - y ' I L - 4 - C D 4 'T 细胞 百分 率除I F N - y - I L - 4 ' C D 4 “ P 细胞 百分 率) 在 C S F 细胞中 明显比 在P B中 高( P 0 . 0 5 ) o C S F 与P B 的I F N - y - I L - 4 ' C D 4 ' T 细 胞百分率相比 较， 在C I D P 无明显降低( P 5 0 . 0 5 ) ， 在P B 则明显降低( P 0 .0 5 ) . 2 .2比较 C I D P和O N D的 C S F和 P B C D 4 * 细胞内细 胞因 子 产 生 。 在C S F 中 ， I F N - 丫 I L - 4 一 细 胞 百分 率 在C I D P 明 显 增 加 ( P 0 .0 0 1 ) 。 而 在P B 中， 其 百 分 率 无明 显 差异 。 I F N - y ' I L - 4 ' 细 胞 百 分 率 在C S F 和 在 P B 中 均 无明 显 差 异 。 I F N - y / 1 L 一比 率 在C S F 中 明 显增加( N0 ,0 5 ) ， 在P B中 无明 显差异。 I F N - -y ' I L - 4 ' 细 胞比 例 在C S F 和 在P B 中 均 无 明 显 差 异 ( 附 表) 。 附裹C S F 和 P B中 C 0 4 ' T 细胞 内细 胞 因子的分析 O N D (n = 1 2 ) C I D P (n = 1 0 ) PH 降 C S F降 )P B ( 9 0 ) C S F ( 9 = C I D P 与O N D比较P 0 .0 5 3讨论 此研究是通过流式细胞仪测定分析 C I D P患者 C S F 细胞内细胞因子产物的变化。即 使在无C S F 淋 巴 细胞异常增多 时，我 们的 方法亦成功地测出细胞 内 细胞因 子产物。 由于C S F 细胞极脆弱及他们的数 目 有限， 故在细胞水平评价C S F 的细 胞因子的确困 难。 在目 前的研究中， 甚至在缺乏C S F 淋巴细胞异 常增多时， 亦发现C I D P 病人I F N - y “ C D 4 ' T 细胞明 显增加， 可见在C I D P 患者其C S F 较O N D患者有更 大的T h l 变 化。 M a t h e y 等 指 出T h l 细 胞因 子 的m R N A 表 达， 例 如I F N - y , T N F - a 和I L - 2 ， 在C I D P 病人膝神经活组 织 切片 检查中 是上调的D I。 但是， 在C S F 悬液中， I L - 2 几 乎 在 任 何 疾 病中 都 不 能 被 检 测 到， 而 且T N F - a 和I F N - ， 浓度的 增加 无统计 学意义。虽然 一个 E L T S A研究已经证明在一小部分有严重残疾的 C I D P 患 者 血 清 中， T N F - 。 浓 度 增 加 t9 1。 对 于I F N - y , 细胞内细胞因 子分析优于细 胞外细胞因子测定; 可 能是因为细胞内细胞因子分析直接测定每个细胞潜 在的细 胞因子 产物， 因此， 总数量不被其他的因素冲 淡， 例如大量的频繁的C S F 更换。 虽然通过细胞内 细胞因子分析， T h 2 细胞在一 些C I D P 病人P B中 也是增加的， T h l 转变是显然存 在于C S F 细胞中。 有可能T h l 细胞穿越血 液神经屏 障( B N B ) 从外周血转移到神经， 而在C I D P 患者中 C S F细胞能更敏感的反映发生在 B N B内的病理过 樱to lo 通过分析C I D P 患者 C S F中C D 4 'T细胞内细胞 因子 水平的变 化。 在无C S F 淋巴 细胞异常增多时亦 成功 地测出细 胞内 细胞因 子。 由 于C S F 细胞 极脆弱 及他们的数目 有限， 故在细胞水平评价C S F 的细 胞 因子的确困难。 研究中发现C I D P 患者C D 4 ' I F N - y ' T 细 胞明显 增加。在C I D P 患者中T h 2 细胞因 子I L - 4 在C S F 中下降。 有可能T h l 细胞穿越B N B 从外周 血转移到神经， 而在C I D P 患者中， C S F 细胞能更敏 感的反映发生在B N B内 的病理过程o C S F 细 胞内细 胞因子分析成功地证明了T h l 上调和 T h 2细胞因 子的下调。 因 此我们认为在临床上监测C S F 中细 胞 因子I F N - ， 和I L - 4 是有意义的。 4参考文献 1 M a ts u m u m K , l r u m o S , U m e h a m F , e t a l. C h ro n ic i n fl a m m a to ry d e - m y e l in a t in g p o l y n e u m p a th y : h is t o lo g i c a l a n d i m m u n o p a t h o l o g ic a l s t u d ie s o n b i叩s i e d s u m l n e rv e s . J N e u ra l S e i , 1 9 9 4 , 1 2 7 :1 7 0 2 N iu u t o N , M o r b in M , C a v a B a r o T , e t a l. F xa l l e s io n s a re a f e a t u re o f c h r o n ic i n fl a mm a to ry d e m y e li n a ti n g p o l y n e u ro p a th y ( C I O P ) .A c ta N e u - r o p a t h o l (B e rl ) ,1 9 9 8 ,9 6 :6 0 3 3 K ie ae ie r B C . T o e ! M . M a h a d 1 ) . e i a l . C h e m o k in e s a n d c h e m o k ln a, r e - c e p t o r s in in fl a m m a to ry d e m y e l in a t in g n e a rop a th ie s : a c e n tr a l role f o r 1 P - 1 0 . B r a i n ,2 0 0 2 , 1 2 5 :8 2 3 4 M a h a d D J , H o w e ll S J L , Wo o d m o f e M N . E x p r e s s i o n o f 'c h e m o k i n e s in c e r e b ros p i n a l f lu id a n d s e r u m o f p a ti e n t s w ith c h ro n i c i n fla m m a to ry d e m y e li n a ti n g p o ly n e u m p a th y . J N e u r a l N e u ms u r g P s y c h ia tr y , 2 0 0 2 , 7 3 : 3 2 0 5 M a im o n e D , A n n u n x ia ta P , S im o n e 1 L , e t a l . I n te rl e u k i n - 6 l e v e ls in t h e c e mb m s p i , l f lu id a n d s e mm o f p a t ie n t s w i th G u i ll a i n 一B a n e ' s y n d ro m e a n d c h r o n ic i n fl a m m a to ry d e m y e li n a ti n g p o l y r a d ic u l o n e u - .72 4 - 江西暇药 2 0 0 5 年 第40秦 第 I l 期 肾综合征出血热误诊3 0 例分析 爹斌炯( 浙汀省 上虞市第二人民医 院， 上虞, 3 1 2 3 6 5 ) 摘要 目的 提高对肾综合征出 血热的诊断水平. 减 少误诊。 方法 总 结本院 收治的3 0 例肾综合征出 血热的 误诊悄况与 原因。 结 3 0 例 中 误 诊 为 上 呼 吸 道 感 染6 例， 急 性 肠胃 炎6 例， 急 性肝 炎5 例， 伤 寒4 例， 败 血 症3 例， 急 性 肾 炎3 例， 急 性肾 孟 肾 炎2 . 慢性肾炎1 例。 3 0 例全部治 愈。 结 论 肾综合征出血 热临床表现多样， 应 综合分析临床表现及实验室检查， 及早诊断， 避免误 果例诊 关键词 肾综合征出 血热; 误诊 中图分类号: 1 01 2 . 8 肾 综合征出血热 是由 汉坦病毒引起的自 然病源 性传染 病， 如能早期诊断， 早期治疗， 能缩短病程， 改 善预后。 本文收集了1 9 9 4 年一 2 0 0 4 年间我院 误诊的 3 0 例肾综合征出血热患者， 分析其误诊原因， 供同 道借鉴。 1临床资料 1 . 1 一般资料: 1 9 9 4 年一 2 0 0 4 年共收治肾综合征出 血 热 病 人2 1 7 例， 其中 误 诊3 0 例( 误 诊率1 3 .8 % ) o 3 0 例中 男2 1 例， 女9 例; 年龄 1 5 - 6 8 岁。据肾 综合 征出血 热临床分型诊断标准m ， 本组轻型1 5 例， 中 型1 3 例， 重型2 例。 其中4 例有高血压病史， 2 例有 血小板减少史， 有慢性胃炎、 肝硬化史各1 例。 1 .2 误诊疾病: 误诊上呼吸道感染6 例， 急 性肠胃炎 6 例， 急性肝炎5 例， 伤寒4 例， 败血症3 例， 急性肾 炎3 例， 急 性肾盂肾炎2 例， 慢性肾 炎1 例。 1 . 3 确诊方法: 动态观察出现典型临床表现并结合 特异 性肾 综 合 征 出 血热I g m 抗 体 阳 性 确 诊 。 1 . 4 治疗转归: 据不同 病期采用抗炎、 止血、 抗病毒、 抗休克、 利尿、 纠正 水、 电解质酸碱平衡、 支持疗法等 综合措施全部治愈。 2 讨论 2 . 1 误诊 原因 2 . 1 . 1 疾病表现不典型: 肾综合征出 血热的典型表现 为: 急性起病、 发热、 。 三痛” 、 · 三红” 症状， 皮肤粘膜 出 血 点， 血 象 升 高， 血 小 板 计 数 下 降， 尿 蛋 白 阳 性， 病 程呈s 期经过， 但汉坦病毒具有泛嗜性In ， 可引起多 脏 器 受 损 及 功能 障 碍， 加 以 患 者 个 体 差 异、 人 侵 病 毒 数量多少、 毒力强弱等原因， 均可导致临床表现多样 化 ， 不 典 型 。 如 本 组 中 有4 例 血 象 不 高， 无 血 小 板 减 少， 表现为持续发热而误诊为 伤寒。 2 . 1 . 2 首诊医生存在不足: ( 1 ) 低年资医生对肾 综合 征出血 热缺 乏充 分认识及诊治经验， 对发热患者缺 乏对临床表现及实验室检查结果的综合分析能力， 片面注 重某一方面症状、 体征或某一异常实验室结 果， 贸然下结论。( 2 ) 询问病史不详细。 本组中 有误 诊为急 性肾 炎者， 多以颜面浮肿多尿为主诉， 追问 病 史病程中有发热、 头痛， 曾在当地治疗过， 来院时体 温基本正常， 接诊医生仅据尿蛋白阳 性、 血肌醉、 尿 素氮升高而 误诊肾 炎。(3) 查体不仔细， 遗漏重要体 征。本 组中 有6 例主 诉为 发热、 腹胀、 腹痛、 呕吐、 腹 泻、 尿 少， 接 诊 医 生 遗 漏 病人 软 A s 有出 血 点 的 重 要 体 征而误诊为急性 肠胃炎。( 4 ) 过分注重某项检查， 思 维定势导 致主观臆断。如肝功能 异常 伴黄疽而 误诊 为 急 性 黄 疽 型 肝 炎， 而 不 注 意 病 人 还 有 血 象 升 高， 尿 蛋白阳 性， 难以 用普通肝炎解释， 本组有5 例; 如白 细胞明显升高就 误诊为败血症; 再如尿少、 尿频、 发 热、 腰痛， 尿常规发现白细 胞就 误诊为急性肾孟肾 炎. 本 组有2 例。 rop a th y . J N e u roim m u n a l , l 9 9 3 ,4 7 :5 5 6 V i g n a l i D A A . M u l tip le x e d p a n i c le - b a s e d fl o w c y to m e tr ic a s s a y s . J b n m u n d M e t h o d s , 2 0 0 0 ,2 4 3 : 2 4 3 7 d e J a g e r W , t o V e lt h u i s H , P r o k k e n O J m t a l . S i m u l ta n e o u s d e te c t io n o f 1 5 h u m a n c y to k in e s in a s i n g le s a m p le o f s ti m u la te d p e ri p h e ra l b lo o d m o n o n u c l e a r c e ll s . C l in D ie g u l a b I m m u n o 1 .2 0 0 3 ,1 0 : 1 3 3 8 M a th e y E K , P o fl m d J D , A r m a t i 玛. T N F . , 1F N g a n d 1L - 2 m R N A e x - p r w s i o n i n C I D P s a t e d n e rve b i o p s ie s . 1 N e u ro l S c i , 1 9 9 9 ,1 6 3 :4 7 9 M is a w a S , K u w a b a m S , M o r i M, K a w a g u c h i N , Y o sh i y a m a Y , H a t to ri T . S e r u m le v e l s o f tu m o r n e c ro s i s f a c t o r - a in c h ro n ic in fl a m m a to r t d e m y e li n a ti n g p o l y n e u m p a t h y . N e u m lo g y ,2 0 0 1 ,5 6 :6 6 6 1 0 H o r i a c h i 1 , O c h i H , M u ra i H , e t a l . 1 h 2 s h if t in m o n o n e u a iti s m u l ti - p l e x a n d i n m e a s e o f 7 h 2 c e l ls in c h ro n ic i n fl a m m a to ry d e m y e l in a t in g p o l y n e u m p a th y : a n i n tr a c e ll u l a r c y t o k in s a n a ly s is . J N e u m l S c i ,2 0 0 1 , 1 9 3 : 4 9 ( 收稿日 期2 0 0 5 -08 - 0 9修回日 期2 0 0 5 - 1 1 -04 )