茶树油眼用凝胶和甲硝唑滴眼液体外抗螨作用比较 an experiment study of killing ocular demodex in vitro with tea tree oil ocular gel and arilin eye drops.pdf
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1、第2 0 卷第1 8 期 2 0 1 4 年9 月 中国实验方剂学杂志 C h i n e s eJ o u r n a lo fE x p e r i m e n t a lT r a d i t i o n a lM e d i c a lF o r m u l a e V 0 1 2 0 ,N o 1 8 S e p ,2 0 1 4 茶树油眼用凝胶和甲硝唑滴眼液体外抗螨作用比较 韩雷1 ,皇甫赘2 ,王应飞1 ,张俊杰1 ,王丽娅h ( 1 河南省立眼科医院河南省眼科研究所,郑州4 5 0 0 0 3 ;2 河南医学高等专科学校,郑州4 5 11 9 1 ) 摘要目的:探讨5 茶树油凝
2、胶、2 甲硝唑滴眼液2 种制剂对毛囊蠕形螨的体外杀灭作用,为选择有效的灭螨方法 提供依据。方法:在本院眼科门诊片j 睫毛拔取法采集眼部毛囊蠕形螨,置于细胞板中,滴加5 茶树油凝胶、2 甲硝唑滴眼液, 利用倒置显微镜观察其存活情况,生理盐水为空白对照。结果:5 的茶树油凝胶对毛囊蠕形螨有较好的杀灭作用,虫体形态 及活动度均发生了兴奋一痉挛一松弛一死亡的典型变化。毛囊蠕形螨在5 茶树油凝胶中的存活时间平均为( 1 4 3 0 6 2 ) h ,与 2 甲硝唑滴眼液组的平均存活时间( 2 7 6 5 5 1 4 ) h 比较差异有统计学意义( P 0 0 1 ) 。毛囊蠕形螨在3 组间的存活时间经
3、H 检验,差异有统计学意义( P 0 0 1 ) 。其中,毛囊蠕形螨在2 甲硝唑滴眼液中的存活时间与空白对照组的平均存活时间 ( 2 3 3 3 3 9 8 ) h 比较差异无统计学意义。毛囊蠕形螨在5 茶树油凝胶与空白对照组的存活时间比较差异有统计学意义 ( P 0 0 1 ) 。在5 茶树油凝胶、2 甲硝唑滴眼液和空白对照组问,毛囊蠕形螨2 4h 死亡率分别为1 0 0 ,2 0 ,5 0 ,差异具 有统计学意义( P 0 0 1 ) 。结论:2 甲硝唑滴眼液对毛囊蠕形螨无体外杀灭作用;5 茶树油凝胶对毛囊蠕形螨有体外杀灭 作用。茶树油凝胶制剂可作为一种天然高效的杀螨药物。 关键词茶树油凝
4、胶;甲硝唑滴眼液;毛囊蠕形螨;存活时间;2 4h 死亡率 中图分类号 R 2 8 7 6 文献标识码 A 【文章编号1 0 0 5 - 9 9 0 3 ( 2 0 1 4 ) 1 8 - 0 1 8 8 - 0 4 d o i 1 0 1 3 4 2 2 j e n k i s y f j x 2 0 1 4 1 8 0 1 8 8 A nE x p e r i m e n tS t u d yo fK i l l i n gO c u l a rD e m o d e xi nv i t r ow i t h T e aT r e eO i lO c u l a rG e la n dA r
5、 i l i nE y eD r o p s H A NL e i l ,H U A N GF u y u n 2 ,W A N GY i n g - f e i l ,Z H A N GJ u n - j i e l ,W A N GL i y a l + ( 1 H e n a nE y eH o s p i t a l & H e n a nE y eI n s t i t u e ,Z h e n g z h o u4 5 0 0 0 3 ,C h i n a ; 2 H e n a nM e d i c a lC o l l e g e ,Z h e n g z h o u4 51
6、191 ,C h i n a ) lA b s t r a c t o b j e c t i v e :T h ep u r p o s eo ft h i ss t u d yw a st oc o m p a r et h ea c a r i c i d a le f f e e t o f5 t e at r e eo i l g e la n d2 a r i l i ne y ed r o p so nt h eo c u l a rD e m o d e xf o l l i c u l o r u m M e t h o d :E y e l a s hs a m p l e
7、 sw e r ee p i l a t e df r o mo u t p a t i e n to fo p h t h a l m o l o g yt o c o l l e c to c u l a rD f o l l i c u l o r u m ,t r a n s f e r r e di n t o6 - w e l lp l a t e sa n de x a m i n e du n d e rt h e i n v e r t e dm i c r o s c o p e E a c hw e l lc o n t a i n e da tl e a s t2 0l
8、 i v em i t e sw h i c hw e r ec o l l e c t e da n dt r e a t e dw i t h5 t e at r e e o i lg e la n d2 a r i l i ne y ed r o p s ,r e s p e c t i v e l y ,w i t hn o r m a ls a l i n ea sb l a n kc o n t r 0 1 R e s u l t :5 t e at r e eo i lg e lw a s d e m o n s t r a t e dt os h o wb e t t e rk
9、 i l l i n ge f f e c tO i lt h em i t e 讯v i t r o A f t e rd r u gt r e a t m e n t t h em o r p h o l o g ya n da c t i v i t yo f D f o l l i c u l o r u ma l t e r e dw i t ht y p i c a lc h a n g e so fe x c i t a t i o n s p a s m c h a l a s i a d e a t h I nt h et r e a t m e n to f5 t e at
10、 r e eo i l g e l ,t h ea v e r a g es u r v i v a lt i m eo fm i t e sw a s ( 1 4 3 0 6 2 ) h ,w h i l ei n2 a r i l i ne y et r e a t m e n t i tw a s ( 2 7 6 5 5 1 4 ) h ,w i t has i g n i f i c a n td i f f e r e n c eb e t w e e nt h e m ( P 0 0 1 ) T h es u r v i a lt i m e so fm i t e s s h o
11、 w e ds i g n i f i c a n t d i f f e r e n c ea m o n gt h et h r e eg r o u p s ( P 0 01 ) T h es u r v i v a lt i m eo fD f o I l i c u l o r u mi nn o r m a ls a l i n eg r o u Dw a s ( 2 3 3 3 3 9 8 ) h ,w h i c hh a ds i g n i f i c a n td i f f e r e n c ef r o mt h e5 t e at r e eo i lg e lg
12、 r o u p ( P 0 0 1 ) ;w h i l ei nt h e 2 a r i l i ne y ed r o p sg r o u pt h es u r v i v a lt i m ew a s ( 2 7 6 5 5 1 4 ) h ,c o m p a r e dw i t ht h es u r v i v a lt i m eo fc o n t r o l g r o u p ,t h e r ew a sn os i g n i f i c a n td i f f e r e f l c eb e t w e e nt h e m T h em o r t
13、a l i t yo fm i t e sw i t h i n2 4h o u r si n5 t e at r e eo i l 收稿日期 2 0 1 4 0 4 3 0 ( 0 0 2 ) 基金项目 河南省科技厅研究开发专项基金项目( 豫科攻0 7 2 1 0 3 8 1 0 6 0 1 ) ;河南医学科技攻关项目( 豫卫科2 0 0 7 0 3 0 9 2 ) 第一作者 韩雷,在读博士,助理研究员,从事眼科微生物研究,T e l :1 5 9 3 7 1 2 1 1 7 1 。E - m a i l :h a n l e i 2 0 1 3 r a y 1 6 3 c o r n 通讯
14、作者】 王丽娅,教授,博士生导师,从事眼科角膜病的l 临床与科研研究。E - m a i l :w a n g l i y a 5 5 1 2 6 C O m 1 8 8 万方数据 韩雷,等:茶树油眼用凝胶和甲硝唑滴眼液体外抗螨作用比较 g e l ,2 a r i l i ne y ed r o p sa n dc o n t r o lg r o u pw e r e1 0 0 ,2 0 a n d5 0 r e s p e c t i v e l y a n dt h e r ew a sas i g n i f i c a n t d i f f e r e n c eb e t w
15、e e nt h e m ( P 0 0 1 ) C o n c l u s i o n :2 a r i l i ne y ed r o p sh a sn oe f f e c tO i l k i l l i n gD f o a l c “l o r u m i nv i t r o ,w h i l e5 t e at r e eo i l g e lh a st h ek i l l i n ge f f e c to nD f o l l i c u l o r u mi nv i t r o T e at r e eo i lg e lc o u l db e d e v e
16、l o p e da san a t u r a ld r u gt o k i l lo c u l a rD f o l l i c u l o r u mi n h i g h e f f i e e n c y K e yw o r d s t e at r e eo i lo c u l a rg e l ;a r i l i ne y ed r o p s ;D e m o d e xf o l l i c u l o r u m ;s u r v i v a lt i m e ;m o r t a l i t y w i t h i n2 4h o u r s 毛囊蠕形螨D e
17、m o d e x f o l l i c u l o r u m 是一种常见小 型人体寄生螨虫,可寄生在眼睑睫毛毛囊内,破坏毛 囊及皮脂腺,导致眼表局部油脂分泌障碍,继而引发 睑缘炎、干眼症等眼表疾病1 2 1 。给人们的日常生 活带来诸多不便,由于人群中带虫率较高,眼科医师 急需寻找一种安全高效、价格低廉的眼用杀虫药 物。传统的治疗方法是使用2 甲硝唑滴眼液, 杀虫效率低,且长期使用该药,易导致结膜囊菌群失 调。茶树精油。4 。( t e at r e eo i le s s e n c e ,T T O ) 是从桃金 娘科互叶白干层M e l a l e u c aa l t e r n
18、 i f o l i a 枝叶中榨取的 植物精油。天然不刺激,其有效活性成分渗透力强, 可以迅速透人毛囊、皮脂腺等表皮组织,是迄今为止 发现的最强有力的天然抗菌剂1 5 4 。国外学者K o o H 等。报道将茶树精油洗液用于临床眼表抗螨治 疗,收到较好的疗效,但眼表刺激性较大,病人不易 接受。本实验通过剂型改造创新,将茶树油中加人 卡波姆,制成5 茶树油眼用凝胶剂,减少了其眼部 黏膜刺激性,利于临床应用。为验证其对毛囊蠕形 螨的杀灭作用是否高于甲硝唑滴眼液,特进行体外 杀螨试验。 1 材料 1 1 主要试剂和仪器茶树精油( 江西吉安盛大 香料有限公司,批号2 0 1 2 0 6 2 7 ,医
19、药级) ,卵磷脂( 医 药级) 、胆固醇( B R 级) 、维生素E ( 医药级) 、脱氧胆 酸钠( 医药级) 、山梨酸酯一8 0 ( C P 级) ( 均为郑州博 赛生物技术有限公司,批号分别为2 0 1 11 2 0 6 , 2 0 1 2 0 3 2 8 ,2 0 1 3 0 4 2 6 ,2 0 1 2 0 6 1 9 ,2 0 1 3 0 4 11 ) ,无水乙 醇( 郑州化工二厂,批号2 0 1 3 0 5 2 6 ,A R 级) ,卡波姆 ( 北京海淀会友精细化工厂,批号2 0 1 3 0 8 1 1 ,9 4 0 ) , 三乙醇胺( 郑州华禹生物技术有限公司,批号 2 0 1
20、3 0 8 11 ,医药级) 。2 甲硝唑滴眼液( 河南省眼 科研究所药物室配制,批号2 0 1 3 0 9 1 3 ) 。N i k o n T S l 0 0 一F 型倒置相差显微镜,N i k o nB R 型图像采集 软件系统( 均为日本尼康公司) 。恒温磁力搅拌器, 恒温箱,超声波发生器( 上海必能信超声有 限公司) 。 1 2 螨虫来源以河南省立眼科医院眼科门诊睑 缘炎患者为取螨对象。采用眼睑睫毛毛囊拔取法获 取毛囊蠕形螨。将镜检证实附着有蠕形螨的睫毛转 移置6 孔细胞板中,每孑L 收集2 0 一3 0 只活泼毛囊蠕 形螨备用。 2 方法 2 1 茶树油凝胶制备8 o 精密称取1
21、0 0g 茶树精 油,加入1 0m L 无水乙醇,超声至混合均匀,得到乳 化的类脂混悬液。用量筒量取9 0m LP B S 缓冲液 ( p H6 8 ) 置于2 0 0m L 烧杯中,将类脂混悬液滴人烧 杯中,再用超声仪超声2 0r a i n ,得半透明的茶树油混 悬液。取3g 卡波姆置于研钵中,加入2 4g 甘油,润 湿研磨,溶胀2h 后,转移置2 5 0m L 量筒中。补充 P B S 缓冲液至总体积为1 0 0m L ,制得卡波姆凝胶。将 上述制备的半透明茶树油混悬液加入卡波姆凝胶中, 加三乙醇胺调节p H6 8 7 2 ,搅拌均匀即得2 0 0m L 茶树油凝胶。凝胶中茶树精油质量分
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