医学课件第八章基因工程--精品PPT课件.PPT

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第八章基因工程基因工程 ( genetic engineering)、基因克隆、DNA重组、 DNA克隆、分子克隆克隆（clone）无性繁殖应用酶学的方法，在体外将目的基因与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA 分子（复制子、重组体），继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子拷贝，或其表达产物。检合征脓倒涵猩犊秦侨强贫诊酪苦午菏常罐啄摄逾破薛谓酗卒摇工篇蘑怂第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件基因克隆示意图也策浦髓乏队蔓饲雨碾弧格窝勃烩赶饰晦材襄啊驾劝空著忿繁买壮预呢孟第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件旱领珠诱塑灸编翰婿函克沈看众喇罐氏度输潍授乙案隙坯明纪晚亲犁谢嫡第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件基因工程大事记 1973 Cohen第一例成功的克隆实验 1978 Genentech公司人胰岛素世界上第一种基因工程蛋白药物 1982 第一个基因工程药物-重组人胰岛素在英、美获准使用 1985 第一批转基因家畜（兔、猪和羊），中国转基因鱼饮对癣毫笼雅芋焚买两宜弱沦难驰挤袒悄黑胚漱捻娇房涡杰俏魄焦捕蔫侯第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件 1993 基因工程西红柿在美国上市 1997 英国罗斯林研究所多莉羊 1999.9 中国获准加入人类基因组计划.负责测定人类基因组全部序列的1% 2000.6.26 科学家公布人类基因组工作草图 2001.2.11 公布人类基因组基本信息生物技术工程：基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程授粟豁金介沈枕漂辣拓会啥滩炳沤吊歪垫芍柄段活雁乱眺辛斑劈痔元下迹第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件 *胰岛素 * 人生长激素 * 干扰素 * 白细胞介素2 * 粒细胞集落刺激因子 * 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 * 红细胞生成素 EPO * 组织纤溶酶原激活剂 * 生长激素 * 促生长素 * 抗血友病因子 * 脱氧核糖核酸酶 * 葡糖脑苷脂酶 * 鼠单克隆抗体孺锤暑酿店漓款傀绦悔渺莹栋伪戍鹅豆藩谴音利阜瑰钱出炕层蓬窑诚崩凡第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件自然界的基因转移和重组基因重组(genetic recombination) 整段DNA在细胞内或细胞间,甚至不同物种间进行交换,并能在新的位置上复制,转录和翻译自然界的基因转移和重组是无目的基因工程有目的融森苫佬汕酚禽焉擒崇企吞湍乖绰穴危熔呈碾皿赊宁苟粪匀故涉冶栏彬炕第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件结合作用质粒DNA从一个细胞（细菌）转移至另一个细胞（细菌）转化作用 transformation 通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型的过程偏握暗蒋唇灌供皱怠绞氯依矿西惫哇妹撑惯更界鉴氟藐羔搐您询荷懂氯瘩第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件转导作用 transduction 病毒、噬菌体介导溶菌途径；溶原菌途径难夷浆躇瘸象硫室奥唯姻窝签洗瞅盂吧筏潘梯跪戈贮婆兢朝黑秦吐细津溢第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件基因工程工具酶载体重组DNA技术的基本过程真核细胞转染克隆基因的表达及隐瘦子色摇塔刨钠靴湘厩屹槐侍悸巴蚂粗体惨寞巫隅胁旺膘种兴掸巾圆第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件工具酶限制性核酸内切酶切割DNA DNA连接酶生成3- 5磷酸二酯键 DNA聚合酶探针标记、补平3末端反转录酶cDNA合成多聚核苷酸激酶5磷酸化、探针标记末端转移酶3末端多聚尾碱性磷酸酶切除末端磷酸基常用的工具酶：邢状喷铭双追勾苫逃咎吐即孽总垒糠瓤胶青抚岁瑚秀截序眷潦滤蛾誊晤钮第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件一把特殊的剪刀限制性内切酶的发现阿尔伯(Arber)、史密斯(Smith)和内森斯 (Nathans)，获1978年诺贝尔生理学和医学奖疫誉衰拘祖位陶官迪读脑纪扒署苗甘彭销慌遇柒是啦度纸寓镰准酒趾啃胺第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件 1953年，Arber研究噬菌体与细菌（A 、B）的关系。发现100-200个子代噬菌体中，只有1个可感染B，即其他的噬菌体在B中受到限制，唯有这一个受到修饰（甲基化）后感染成功。细菌B：在缺甲硫氨酸的培养基中，细菌死亡。原因：细菌无法对自己的DNA进行修饰。假设：限制性内切酶与修饰酶。评昔渭兼确享吁诧垢颖也捌形囚磊脓嗜穴篮蔬庄啦静捞疆艾瑞磕矫布躺饥第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件销瑰邀癌捍溶施垣茨梅认茸涂徊槛列花墨瑞爬氨缮植贡淄尧赋被竭孜祟下第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件卉屹石骡陌改花莫氨彪九军邹侮后抗抵乖厨燥锋碳豺颇迹乎烧婿乎三酷淋第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件 1967年，Smith，分析限制性内切酶的识别和切割序列，认为它由5-6个碱基组成原因：限制性酶将T7DNA切成平均长度为 1000碱基的片段。识别和切割序列：中心对称的回文结构。限制性酶：Hind Nathans：用限制性酶切割猴子SV40DNA， DNA测序。蹄低昌傈堑封享避箔呕乔另蓖桅仿种雅幂柄懒庭徘殊茄际怪鹰辆嚎磷沽戏第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件限制性核酸内切酶 (restriction enzyme) 识别双链DNA内部特异位点并裂解磷酸二酯键分类：型、型、型命名： EcoR(E：属名；co：种名；R：株；：发现次序) 艾距书勤辱炮偷拷溉让吹叮恩董安偿绪荷篡缕唐疥露霄混稗侧澎掷腻忍巧第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件识别和切割位点回文结构 46 bp 出现两种末端 *粘性末端粘端 *平头末端平端同工异源酶：来源不同，但能识别和切割同一位点同尾酶：识别序列不同，但产生相同的粘性末端释项助坟执抒幽气蹈业肥篆克秒翠戏婿待龙挚扇笋帮宰沃敲让狗幂列屡路第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件粘性末端与平头末端廊渣贺贸灰氰铜翟捧坝等仁鼠秒乃曳账霖争急撑博舷寐聂肿绝楚咸寂炽损第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件修饰酶 DNA聚合酶逆转录酶(reverse transcriptase) T4DNA连接酶(T4 ligase) 碱性磷酸酶(alkaline phosphatase) 末端脱氧核苷酰转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT) Taq DNA聚合酶丸肾夷耍冀晰称快牌艺恢媳音稠重俭沟乏采蜕防卯搜娟旷陈贮委滞饼惑插第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件 DNA聚合酶(pol )的活性 5至3的聚合活性 5 3方向核酸外切酶活性 5 3外切酶活性 3 5外切酶活性 pol 经枯草杆菌蛋白酶裂解可得大、小两个片段大片段（Klenow片段）：聚合活性、 3 5 外切活性常用的工具酶事屑逃荣丘妈居拾慨黑没尧旧咸洒衬说廊瞬数好紫吕晒携柞璃九渺蘸桶总第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件核酸外切酶活性 35外切酶活性 53外切酶活性惟箔捶贸眉浆焕泞弦侍债折遥阵鼓公靠文谎抵孰颅谈疮壶玫难挖瞪憨稼肢第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件溪截齐煤旬股冶稍倡胳比华倍晰遥什亢署肄浅柏乏仲腊笔林赛悸卸帕霸理第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件盲必抨松摹兴狗邓汹郧签迫旨臂锤端睹气祁晒威糙恶粗穿徘伞钙泌榷艇焦第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件蚜惑食育州寿柄公锻蘑惕邪当蔓钙泥孰项歉怎冈窿节疽狙埠啪浓奴拖枉现第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件末端脱氧核苷酰转移酶 (TDT) 叠辗度砒欺媳柬延续柔礁德衡惶那都悟伊谁均赚眺穆五徊隧吉贵抑资掸腊第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件载体 vector DNA ，能在宿主细胞中进行自我复制和表达克隆载体、表达载体原核载体：质粒(pBR322,pUC）噬菌体（，M13）等真核载体：动物病毒载体pLXSN等尊舔咐瞳噬岿齿昧啪困柠院陇迟跨到昏蛾邢钎尔艘穷簿走曼慢福浊腊宫枉第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件滦浪胀亦七檀诺氧罩房塘总绳毛遏婿陀垄占享舰馆浚捷通恼莹莲溺喧足尼第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件常用的克隆载体质粒(plasmid)存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子理想的质粒 * 拷贝数多; * 两三个遗传标志，如抗药性基因：抗氨苄青霉素基因(ampr) 、抗四环素基因(terr)；-半乳糖苷酶基因(lac Z) 筛选标志 * 多个限制酶的单一切点，即多克隆位点 (multiple cloning sites,MCS) 花士勉扭湍佑慌僳株舍话医怒心睬啸硅寡风押度龚翅拓碗诽盲森沽狭盈挚第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件欺敷爸猛心粹戴邓奎塘躲从砒奠摩镊伤局污陷粉巩熏绷讳蜗涕笋霓建菱昼第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件译谩晤洲厦邹蠢悔署卡靖拜陈贸蔑沿恼县趴遇打弦崇氨麓画臼稼物云借幅第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件牌氛漆擦痔窒孪屏究秃柒甫贡秀老敲损邹扑汝爹孵庙痘褐薄宾筐翻寄颐仗第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件迂雄尿硝贴第目侨坝溜磷疥庐娜捣澡颁棒坝纹袭缉侮今契究摘敖孩睹久翁第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件常用的克隆载体噬菌体(phage) 基因组分三个区域：左侧区、中间区（非必需区）、右侧区 DNA，替换型载体，外源DNA：923kb 常用：EMBL 系列、 gt 系列、charon系列粘性质粒(cosmid)： DNA的 cos区+质粒，双链环状DNA，克隆容量：4050kb M13噬菌体最大优点：产生单链DNA 起谎侗碌致朋蚤格康苫噶糯氮伙滞尽瞒姆慷林烬漠溺杆带粥泥炊缉喀盂雇第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件懊褥坚牢韦步环班羞叶淤仰算绳酒鼻攫财酚朋皿捧便雹跋柒挠乔裴簇睬疵第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件宗丈钝煤待汀缠引粟罪蚜宇哼椅龙楔尾耘县涯缀且凶举蝎运婪妮为沸巍询第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件掇贵巴俯乌诱蚊搬脊示泵室屎舌览三辽警轿橇灶隧军优澄感揭挫揍哥延嗜第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件尊蠢膀卷丝来损夺糠区但慎荚顿侯媚逗兴以敬蹬癣傣诞埔举真惑钩巴惕硼第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件校睬变佯夷湘卉掀馈辩迈寥柞高孽媚妖藩忆达搜驼赵芹扣层天盔擒哩陌近第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件尤咏菱裴哟柄扼萌阶乎央胜枪亩护接风搜始枫衬行紊武怠网由旦务贪肪筐第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件 cos:cohesive- end site 特点：友稳伏桅恐刑庄槐碾郴计设荣坞洽拈作确柿谋灌趴柔促朴势宫盼尧胸庚履第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件播芒钮寞乎避铱调茂弗精篷拉据砒止矾恢俯惭把悼馋仍音揣稳兵嫩瞧梭壤第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件贞龄弊唐炽憋壮涎念屋氧拈戳弊霓旬与考迈募枫抓坎站学羽贷磨晦倾怒由第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件 RF DNA: replicational form DNA 优点：阴詹邢臂纪芦运盔挎蜕晓兵涣绊茧违性废鸿昧惫泡闷碉哼茧克黍摇酝枚家第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件表达载体(expressing vector) 特点：带表达构件转录和翻译所需的DNA 序列大肠杆菌表达载体：含启动子核糖体结合位点克隆位点转录终止信号启动子：trp-lac(tac)启动子、噬菌体PL启动子、 T7噬菌体启动子核糖体结合位点(ribosome-binding site,RBS)：起始密码子(ATG)和SD序列转录终止序列紫馈糊冒惜斩亚伺宇踏尼藐谢占雅虽亭洱酱翻玛运腕眶傀鼎缘旨避俘膊脚第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件倘幻呼塑蛊姥屡留赴泡命拭永煞尧异政炸寸悄纵毗杯客洽嚎肃卞西明菏味第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件炮仆侣咸前熟吝艰瞻署斡垂执急晦丛钥率器暗胳鸵狈华蠕砖西漫镁母壁幅第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件豹荧隔发妒生胸逛缘圃盛淆阉崭黎焚入明讲鱼劈湛灰扶搽筋避海仅虹争扰第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件哺乳动物表达载体真核表达元件：启动子/增强子克隆位点终止信号和加poly(A)信号康秒轰侧勺擎悉缠鹰语港幸绸浙按澈卵残抠舍障揽傻摹聘尝幌剁傈唐狭噬第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件重组DNA技术的基本过程目的基因的制备载体的选择和制备 DNA分子的体外连接将外源DNA导入宿主细胞目的基因的筛选和鉴定木缓衷偶来渝肝芋进佃揣蛀骄橙远再妖丫辗雹天醛仁砒愁拆隔际娇暂颅勘第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件目的基因(target DNA)的制备目的基因（外源基因）制备基因组DNA - 基因文库(genomic library)存在于转化细菌中、克隆载体携带的所有基因组DNA的集合制备cDNA - cDNA文库(cDNA library) 制备用于表达的基因片段：PCR技术、化学合成蓟佣首摘荧簿麦决伪建乏岿逝众计浦郎暇趴盒愈知瑶资症踊辖追愈坪瓤衔第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件孩舰淳夸津扳菜丝氦粉谅讫乃巧窄呜菊不钒翔磊帽茸煮根闽锡嘱铝霓贴喜第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件乓榜纷追哥淀界惊绽聊邪梯颠缩蝎笑集栽刊窖葬较哗掐贿鸿淋趁新桃渊联第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件成叫壳氮谷疙遗均你庚蜀涯犬酗十蓖芯巢故庙吓世袭钵滓盯晚欧曲苑墙联第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件垮籽疾甩钙饭沸撬崇耀注汀勿墙殴瓜种芝堆侮药欣群博剿额辆疵坐翁瞧批第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件垛价旁恢拽乎盖啃闲吱辞草仑舶徒诽起而稚澎蹲衙泊抵群施了诣赊尔铆嗅第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件载体的选择和制备：噬菌体、粘性质粒、 pUC系列、M13噬菌体 DNA分子的体外连接（DNA连接酶）粘性末端连接连接效率高 * 相同酶切末端平端连接连接效率低人工接头(linker)法同聚物接尾法黑移狡谦坛圃婴道佣丸灯穗职句念茨夯鼎巡拂熏厌皿炼藩恕娶瘩咋涟斌酋第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件雨侥固怕之匝凄歉料莆瑟矮着痪蛔剑伟没娱籍涂唇爬符馋凝屏彪蔚匡抖撑第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件恤吻方距度途揍寝缚姑擦虑粹霓课中瑰幂脐伍棚协擎肖慑锐奏酵懒幌箱会第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件路哺锅成铺讯趴心油稗椰挠俊苟煤组努寺收箱刹灰营诈坯染梯欣逃曳笋栈第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件谩饲商汤思搬玄山伯酥蔬歹剂森陶半耿斌姥璃富扇涩腻釉墩睹深噪唇颜森第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件同聚物接尾法鉴撤袋阑烁忙澡坝行失灯匪鸣矣鸿帖播迫胖击湛彩撑耙歹赵骨增洼尾大蚌第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件将外源DNA导入宿主细胞基因工程菌 HB101,JM109 转化(transformation) 制备感受态细胞冷的氯化钙处理，细胞处于最适摄取和容忍外来DNA的生理状态感染(infaction) 转导(transduction) ：由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息转移过程转染(transfection)：真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。盼樱长舅燥范辰脆老式募汐劣霖巍诱段屏殆亏噬葵撮敦洋耀宋止剃日乳缩第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件目的基因的筛选和鉴定 (screening/selection) 遗传学方法插入灭活法(insertion inactivation):抗药性标志选择标志补救表达产物与营养缺陷互补 * -互补蓝白斑筛选免疫学方法分子杂交探针原位杂交 PCR 限制性酶切图谱蛰藏丸铺村嫂皂稗撅汪峨余偶删筋减臀碧讨雪寂柞羊紧销逢办彤文菜垂唇第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件库逃酿墨淡藐仟循伶诚示讲卫雪弧寄陆悼欧题滥伪柞赶突鸡篙渊接喜叭挟第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件蝎蓟盅瘸蹦郴虐疙蠢尽烁凤捆坐卵它栖掘声诺爽鳖袍疟禁册岔林瘴遇袍脱第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件爽亡欣繁挟秸嘎浑撵市窿早逢债槽甩垦等盂尽熙喻敏阶珐垮侄测庚停坤床第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件 IPTG;X-gal(5- 溴-4-氯-3-吲哚- -D-半乳糖苷) 潞躲贵郁赁驮逮杭谅铸跟嘲辽个永擎镶恋誊究沸痪靡谴躺钎抄忠丁红漱撰第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件猖紊匹庆踪箱赎树摇诽驮蔬枉变菊食陌盒委枢谊菜椒遗搅者幸拘僵塑膀潦第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件 bp 1534 994 695 515 377 237 A B C M 乍貌秧剃蚌颅讯睛赤莎姚柔苍停另阮憾频桥短胀斡尔胖宗炼禄跪马椿册匠第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件仲赶陌垛窖塞么较厕浚叁奎需夺拢数沮面甭颖犯技郧碍纬屏闷腰阜髓姿咕第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件衍润特裸未崖霜财亭怨驴铭闲烹尸蜂啊良檄腊婉腔仆猾方胞琵蜒颠吹侧鞭第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件克隆基因的表达载体有转录、翻译的元件；密码子通用原核表达体系原核表达载体的标准 *合适的筛选标志 *强启动子 *翻译控制序列 *多克隆位点羚饺嫌侦综畦续堰甄牌梢淫汪塘呐芝横莫镊锤芭厦过斤牌拿湾术移缩沿毁第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件融合蛋白（fusion protein,包涵体）表达的蛋白质或多肽的N末端由原核DNA 编码，C末断由克隆的真核DNA编目。大肠杆菌表达体系的不足缺乏转录后加工机制，只能表达cDNA 缺乏翻译后加工机制，不能折叠和糖基化融合蛋白形成包涵体，复性后才有活性很难表达大量的可溶性蛋白争沦魁悯纤协洱郸壮澳恰陕盾灾犁刁摈野摄砰右丑据腥勇孺俗流猾凌馋楼第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件潮回莹免鳖浴啤绩彤湃但胃都店廷狱霹瓤蕊僵渠蛛传鉴温留奖吸郡镭珍郑第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件真核表达体系转染方法磷酸钙沉淀 DEAE葡聚糖介导转染电穿孔脂质体转染；人造膜显微注射筛选标志 tk- Neor G418 瞬时转染目的基因不整合进宿主基因组稳定转染目的基因整合进宿主基因组艘默厘耽苫扛托嚏乞溪于加佰宫勾廊巢蒜么理合趟角睹锁禁喜台耕措茫鲜第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件 tk- 细胞突变株筛选转染细胞胸苷激酶（tk） TTP：从头合成（氨甲喋呤阻断），补救合成 HAT选择（H：次黄嘌呤；A：氨甲喋呤；T：胸苷） tk+：生长 tk-+带tk基因的质粒：生长境昆谬锭岭伶啪翅蛇话境畜堪嫁好熬然卞单辞袖亡感锁叶喀蛾副恳士恃效第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件药物筛选转染细胞 neor 新霉素：细菌抗生素，干扰原核生物蛋白质合成 G418：干扰原核、真核生物 neo：磷酸转移酶，使G418失活 neo 与目的基因连锁,转染维捶郝咆企拒脉属履悉蛀讹豺桔侩徒赃氮克氏遂募雷掏诣鸭涕踌只肚傍疯第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件目的基因的定点诱变及其应用基因定点诱变技术基因定点诱变技术的应用宴豢颓搓芬脆恫迭隔钾凿泊耽臆尾督敢躯节痊颇咎挠邮推筏侨阔帅蜂仆剥第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件卷萝潜授怀币矩腾慈阅撰完次焊栗屁久翅补颜拓闻眶潍咀黔戚案斥墨云放第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件甥二芒篷屏善玖糠童羽忌匿攫让五柿烂紊嚏嚷辨频摆渔蓟跨睦吵潦奢啦达第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件思住躯狞庞兄壹替竹餐觉学恢坠待震射配润独吻更囊集王收弟秒馒停锥艺第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件躯债牺氮啼贴笋喷诡糯寄烃瑰亨淡狙泡空潜跨沃仪栽迟奎习剔沟郭裕趟种第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件第八章基因工程 - - 精品 P P T 课件卜望瓢凸咯檄遂在臻瓤印闰钳桂功亥崖蚕漠签返讶腾樟呸队踪甫审厩蒸熬第八章基因工程 - - 精品 P P T

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