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甘草乌梅配伍化学变化的研究_15093甘草乌梅配伍化学变化的研究 作者：夏云,王静蓉,申晋艳,严永清 【关键词】 甘草乌梅 【摘要】 目的 研究常用药对甘草乌梅配伍后各类主要成分的定性及定量变化。方法 TLC定性分析两味药中主要成分的变化，用容量法及HPLC测定两味药中主要成分的含量变化。结果 配伍后乌梅中有机酸、甘草中甘草酸含量均较单味药中含量降低，同时甘草中黄酮类成分发生了异构化:异甘草苷在酸性水煎液中转变为甘草苷。结论 不同比例(1?11?5)炙甘草与乌梅配伍上清液中有机酸的含量(以柠檬酸计)随甘草比例的增加而减少。配伍组上清液中均不含甘草酸，甘草酸主要存在于沉淀中。 【关键词】 甘草；乌梅；配伍；化学变化 Chemical changes in compatibility of Fructus Mume and Radix Glycyrrhizae 【Abstract】 Objective To analyse chemical changes in compatibility of Fructus Mume and Radix Glycyrrhizae by quantitative and qualitative methods. Methods TLC,acid-base titrations and HPLC methods were used to analyse main components changes in compatibility of Fructus Mume and Radix Glycyrrhizae.Results The quantity of organic acid of Fructus Mume decreased. Flavonoid of Radix Glycyrrhizae changed.Isoliquiritin of Radix Glycyrrhizae changed into liquiritin.The quantity of organic acid in supernatant fluid was different in different ratio of Fructus Mume and Radix Glycyrrhizae.Conclusion The ratio of Radix Glycyrrhizae increased while the quantity of organic acid in supernatant fluid decreased.Glycyrrhizic acid was existed in precipitation. 【Key words】 radix glycyrrhizae;fructus mume;compatibility;chemical changes 甘草、乌梅为中医常用药对。乌梅酸平，敛虚火而生津液。甘草甘平，益脾气而生津液。两药配伍，酸甘化阴，有较强的生津止渴作用。另外乌梅酸涩，有收敛肺气，固肠止泻之功，配甘草润肺祛痰，补脾缓急，有共奏敛肺止咳，涩肠止泻之功。本文以TLC为手段，定性分析了乌梅甘草合煎液中有机酸、甘草酸、甘草黄酮类成分的变化。在此基础上，用容量法测定了不同比例配伍组水煎液中有机酸的含量，并用HPLC法检测了各配伍组上清液及沉淀中甘草酸的存在。 1 实验材料 1.1 材料 乌梅、生甘草、炙甘草均购自南京市本草药店。 1.2 药品与试剂 邻苯二甲酸氢钾(pH 4.003),硼砂(pH 9.18)(南京医药股份有限公司);甲醇(色谱纯):江苏淮阴塑料制品厂精细化工研究所;高效液相用水为自制熏蒸水，煎煮过程用蒸馏水。 1.3 仪器 pH计:Hanna Instruments;高效液相色谱仪:Shimadzu10A;检测器:Shimadzu SPD-10A;超声波清洗器:CQ250（上海必能超声有限公司）;微量分析天平:TG323A，上海天平仪器厂。 1.4 对照品 柠檬酸(分析纯):上海化学试剂采购供应站;甘草苷、异甘草苷为朱丹妮教授馈赠。 2 薄层层析分析配伍后各主要成分的化学变化 2.1 样品液制备 样品分组:乌梅、乌梅+生甘草、生甘草、乌梅+炙甘草、炙甘草；以上各组，以甘草1g为基准，乌梅与甘草配伍比例3?2，称取药材2份，浸泡1h，15倍量水、10倍量水分别煎煮,保持微沸45min、30min，过滤，合并滤液，分别按下述方法制备样品：(1)95%乙醇液:上述滤液，浓缩至小体积，真空干燥，残渣研成粉末，15ml 95%乙醇超声提取10min，浓缩至1ml，供有机酸及黄酮类成分分析。(2)正丁醇萃取液:上述滤液，以水饱和正丁醇萃取4次(每次20ml)。合并萃取液，水洗涤3次(每次20ml)，减压回收溶剂，残渣以甲醇溶解并定容至1ml，供皂苷类成分分析。 2.2 对照品溶液制备 有机酸:称取柠檬酸对照品10mg，以甲醇1ml溶解，即得；皂苷:称甘草酸对照品，2mg,以甲醇1ml溶解，即得;黄酮类:称取甘草苷、异甘草苷对照品各2mg,以甲醇1ml溶解，即得。 2.3 TLC分析 薄层板:自制硅胶G(60型)薄层板(供有机酸、皂苷分析);聚酰胺薄膜(供黄酮类分析);展开剂:醋酸丁酯甲酸水(4?2?2)上层液(有机酸)；乙酸乙酯甲醇水冰醋酸(9?1?1?0.5)(皂苷)；甲苯氯仿丙酮甲酸(4?2?4?1)(黄酮);显色剂:溴甲酚绿乙醇液(有机酸)；25%三氯化锑氯仿溶液，电吹风加热显色，UV365nm下观察(皂苷)；1.5%三氯化铝乙醇溶液，UV365nm下观察(黄酮)，结果见图13。 根据图13，配伍后柠檬酸斑点较单味乌梅变小，且颜色变浅，说明柠檬酸含量有所下降;甘草酸斑点荧光较单味甘草弱，含量略有下降，其余皂苷类成分基本无变化;配伍后，甘草中黄酮类成分有明显变化:生甘草配伍乌梅后，异甘草苷(Rf 0.167)的荧光斑点消失，同时，甘草苷(Rf 0.289)的斑点明显变大，荧光增强。炙甘草与乌梅配伍后，除甘草苷的斑点荧光略有增强，其余斑点荧光均减弱至几不可见。1.柠檬酸。2.乌梅。3乌梅+生甘草。4.乌梅+炙甘草。5.生甘草图1 有机酸的TLC分析 1.甘草酸。2.生甘草。3.生甘草+乌梅。4.炙甘草。5.炙甘草+乌梅。6.乌梅图2 皂苷的TLC分析1.生甘草。2.生甘草+乌梅。3.炙甘草。4.炙甘草+乌梅。5.乌梅。6.甘草苷。7.异甘草苷图3 黄酮的分析 3 乌梅与甘草配伍有机酸的含量测定 3.1 样品液的制备 配伍分组:(1)乌梅;(2)乌梅+炙甘草(5?1);(3)乌梅+炙甘草(4?1);(4)乌梅+炙甘草(3?1);(5)乌梅+炙甘草(2?1);(6)乌梅+炙甘草(1?1);(7)炙甘草。以上各配伍组，以乌梅2.0g为基准，每组3份样品，按比例称取药材，精密称定。15倍量水回流煎煮1h，继以10倍量水回流煎煮45min，过滤，合并滤液，得溶液a。将溶液a以蒸馏水定容至100ml，放冷后，有沉淀析出，离心(3000r/min，15min)，吸取上清液，作为供试液b。以少量蒸馏水洗涤沉淀，离心15min，弃去上清液。将沉淀真空干燥，另作分析。 3.2 水煎液的pH值测定 pH计用邻苯二甲酸氢钾(pH 4.003)，硼砂(pH 9.18)缓冲溶液校订，测定各样品液a的pH值，测定结果见表1表1 各配伍组水煎液的pH值(24.6?)根据表2，随着甘草比例的增加，各配伍组水煎液的pH值逐渐增加。 3.3 有机酸含量测定 3.3.1 氢氧化钠标准溶液的制备 称取固体氢氧化钠2.0g，精密称定，置于250ml烧杯中，以蒸馏水100m1溶解，定量转移至500ml容量瓶中，蒸馏水定容至刻度，得浓度为0.1003mol/ml的标准溶液。 3.3.2 酚酞指示剂的制备 称取酚酞约1.0g，精密称定，置小烧杯中，60ml 95%乙醇溶解，定量转移至100ml容量瓶中，蒸馏水定容至刻度。 3.3.3 样品含量测定 精密吸取各配伍组供试液b 20ml于三角瓶中，加23滴酚酞指示剂，氢氧化钠标准溶液滴定至终点。有机酸含量以柠檬酸计算，每毫升氢氧化钠溶液相当于7.005mg柠檬酸(C6H8O7?H20)，测定结果见表2。表2 各配伍组中有机酸含量根据表2，随着乌梅比例的减少，各配伍组上清液中有机酸的含量逐渐降低。 4 甘草酸的HPLC检测 4.1 样品液制备 （1）上清液样品:溶液b用微孔滤膜抽滤，精密吸取2ml滤液置5ml容量瓶中，加入0.5m1无水乙醇，再以蒸馏水定容至刻度。（2）沉淀样品:取各配伍组沉淀0.1g，10ml 50%乙醇超声提取10min，过滤，滤液进行HPLC检测。 4.2 色谱条件 色谱柱:Shimadzu ODS(4.6×150mm);流动相:甲醇-水-冰醋酸(69?30?3);流速:1ml/min;检测波长：248nm；灵敏度:0.04。 4.3 样品检测 按上述色谱条件，进样20l，所得结果见图4。根据图4，配伍组上清液中，甘草酸峰消失，配伍组沉淀中，甘草酸峰出现。图4 甘草酸的HPLC分析 5 讨论 现代有关甘草、乌梅的化学成分研究较多1，2，但对两药合煎后的化学成分研究较少，有研究表明中药的复方制剂在合煎中有些化学定理: 不在同一直线上的三个点确定一个圆. （尺规作图）成分发生了变化，这些化学成分的变化可能对药理作用有影响3，4。本研究结果提示：（1）pH值测定与溶液体积相关，为保持样品弧、半圆、优弧、劣弧：弧：圆上任意两点间的部分叫做圆弧，简称弧，用符号“”表示，以CD为端点的弧记为“”，读作“圆弧CD”或“弧CD”。半圆：直径的两个端点分圆成两条弧，每一条弧叫做半圆。优弧：大于半圆的弧叫做优弧。劣弧：小于半圆的弧叫做劣弧。(为了区别优弧和劣弧，优弧用三个字母表示。)间测定平行性，并真实反应水提过程中煎液pH值，采用回流煎煮方法，保持水体积恒定，进行pH值测定。（2）甘草酸在酸性水溶液中几乎不溶。水提液热滤冷却后，绝大部分甘草酸以沉淀形式析出。同时配伍组中甘草比例增加，沉淀增多，则吸附有机酸也增多。TLC检测证实在甘草比例较多的配伍组沉淀中确实含有较多的柠檬酸，这可能是有机=0 <=> 抛物线与x轴有1个交点；酸含量下降的主要原因。甘草酸为甘草中主要有效成分，它与乌梅配伍186.257.1期末总复习及考试后，由于乌梅的酸性而在水溶液中以沉淀形式存在，这一现象对于该方的疗效可能会有不利影响。（3）异甘草苷为查耳酮类化合物，该类成分在酸性条件下会转变成相应的异构体二氢黄酮类成分，因此在合煎过程中，由于乌梅的酸性，可能导致甘草苷发生了变化，转变为相应的二氢黄酮，即甘草苷。在生甘草配伍组中，异甘草苷发生了异构化而（1）二次函数的图象(抛物线)与x轴的两个交点的横坐标x1，x2是对应一斑点消失，甘草苷的斑点则由于异甘草苷的转化而增大。在炙甘草配伍组中，大部分黄酮类成分在酸性条件下被破坏，而甘草苷的含量则由于（1) 与圆相关的概念：异甘草苷的异构化而得以保持。（4）甘草中黄酮类成分与乌梅配伍(3)若条件交代了某点是切点时,连结圆心和切点是最常用的辅助线.（切点圆心要相连）后，由于乌梅的强酸性而有较明显变化:异甘草苷转变为甘草苷。这一定义：在RtABC中，锐角A的对边与斜边的比叫做A的正弦，记作sinA，即;变化与煎煮时间、配伍比例的关系还有待于进一步研究。 【参考文献】 若a<0，则当x<时，y随x的增大而增大；当x>时，y随x的增大而减小。1 刑国秀，李楠，王童，等.甘草中黄酮类化学成分的研究进展.中国中药杂志，2003,28(7)：593. 2 沈红梅，易杨华，乔传卓，等.乌梅的化学成分研究.中草药，1995,(2):12. （3）圆内接四边形：若四边形的四个顶点都在同一个圆上,这个四边形叫做圆内接四边形.3 王静蓉，马宗瑜，严永清，等.芍药甘草配伍化学变化研究.时珍国医国药，2000，11(2)：102. 4 夏云，李志明，朱丹妮.生脉散复方化学动态变化与药效关系的研究生脉散复方化学的研究.中国中药杂志，1998,23（4）：230. 声明：版权归原作者所有，如果侵犯了你的版权，请第一时间和我联系，我将立刻做出处理！