最新中医实验研究的思路-PPT文档.ppt
3小鼠四诊检测指标及方法 标准采集： （1）体重 （2）腋温（） （3）爪和尾显微数码拍照（计算机图像处理，提取反映红色程度的r值） （4）晚间35s旷场自主活动计数（跨格数的水平移动、前肢离地数的垂直移动） （5）瘤体积（cm，计算公式：abb/2，a代表肿瘤的长径，b代表肿瘤的短径） （6）估算瘤重（g，瘤重=瘤体积） （7）生存时间,结果 1不同组别荷瘤小鼠生存情况,图2 所有荷瘤小鼠生存情况,2荷瘤小鼠不同阶段四诊的演变 （1）总体上，荷瘤小鼠肿瘤体积呈持续增长；去瘤体重呈抛物线状，中晚期增长平缓）。,图3 所有荷瘤小鼠估算瘤重（g）增长情况 图4 所有荷瘤小鼠体重（g）增长情况 以上分别反映什么证候？,（2）荷瘤小鼠好奇和自主活动持续下降。旷场检测小鼠水平和垂直运动减少。 （3）荷瘤小鼠腋温持续下降，下降幅度大，严重时降幅达9%！,图5 所有荷瘤小鼠旷场活动情况 图6 所有荷瘤小鼠腋温（）改变情况 以上分别反映什么证候？,（4）荷瘤小鼠爪、尾颜色变淡，反映红色程度的r值下降。其中，爪r的变化显著，严重时降幅达9.2%！,图7 所有荷瘤小鼠爪、尾r值演变情况 以上反映什么证候？,3荷瘤小鼠不同阶段证候的演变 方法各证型权重、辨证阈值及称谓 痰瘀邪盛=各小鼠瘤重/所有小鼠瘤重均数。大于1.5为邪毒甚，大于2为邪毒壅盛；小于0.75为邪较弱；0.5为邪弱。 阴虚程度=各小鼠正常或去瘤体重/正常组体重均值。小于0.9为阴偏虚，小于0.8为阴虚。,气虚程度=各小鼠水平移动数/正常均数×0.6+各小鼠垂直移动数/正常均数×0.4。大于1.5为气盛，小于0.5为气虚。 阳热程度=各小鼠校正腋温/正常均数×0.3+各小鼠爪校正r/正常爪r均数×0.5+各小鼠尾校正r/正常尾r均数×0.2。大于1.02为阳偏盛，小于0.98阳偏虚，小于0.95阳虚。 阳气程度=气虚程度×0.2+阳虚程度×0.8。大于1.1为阳气盛，小于0.85为阳气虚。,结果如下： （1）邪毒证候盛衰的演变 肿瘤增长的快慢标志着邪毒的盛衰。荷瘤小鼠肿瘤增长迅速者早期偏多，以后逐渐减少；肿瘤增长缓慢者所占比例逐渐增加，可能与存活时间较长的小鼠肿瘤细胞增生不活跃和体质较好有关。,图8 所有荷瘤小鼠肿瘤大小分布与演变,（2）不同虚证的发生及演变 与人类类似，随着病情的发展，荷瘤小鼠虚证出现的频率增加（为简捷明了，合并阴虚含阴偏虚、阳虚含阳偏虚、阳气虚含阳气偏虚）： 从不同虚证的程度看，气虚的程度最严重，其次是阳气虚。阳热下降恒定，但幅度小，阴虚则不一致，推测与实验后期所存活动物体质相对较好有关：,图9 所有荷瘤小鼠合并虚证的分布与演变 图10 所有荷瘤小鼠阴、阳、气虚演变情况,研究发现： 1）接种后的第7天，证候以邪毒为主，虚证无证可辨接近半数，虚证以单证居多。 2）接种后的第14天。总体进入中期，邪毒已不是重点，肿瘤体积居中的增加，并保持下去。阴虚和偏阴虚占16，明显增加；气虚比例也显著上升；阳偏虚、阳虚的比例大幅上升，并均保持下去。对于阳虚如此高发，以往未见报道，可能是小鼠的特点。该阶段死亡以阳气虚为主要原因，因此，扶持阳气十分必要。此时阴虚多为气阴两虚、阴阳两虚，仅1例为单纯阴虚。 3）第18天，邪毒大多不甚；阳虚比例下降，可能与剩余动物体质较好有关；该阶段，单纯阴虚出现3例，有所增加。,4）第21天，该阶段小鼠出现大量死亡，集中在阳气虚、阴阳两虚。由于阳虚普遍发生，已无单纯的阴虚。 5）第25天，已进入晚期，该阶段小鼠出现大量死亡，集中在阳气虚、阴阳两虚。 6）第28天，该阶段小鼠出现大量死亡，集中在阳气虚。提示，晚期保护阳气的重要性。 7）第32天，阳虚减少，而阳气虚增加，提示气虚程度的严重。,（3）兼证及其演变 与人类类似，随着病情的发展，荷瘤小鼠虚证兼证的比例增加。趋势是无证可辨的数量和比例下降，单证的数量和比例下降；两证组合变化不大；而三个兼证组合者显著增加，四诊组合从无到有，有增加趋势：,图11 不同时期荷瘤小鼠证候比例的演变,4荷瘤小鼠的预后 是否能在荷瘤小鼠出瘤的早期，依据其证候或体质，判断其预后？ 方法：求出同一日死亡小鼠不同证候的权重平均值，与生存天数比较。采用SPSS 11.5统计软件进行相关分析。 结果： （1）痰瘀邪盛程度与预后的相关系数为-0.539，P=0.01，具有统计意义，提示荷瘤小鼠早期肿瘤增长迅速者，预后差。,图12 痰瘀邪盛证候程度与预后的关系,（2）阴虚程度与预后的相关系数为-0.316，P=0.15，提示早期阴盛（体重较重者）预后不佳。 （3）气虚程度与预后的相关系数为0.275，P=0.21，提示早期气虚程度严重者，预后较差。,图13 阴虚证候程度与预后的关系 图14 气虚证候程度与预后的关系,（4）阳热程度与预后的相关系数为0.236，P=0.29，提示早期阳热虚程度严重者，预后较差。 （5）阳气虚程度与预后的相关系数为0.287，P=0.19，提示早期阳气虚程度严重者，预后较差。,图15 阳热证候程度与预后的关系 图16 阳气虚证候程度与预后的关系,从以上结果可见： 1）早期肿瘤增长迅速，体积大，邪毒壅盛者，预后不良。这是决定预后的主要原因。 2）早期气盛略优于气虚，阳气盛略优于阳气虚。 此外，我们还观察到： 3）实验中，腋温下降、体重持平和下降是预后差的重要标志。一旦腋温或体重下降，多濒临死亡。与阳气衰竭、阴虚液脱类似。 总之，痰瘀邪盛证候与预后的关系最为密切，痰瘀邪盛证候越重，其生存期越短。其次与预后有关的证候依照密切程度为阳气虚、气虚、阳热。,5不同处方疗效的比较 依据荷瘤小鼠虚证复杂和严重程度，以及生存天数，总体上癸、己、庚、辛等4张处方疗效较好，而丙、丁、戊、壬4张处方疗效较差。那么以上疗效的取得，单纯取决于处方，还是由于分组偏倚，尤其是那些早期邪毒壅盛证候的小鼠分配到那些疗效不好的组别中所造成的？我们把疗效较差的丙、丁、戊、壬4张处方组别合并，把疗效较好的癸、己、庚、辛等4张处方组别合并，与模型和正常对照。结果如下：,（1）邪毒壅盛程度 疗效较差的4个组别，早期肿瘤邪毒壅盛，因而其疗效差异的主要原因可能是分组偏倚所造成的。鉴于第一次检查是在用药后第2天，所以其差异可能还与不同处方疗效有一定的联系。,图17 疗效优劣组别肿瘤邪毒盛衰的演变,（2）阴虚、气虚、阳热、阳气程度 早期不同组别的阴虚、气虚、阳热、阳气程度类似，以后逐渐有了差别。这种差别可能是肿瘤自然发生的，也可能受到了药物影响。,图18 疗效优劣组别阴虚程度的演变 图19 疗效优劣组别气虚程度的演变,图20 疗效优劣组别阳热程度的演变 图21 疗效优劣组别阳气盛衰程度的演变,
