新课动物细胞融合与单克隆抗体-PPT课件.ppt

蛇身 马首 鹿角 兽脚 鹰爪 鱼鳞 虎须 鬣尾 （lie） 植物体细胞杂交过程： 植物细胞A植物细胞B 去除细胞壁去除细胞壁 原生质体A原生质体B 诱导融合 融合的原生质体 再生出细胞壁 杂种细胞 细胞分裂（脱分化） 分化发育（再分化） 愈伤组织 杂种植株 原生质体 的制备 原生质体 的融合 筛选 组织培养 1、如果让动物细胞进行融合/杂交，应注 意动、植物之间的哪些区别？ 无细胞壁 全能性受限制，不能发育成杂种动物 动物细胞融合与植物细胞杂交的不同： 无需去除细胞壁 不能培养成新的动物个体 细胞融合是正常的生命活动 两个细胞正在融合 受精作用 A细胞 B细胞 人工诱导 1.1动物细胞融合的概念 杂交细胞 动物细胞融合（也称细胞杂 交）：是指两个或多个细胞融 合形成一个单核细胞的过程。 一、动物细胞融合 细胞膜的流动性 灭活病毒、PEG、电激等 融合后的细胞进行有丝分裂 ，形成完整的杂交细胞 诱导的手段？ 融合后细胞的类型？ AB杂种细胞遗传物质 有什么特点？ 三种AA、AB、BB（A、B） 含两种生物的遗传物质 1.2动物细胞融合过程 原理？ 1.2动物细胞融合过程 为什么灭活的 病毒能作诱导剂 ？ 灭活丧失感染性 保留融合活性 灭活病毒诱导细胞融合的原理：灭活病毒诱导细胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与 细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相 凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子 重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活灭活是指用物理或化学手段使病毒或细是指用物理或化学手段使病毒或细 菌菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体失去感染能力，但并不破坏这些病原体 的抗原结构。的抗原结构。 P52P52生物技术资料卡生物技术资料卡 意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘 杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成 为可能。 这一项技术成为研究细胞遗传、细胞 免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 。 应用： 最重要的用途是： 制备单克隆抗体 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合 原理细胞膜的流动性、植 物细胞全能性 细胞膜的流动性 细胞融合 的方法 去处细胞壁后诱导原 生质体融合 使细胞分散后诱 导细胞融合 诱导方法 物理（离心、振荡、 电刺激） 化学（聚乙二醇） 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒（P52） 用途获得杂种植株制备单克隆抗体 小结：一、动物细胞融合（细胞杂交） 1.概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个 细胞的过程。 2.结果： 形成含有2或多个细胞遗传物质的单核杂交细胞 3.融合原理： 细胞膜的流动性 4.诱导方式 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒 5.意义： Ø 突破有性杂交局限，使远缘杂交成为可能 Ø 广泛应用多个领域 Ø 重要用途：制备单克隆抗体制备单克隆抗体 强调：强调：效应效应B B淋巴细胞是淋巴细胞是 能够产生抗体的能够产生抗体的B B淋巴细淋巴细 胞，下文将其简称为胞，下文将其简称为B B淋淋 巴细胞巴细胞 抗体：能够与抗原发生特 异性结合的免疫球蛋白。 能产生抗体的细胞是浆细 胞（即效应B细胞）。 二、单克隆抗体 B B淋巴细胞淋巴细胞 效应效应B B淋巴细淋巴细 胞胞( (浆细胞浆细胞) ) 记忆记忆B B淋巴细淋巴细 胞胞 分化分化 抗体的传统生产方法： 从 血 清 中 分 离 抗 体 该法制备抗体的特点（缺陷） ： 产量低、纯度低，且抗体的 特异性差、灵敏度低。 多 种 效 应 B 细 胞 动 物 体 内 多 种 抗 体 抗 原 抗原 动物体 刺激 浆细胞 抗体 抗体不纯抗原不纯 反复注射 读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞 可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只 分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的 单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 2.1单克隆抗体的概念 单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学性 质单一、特异性强的抗体 科学家的设想：克隆（无性繁殖）单一的B淋 巴细胞，形成细胞群，产生大量高纯度抗体。 存在的困难：体外培养的B淋巴细胞不可无限增殖 问题1：哪种细胞可以无限增殖呢？ 骨髓瘤细胞 问题2：怎样让细胞既能大量繁殖，又能产 生专一抗体呢？ B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,制 备单克隆抗体 怎样获得大量高纯度抗体呢？ 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖 杂交瘤细胞 动物细胞培养技术 设计方案： 动物细胞融合技术单克隆 抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞 19751975年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦和和柯勒柯勒的实验的实验 为什么给小鼠注射 特定的抗原蛋白？ 会有几种融合方式 ？ 杂交瘤细胞是如何 筛选出来的？有何特 点？ 是否所有的杂交瘤 细胞都能产生专一性 抗体？ 如何大规模进行培 养得到大量的单克隆 抗体？ BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤） （一选）选 择性培养基 ：只有杂交 瘤细胞才能 存活 获得产生相应 抗体的B细胞 （二选）：选 能产生所需专 一抗体的杂交 瘤细胞(多孔培 养板) 体外培养体外培养 小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养 杂交瘤细胞特点杂交瘤细胞特点 ：既能产生特异既能产生特异 性抗体，又能大性抗体，又能大 量增殖。量增殖。 杂交瘤细胞有何特点？杂交瘤细胞有何特点？ 本过程利用的哪些技术？本过程利用的哪些技术？ 用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合的杂交瘤细胞，继 承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的 能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单 克隆抗体 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生 的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体 。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆 的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。） 细胞融合技术、动物细胞培养技术 单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗 体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺 序是？ 2.3单克隆抗体的应用 诊断试剂最广泛应用 准确、高效、简易、快速 单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏 度高，并能大量制备。 （如同位素标记（如同位素标记 单克隆抗体，可单克隆抗体，可 诊断肿瘤、心血诊断肿瘤、心血 管畸形等）管畸形等） （2 2）治疗疾病：）治疗疾病： 运载药物：运载药物： 生物导弹生物导弹 = = 单克隆抗体单克隆抗体 + + 药物，药物，治疗肿瘤治疗肿瘤 (“(“生物导弹生物导弹” ” 单抗制导瞄准，药物为弹药单抗制导瞄准，药物为弹药) ) 主要用于癌症治疗 瞄准癌细胞的生物导弹 优势：既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。 两个过程 动物细胞培养过程 单克隆抗体制备过程 三个“一” 一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒 一个新细胞杂交瘤细胞 一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势 【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 （ ） A.离心 B.灭活的病毒 C.电刺激 D.振动 【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（ ） A. 具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B. B.能无限增殖 C.可形成新个体 D.培养过程会贴 壁 【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（ ） A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞 B B A 【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单 克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴 细胞 B.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋 巴细胞 【例5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （ ） A. B淋巴细胞 BT淋巴细胞 B. C骨髓瘤细胞 D杂交瘤细胞 A D 【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下 列实验步骤中错误的是（ ） A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴 细胞 B用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞 C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴 细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 D筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的 细胞群，培养后提取单克隆抗体 B × B 体外培养 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 足够数量的细胞群 注射到 小鼠腹腔 A C 7.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产 破伤风杆菌的实验方案 制备单克隆抗体 不能，没有注射抗原，无法获得产生 单一抗体的B淋巴细胞。 (1)该实验方案的目的是： (2)该方案能达到预期效果吗？为什么？ (3)A是从小鼠的脾脏中取得_ 该 细胞能够产生_ 。 (4).图中B为_过程，常 用_诱导，该细胞继承 双亲细胞的遗传特性，既能_ _,又能_。 B淋巴细胞 抗体 细胞融合 灭活的病毒 分泌专一抗体 迅速大量增殖