第3章中药制剂杂质检查.ppt

第三章 中药制剂的检查 本章重点： 1、掌握一般杂质的检查原理和方法。 2、熟悉杂质限量计算方法及特殊杂质的检查原理。 3、了解农药残留量和黄曲霉毒素的检查方法。,中药制剂的检查包括： 制剂通则检查 一般杂质检查 特殊杂质检查 微生物限度检查,一、杂质的来源： 1、杂质：指无治疗作用但超过一定限度可能对人体 产生危害或影响药物质量的物质。 杂质定义内涵： 有毒副作用的物质。 本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的 物质。 中药制剂评价：首先是效力及其副作用；其次就是所 含杂质的程度及其影响。,第一节 中药制剂杂质检查,2、杂质的分类： 一般杂质：如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中。 特殊杂质：指某制剂的生产或贮藏过程中，根据其来源、生产工艺和药品的性质可能引入的杂质。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文该制剂的检查项下。 3、杂质来源： 由中药材原料中带入； 在生产过程中引入； 贮存过程中，制剂的理化性质改变而产生。,二、杂质限量：指药物中所含杂质的最大允许量。通常用百分之几（）或百万分之几（ppm）来表示。药典中规定的杂质检查均为限量(或限度)检查。 杂质量 杂质限量 杂质量,药品合格,药品不合格,三、杂质限量计算： 1、杂质限量检查方法： 与标准溶液进行对比：最常用杂质限量检查方法。按供试品杂质限量取与被检杂质相同的纯物质或对照品配制成标准溶液，与供试品的溶液，在相同条件下处理，比较反应结果，从而确定杂质限量是否超过规定。 供试品 供试品溶液 同一条件下反应 对照品 对照品溶液 颜色 比色 浑浊 比浊 色斑 比较色斑 特点：不需知道供试品中杂质的准确含量。,灵敏度法：系指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现。如肉桂油中重金属的检查。取肉桂油10ml，加水10ml与盐酸1滴，振摇后，通硫化氢气使饱和，水层与油层均不得变色。 特点：不需对照物质。 2、杂质限量计算方法：,杂质限量计算方法包括杂质限量计算、供试品取样量计算、标准溶液浓度计算、标准溶液取样量计算。即分别计算L、V、C和S。书中的例子，例1是杂质限量计算，例2是供试品取样量计算。,例3、检查维生素C中的重金属时，若取样量为1.0g，要求含重金属不得过百万分之十，问应吸取标准铅溶液（每1ml含0.01mg的Pb）多少ml？,杂质限量计算应注意：单位是否统一。供试品是否稀释。表示方法为%或ppm。,3、药典中未规定检查的项目： 在正常生产和贮存过程中不可能引入的杂质。 含量甚微，对人体无不良影响的杂质。 认识尚不够的杂质。,第二节 一般杂质的检查方法,一般杂质检查规则: 1、遵循平行操作原则: （1）仪器的配对性：如盛装供试品和对照品的纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过2mm，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致。 （2）对照品与供试品的同步操作。 2、正确的取样及供试品的称量范围：1g不超过±2%，1g不超过±1%。 3、正确应用比色、比浊、比色斑等方法。 4、检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份。,一、重金属检查法: 1、重金属：在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。一般分子量大于40。 2、在酸性溶液中检查重金属，以硫代乙酰胺作为显色剂；凡溶于碱不溶于稀酸的药物，均在碱性溶液中以硫化钠试液作为显色剂。 3、在药品生产中遇到铅的机会较多，而且铅易积蓄中毒，故检查重金属时以铅为代表。,4、基本原理： 在弱酸性条件下： Pb2+H2S PbS+2H+,在碱性条件下： Pb2+S2- PbS,5、检查方法：中国药典2010年版规定重金属检查方法有四种。前三种为比色法，最后一种为比色斑法。均是用供试品溶液与标准溶液比较，四种方法的适用范围不同。讲具体方法之前先说几个概念： 标准铅溶液的制备：称取硝酸铅0.160g（含铅约0.1g），置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液lOml，置lOOml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于lOug的Pb)。 注意：标准铅溶液应在临用前精密量取标准铅贮备液新鲜稀释配制（防硝酸铅水解造成误差）。配制与贮存用的玻璃容器均不得含铅。,硫代乙酰胺试液的配制：取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100ml，置冰箱中保存。临用前取混合液（由1mol/L氢氧化钠溶液15ml、水5.0ml及甘油20ml组成）5.0ml，加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml，置水浴上加热20秒钟，冷却，立即使用。 硫化钠试液的配制：取硫化钠1g，加水使溶解至10ml，即得。 本液应临用新制。,醋酸盐缓冲液（PH值为3.5）的配制：取醋酸铵25g，加水25mL溶解后，加7mol/L盐酸溶液38mL，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节PH值为3.5（PH计测定），用水稀释至100mL，即得。 中药材和中药制剂中的铅等重金属通常处于有机状态，有机成分往往会严重干扰测定，必须采用合适的方法破坏这些有机物。常用的破坏方法有湿法消化和干法消化。 湿法消化是用强酸溶液进行有机破坏，所用溶剂均有强氧化性，常用的试剂有以下三种： 硝酸高氯酸法：该法破坏能力强，反应剧烈，故进行破坏时必须注意不要将容器中溶液蒸干而引起爆炸。有机成分经破坏后，得到的无机金属离子一般呈高价态。该法适用于血，尿、组织等生物样品和动植物药制剂的有机破坏，不能用于含氮杂环成分的药物的破坏。,硝酸硫酸法：适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的无机金属离子均为高价态。不适用于与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属离子的测定。 硫酸硫酸盐法：样品中加入浓硫酸作氧化剂，加入硫酸盐提高硫酸的沸点，增强硫酸的氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失。常用于含砷或锑药物中有机物的破坏，破坏得到的无机金属离子多为低价态（如三价砷或锑）。 湿法消化所用仪器一般为硅玻璃或硼玻璃制成的凯氏瓶，所用试剂应为优级纯，水应为去离子水，试验应在通风橱内进行。,干法消化：将有机物灼烧灰化达到分解目的。 将适量样品置于瓷坩锅、镍坩锅或铂坩埚中，常加 无水Na2CO3或轻质MgO以助灰化。混匀后，先小火加热， 使样品完全炭化，然后放入高温炉中灼烧，使其灰化完 全即可。 干法消化适用：湿法不易破坏完全的有机物； 某些不能用硫酸等进行破坏的有机药物。 不适用：含易挥发性金属（如汞、砷等）的药物中有机 物的破坏。 注意事项： （1）加热或灼烧时，应严格控制温度，防止金属化 合物的挥发。如温度在700以上，多数重金属盐都 有损失。 （2）一定要灰化完全。 （3）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但不 要轻易弃去。,第一法 取25ml纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml后，加水或该药品项下规定的溶剂稀释成25ml，乙管中加入该药品项下规定的方法制成的供试液25ml；若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与乙管一致；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。 适用范围：适用于不需经有机破坏且能溶解在酸性溶液中的药品的重金属限量检查。,第二法：原理与第一法相同，适用范围不同。 取炽灼残渣项下遗留的残渣（经干消化法破坏有机物），加硝酸0.5ml（加硝酸也是为破坏未除净的有机物），蒸干，至氧化氮蒸气除尽(或取供试品一定量，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.51.0 ml，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500600炽灼使完全灰化)，放冷，加盐酸2m1，置水浴上蒸干后加水15ml（加盐酸的目的是生成金属氯化物而溶出重金属，水浴蒸干除去多余盐酸），滴加氨试液至对酚酞指示液显中性（就是加氨试液边加边搅直到溶液刚显红色为止，调中性的目的是便于pH3.5的醋酸盐缓冲液把供试液调到弱酸性），再加醋酸盐缓冲液 (pH3.5)2ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加水稀释成25ml，即制成供试品溶液。,另取配制供试品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水15ml（模拟供试液的配制条件），微热溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水稀释成25ml；照第一法检查（即也是两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，供试品管中显出的颜色与标准品管比较，不得更深）。 适用范围：适用于需灼烧除去有机物，且能溶解在酸性溶液中的药品的重金属限量检查。,第三法:硫化钠法。与前两种方法不同，是利用在碱性条件下硫化钠与重金属离子作用生成不溶性硫化物的性质进行比色检查。 甲管：标准铅溶液适量 + 氢氧化钠试液5ml + 水20ml置纳氏比色管中 + 硫化钠试液5滴，摇匀； 乙管：供试品适量 + 氢氧化钠试液5ml + 水20ml溶解置纳氏比色管中 + 硫化钠试液5滴，摇匀； 两管比较，乙管颜色不得比甲管深。 适用范围：适用于检查能溶于碱而不溶于稀酸的药品中的重金属。,注意： 硫化钠试液稳定性与硫化钠纯度有关。应用分析纯级的硫化钠配制硫化钠试液并贮存于棕色瓶中，可保存12个月。 若供试品本身能生成不溶性硫化物时，可加入掩蔽剂消除干扰。如ZnSO4中重金属的检查，要在碱性下加KCN掩蔽Zn2+后，依第三法检查。,第四法:微孔滤膜法 仪器装置: 滤器由具有螺纹丝扣并能密封的上下二部，以及垫圈、滤膜和尼龙垫网所组成。A为滤器上盖部分，入口处应能与50ml注射器紧密联接；B为连接头；C为垫圈(外径10mm，内径6mm)；D为滤膜，直径10mm，孔径3.0m，用前需在水中浸泡24小时以上；E为尼龙垫网(孔径不限)，直径10mm；F为滤器下部，出口处套上一合适橡皮管。,标准铅斑的制备: 精密量取标准铅溶液一定量，置小烧杯中，用水或该药品项下规定的溶剂稀释成10ml，加入醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与硫代乙酰胺试液1.0ml,摇匀，放置10分钟，用50ml注射器转移至上述滤器中进行压滤(滤速约为每分钟1ml)，滤毕,取下滤膜，放在滤纸上干燥，即得。 检查法: 取照各药品项下规定方法制成的供试液10ml，照标准铅斑的制备，自“加入醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml”起，依法操作,将生成的斑点与标准铅斑比较,不得更深。,适用范围：适用于重金属杂质限量低（含25g）的品种及有色供试液的检查。 注意：若供试溶液有浑浊，应用滤膜进行预滤，可多次更换滤膜，直至最后滤膜上无沉淀；然后取滤液10ml,照标准铅斑的制备,自“加入醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml”起，依法操作并照上述检查法中所述比较，即可。 注射器压滤要均匀，以保证铅斑色调均匀。过滤时滤器中气泡应除去。,6、重金属检查法的注意事项： 方法灵敏度：标准铅液的用量以2ml （含标准铅20µg ）为宜。小于10µg或大于30µg，呈色太浅或太深均不利于目视比较。 反应条件：硫代乙酰胺试液与重金属反应的最佳pH值是3.5，故配制醋酸盐缓冲液（PH值为3.5）时，要用PH计调节。硫代乙酰胺试液加入量以2ml时呈色最深，最佳显色时间为2分钟（第四法中检测限度为25g的铅，且体积小，所以用量为1.0ml,且为方便过滤，显色时间为10分钟）。 有色供试液的处理：供试品在加硫代乙酰胺试液以前如带色，可用稀焦糖液或加常用的指示剂调整标准溶液，使两者颜色一致。 其他离子的干扰： 若供试品中有微量Fe3+存在，会氧化硫化氢生成乳硫（单质硫），干扰比色，加入抗坏血酸（维生素C，水溶性维生素，有很强还原性）还原Fe3+为Fe2+，可消除干扰。,当使用盐酸超过1.0ml、氨试液超过2.0ml，以及用硫酸或硝酸进行有机破坏，或加入其他试剂进行处理者，对照溶液应取同样量试液蒸干后，依法检查。 供试品如为铁盐，应在检查重金属前把铁盐除去。可利用Fe3+在比重为1.1031.105的盐酸（盐酸9ml与蒸馏水6ml的混合液）中成为HFeC162-，可用乙醚提取而除去，再将酸性溶液加氨试液使呈碱性后，用氰化钾作为微量铁盐的掩蔽剂（氰化钾为无机掩蔽剂，碱性条件下与铁形成稳定络和物），再加硫化钠试液测定。（因氰化钾有剧毒，用后不得倒入酸缸中）。 重金属检查前处理：需将药品灼烧破坏，使有机物分子中的重金属游离。灼烧时炽灼温度必须控制在500600。若灼烧温度在700以上，多数金属盐有不同程度破坏，如铅700灼烧6小时损失68%。 其他：书上的条均在前面讲过，重点看第条。 含有Pb2+的中性或弱酸性溶液，不可用滤纸过滤。如需过滤，可加入对酚酞呈微碱性的饱和醋酸铵溶液，温热后用直径较小的定量滤纸滤过，或者选用玻砂漏斗过滤。,1、重金属检查中，加入硫代乙酰胺时溶液控制最佳 的pH值是（ ） 1.5 B. 3.5 C7.5 D. 9.5 E. 11.5 2、微孔滤膜法是用来检查（ ） 氯化物 B. 砷盐 C. 重金属 D. 硫化物 E. 氰化物 3、中国药典(2005年版)重金属检查法中，所使用的 显色剂（ ）(多选) 硫化氢试液 B. 硫代乙酰胺试液 C. 硫化钠试液 D. 氰化钾试液 E. 硫氰酸铵试液,4、能溶于水或稀酸的药物进行重金属检查时，适宜的条件 是（ ） 用硫代乙酰胺为标准对照液 B. 用10ml稀硝酸酸化 C. 加pH3.5醋酸盐缓冲溶液 D. 用硫化钠为试液 E. 结果需在黑色背景下观察 5、不溶于稀酸而溶于碱的药物，欲进行重金属检查，应采 用中国药典上收载的重金属检查的哪种方法（ ） A. 一法 B. 二法 C. 三法 D. 四法 E. 五法 E. 以上都不对,二、砷盐检查法：对药品中微量砷（以As计算）的限量的检查方法。在药物的杂质检查中，砷盐限量一般不超过百万分之十。中国药典规定的检查方法是古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）。 第一法 古蔡法 1、基本原理：采用锌和酸作用产生的初生态氢与供试品中微量砷盐化合物反应生成挥发性砷化氢，再与溴化汞作用生成黄色或棕黄色砷斑。比较供试品与标准砷溶液在同一条件下所显的砷斑的颜色深浅，以检查供试品的含砷限度。反应式如下： As033- + 3Zn + 9H+ AsH3+ 3Zn2+ + 3H20 产生砷化氢与溴化汞试纸作用 AsH3 + 2HgBr2 2HBr + AsH(HgBr)2 (黄色) AsH3 + 3HgBr2 3HBr+ As(HgBr)3 (棕色) As(HgBr)3 + AsH3 3HBr + As2Hg3 (黑色) 反应以生成黄色、棕色色斑为主。,本检查法要加入碘化钾和酸性氯化亚锡还原剂，加入的目的为： 还原As5+为As3+，加快反应速度。 AsO43-+2I-+2H+AsO33-+I2+H2O AsO43-+Sn2+2H+AsO33-+Sn4+H2O 碘化钾被氧化生成的I2又可被氯化亚锡还原为I-，I-与反应中生成的Zn2+能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应不断进行； I2+Sn2+2I-+Sn4+ 4I-+Zn2+ZnI42- 氯化亚锡与锌作用，在锌表面形成锌锡齐，使氢气均匀而连续地发生，增加反应的灵敏性与可靠性； Sn2+ZnSn+Zn2+,可抑制微量Sb的干扰，使在实验条件下，100gSb存在不干扰测定。 2、检查方法：应用供试品与标准品的比色斑法。先看几个概念： 标准砷溶液的制备：称三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液（100ug/ml）。（保存不超过一年） 临用前，精密量取贮备液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得(每lml相当于1ug的As)。 碘化钾试液的配制：取碘化钾16.5g，加水使溶解成100ml，即得。本品临用前新鲜配制。,酸性氯化亚锡试液：取氯化亚锡20g，加盐酸使溶解成50ml，滤过，即得。本品临用前新鲜配制。 乙醇制溴化汞试液：取溴化汞2.5g,加乙醇50ml，微热溶解，即得。本品应置玻璃瓶中暗处保存。 盐酸溶液：市售浓度37%的盐酸液。,（1）仪器装置： A: 100ml标准磨口锥形瓶 B: 中空的标准磨口塞 C: 导气管(外径8.0mm， 内径6.0mm)，全长约180mm D: 具孔的有机玻璃旋塞，与 导气管C紧密结合。 E:中央具孔（孔径6.0mm）的 有机玻璃旋塞盖与D紧密结合。 测试时，于C中装入醋酸铅棉花60mg(装管高度为6080mm)，再于D的顶端平面上放一片溴化汞试纸，盖上旋塞盖E并旋紧，即得。,(2)标准砷斑的制备:精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml(酸为反应物，酸量应足够，所以加浓盐酸5ml)与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴（约0.25ml），在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将照上法装妥的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置2540水浴中，反应45分钟，取出溴化汞纸试，即得。 (3)检查法:取照各药品项下规定方法制成的供试液，置A瓶中，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起，依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，不得更深。,3、注意事项： 方法灵敏度：本法反应灵敏度约为0.75µg(以As计)。2ml标准砷溶液（相当于2µgAs）所形成的砷斑色度适中，清晰，便于辨认，为中国药典规定标准砷斑。供试品含砷量不同时，采用改变供试品取用量的方法来适应要求，而不采取改变标准砷溶液取量的方法。 酸度及各种试液用量：反应液的酸度相当于2mol/L的盐酸液。含KI浓度为2.5%，SnC12浓度为0.3%，加入锌粒以2g为宜（锌粒应无砷）。 反应温度和时间：反应温度控制在2540，时间为45分钟。 锌粒选用2mm左右粒径(能通过一号筛)的为宜。（一号筛筛孔内径2000um±70um） 汞试纸的选择：选用质量较好，组织疏松的中速定量滤纸；溴化汞试纸一般宜新鲜制备。,醋酸铅棉花的作用：是为消除锌粒及供试品中少量硫化物的干扰。采用醋酸铅棉花吸收除去生成的H2S。药典规定称取60mg醋酸铅棉花，装管高度约6080mm。这样既除去H2S又控制了醋酸铅棉花的松紧度，使砷化氢以适宜的速度通过导气管。 H2S+Pb(CH3COO)2 PbS +2CH3COOH 幻灯片 36,中药制剂中砷盐检查的前处理：常用酸破坏法、碱破坏法及直接炭化法等使砷游离出来，以氢氧化钙破坏法较为常用。 氢氧化钙破坏法：取一定量的供试品，加入等量的无砷氢氧化钙混匀后，加水湿润，烘干，在小火上小心炽灼至烟雾除尽，移入高温炉中在500600炽灼至灰化，取出放冷，加蒸馏水5ml，再缓缓加入盐酸5ml及浓溴液数滴，置水浴上加热至溶液中的红色溴驱尽，滴加氯化亚锡试液数滴，再全部转入测砷瓶中，依法测定。一般不含硫的检品可不加浓溴液，只需加盐酸5ml即转入测砷瓶中，依法测定。 操作注意点：炽灼温度以600左右较为合适；一定要灰化完全。,干扰物质：如硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐、碘、氯、汞、银、镍、钴、铜、铁等干扰物质，必须先除去。 其他: A、所用仪器、试液按本法检查不得生成砷斑或经空白实验至多生成仅可辨认的斑痕。 B、同一套仪器应能辨别出标准砷溶液1.5ml与2.0ml所呈砷斑的深浅。 C、标准砷溶液应于实验当天配制，标准砷贮备液存放时间一般不宜超过一年。 D、砷斑不稳定，反应应保持干燥及避光，并立即比较。 E、配制成的酸性氯化亚锡试液3个月后不宜使用。,第二法 二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法） 1、基本原理：采用锌和酸作用产生的初生态氢与供试品中微量亚砷酸盐反应生成挥发性的砷化氢，利用砷化氢与Ag-DDC溶液作用，使Ag-DDC中银还原为红色的胶态银，与同条件下一定量标准砷溶液所产生的红色胶态银直接比色（目视）或在510nm处测吸光度，进行比较，以判定砷盐的含量是否超过限量。 As033- + 3Zn + 9H+ AsH3+ 3Zn2+ + 3H20 AsH3+6Ag(DDC)As(DDC)3+6Ag(红色胶态银)+3HDDC,2、检查方法： （1）仪器装置： A为100ml标准磨口锥形瓶 B为中空的标准磨口塞，上 连导气管C(一端的外径为 8mm，内径为6mm，另一端 长180mm，外径4mm，内径 1.6mm，尖端内径为lmm)。 D为平底玻璃管(180mm，内 径10mm，于5.0ml处有一刻 度)。 测试时，于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg(装管高度约80mm)，并于D管中精密加入Ag-DDC试液5ml。,（2）对照液的制备：精密量取标准砷溶液5ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C与A瓶密塞，使生成的砷化氢气体导入D管中，并将A瓶置2540水浴中反应45分钟，取出D管，添加氯仿至刻度（5ml处），混匀，即得。 （3）检查法：照药典各药品项下规定方法制成供试液， 取药典要求剂量置A瓶中，照标准砷对照液的制备，自 “再加碘化钾试液5ml”起，依法操作。将所得溶液与标准砷对照液同置白色背景上，从D管上方向下观察、比较，所得溶液的颜色不得比标准砷对照液更深。必要时，可将所得溶液转移至lcm吸收池中，用适宜的分光光度计在510nm波长处以二乙基二硫代氨基甲酸银试液作空白，测定吸收度，与标准砷对照液按同法测得的吸收度比较即可。,3、注意事项： （1）用有机碱吸收反应产生的二乙基二硫代氨基甲酸（HDDC）有利于反应的进行。USP（23）用吡啶（灵敏度高但有恶臭），ChP（2010）用三乙胺（稳定性好，低毒，无臭）。含三乙胺的二乙基二硫代氨基甲酸银氯仿溶液与砷化氢产生的颜色在510nm波长处有最大吸收且供试液中含砷0.757.5ug时显色反应的线性关系良好（可用于含量测定）。 （2）本法2540度水浴反应45min为宜。因二乙基二硫代氨基甲酸银呈浅黄绿色，应考虑背景补偿，所以测吸光度时用此溶液作空白。,1、药物的杂质检查中，其限量一般不超过百万分之十的是（ ） A. 氯化物 B. 硫酸盐 C. 醋酸盐 D. 砷盐 E. 淀粉 2、在用古蔡法检查砷盐时，导气管中塞入醋酸铅棉花的目的是（ ） A. 除去I2 B. 除去AsH3 C. 除去H2S D. 除去HBr E. 除去H3Sb,3、古蔡氏法中，加SnC12的作用有（ ）（多选） A. 使As5+As3+ B. 除去H2S C. 除去I2 D. 组成锌锡齐 E. 除去其它杂质干扰 4、中国药典（2005年版）收载的古蔡法检查砷盐的基本原理是（ ）（多选） A. 与锌、酸作用生成H2S气体 B. 与锌、酸作用生成AsH3气体 C. 产生的气体遇氯化汞试纸产生砷斑 D. 比较供试品溶液与标准品溶液的颜色强度 E. 比较供试品砷斑与标准品砷斑的颜色强度,5、AgDDC法检查砷盐时，所产生的红色溶液为（ ） A. HDDC吡啶溶液 B. Ag吡啶溶液 C. Ag的胶态溶液 D. Ag(DDC)溶液 E. AsAg3溶液 6、砷盐的检查，需要的物质应有（ ）（多选） APb2+标准液 BSnCl2试液 CKI试液 DZn E醋酸铅棉花,7、古蔡氏法检砷，药典规定制备标准砷斑时，应取标准砷溶液（ ） A. 1ml B. 5ml C. 2ml D. 依限量大小决定 E. 以上都不对 8、古蔡氏法检查所用的溶液是( ) A. 强碱性溶液 B. 强酸性溶液 C. 含稀盐酸10ml/50ml溶液 D. 含稀硝酸10ml/50ml溶液 E. 含强氧化剂(硝酸或过硫酸铵)溶液,三、铁盐检查法：铁是重金属，但Fe3+会把S2-氧化成乳硫，所以不能用常规检查重金属限量的方法检查铁盐限量，必须用下面两种新方法。 （一）硫氰酸盐法：中国药典规定方法 1、原理：,比色，判断药物中铁盐杂质含量是否超过限量。,2、检查方法： 标准铁溶液的制备： 称取硫酸铁铵 FeNH4(SO4)2·12H2O 0.863g，置1000 ml量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5ml （加入硫酸防止Fe3+的水解），用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于10ug的Fe)。,取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml，移置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀；如显色，立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶液（取各药品项下规定量的标准铁溶液，置50ml纳氏比色管中，加水使成25ml，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀）同置于白色背景上，自上向下观察，比较二者颜色。 如供试管与对照管色调不一致时（如供试品本身带颜色），可分别移至分液漏斗中，各加正丁醇20ml提取，分层后，将正丁醇层移置50ml纳氏比色管中，再用正丁醇稀释至50ml，比较，即得。,3、注意事项： （1）50ml溶液中含2050g的Fe3+显色梯度明显，故一般取标准铁溶液2.05.0ml。因硫氰酸铁的配位离子在正丁醇等有机溶剂中的溶解度大，故为提高灵敏度，常加适量正丁醇萃取后观察，这样能排除某些干扰物质的影响。 （2）反应需在盐酸酸性条件下进行，注意四点： 以50ml供试溶液中含稀盐酸4ml为宜。是防止Fe3+在碱性条件下水解生成棕色的水合羟基铁离子或红棕色的氢氧化铁沉淀从而影响比色测定。酸性溶液还可避免弱酸盐的干扰。不加硝酸首先是防止其氧化SCN-,其次是防止硝酸中的亚硝酸与SCN-反应生成红色化合（NO·SCN）。 （3）加氧化剂过硫酸铵（NH4)2S2O8的目的：可氧化Fe2+为Fe3+；可防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。,（4）光线与温度影响颜色的稳定性：光线使硫氰酸铁还原或分解褪色，可加氧化剂过硫酸铵防止。加硝酸后加热也可氧化Fe2+为Fe3+，但需煮沸除去氧化氮。另外温度越高褪色越快，所以要注意使供试品溶液与标准品溶液条件一致。 （5）干扰离子的影响：很多离子可影响反应结果。正丁醇萃取净化能排除某些干扰物质的影响。,（二）巯基醋酸法：英国药典收载方法。,2Fe3+2HS·CH2COOH 2Fe2+HOOCCH2-S-S-CH2COOH+2H+ Fe2+2HS·CH2COOH Fe(S·CH2COOH)2 +2H+ Fe(S·CH2COOH)2 +2OH- Fe(S·CH2COO)22-+2H2O,本法灵敏度较高，但试剂较贵。,1、中国药典规定，硫氰酸铵法检查铁盐时，加入过硫酸铵的目的是（ ）（多选） A. 使药物中铁盐都转变为Fe3+ B. 防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色 C. 使产生的红色产物颜色更深 D防止干扰 E便于观察、比较 2、中国药典收载的铁盐检查，主要是检查（ ） A. Fe B. Fe2+ C. Fe3+ D. Fe2+和Fe3+ E. 以上都不对,四、有害元素的测定： 1、铜、镉、铅、砷、汞是目前世界公认的对人体有害的元素。 2、六种常用中药材（甘草、黄芪、西洋参、丹参、白芍、金银花）中铅5ppm,镉0.3ppm,铜20ppm,砷2ppm,汞0.2ppm。,五、干燥失重测定法： 干燥失重：药品在规定的条件下，经干燥后所减失的重量，包括水分及其他挥发性成分。 水分 必要水分 不必要水分 结晶水 组成水 附着水 吸留水 干燥失重测评法计算公式 ： 干燥失重=（W1-W2)/W1*100。 W1为干燥前的样品重量，W2为干燥后的样品重量。 W1-W2就是干燥中减失的重量。,干燥失重测定法包括常压恒温干燥法、干燥剂干燥法、减压干燥法、热分析法。 （一）常压恒温干燥法（烘干法）：适用于受热较稳定的药物。干燥温度一般为105。 测定方法：取供试品，混合均匀（若供试品为较大结晶，应先迅速捣碎成2mm以下的小粒）。取约1g或各药品项下规定重量，置与供试品同样条件下干燥至恒重的扁形称瓶中（样品量最多为称量瓶容量的二分之一，如量瓶高2cm，样品量最多1cm），精密称定。之后放入烘箱中105高温干燥,第一次干燥24小时，取出放入干燥器内冷却至室温，称重，第二次干燥1小时，取出放入干燥器内冷却至室温，再称重，与第一次重量比较，未达恒重继续干燥直到达恒重为止。从减失的重量和取样量计算供试品的干燥失重。,（二）干燥剂干燥法：适用于含受热易分解成分的供试品。 将供试品置于干燥器中，利用干燥器内存放的干燥剂吸收供试品中的水分，从而把供试品干燥至恒重。常用干燥剂为硅胶，五氧化二磷，硫酸。,（三）减压干燥法：适用于熔点低，受热不稳定或水分难赶除的药物。 用减压干燥器进行干燥，除另有规定外，压力应在2.67kPa（20mmHg）以下，减压装置尽量为圆形或球形，压力不要太低，否则易爆炸！,（四）热分析法：是测定物质的物理化学性质与温度关系的一类仪器分析方法。包括热重法（TGA）、差热分析法（DTA）、差示扫描量热法（DSC）。 热重法（TGA） 热重法是在程序控制温度下，测量物质质量与温度关系的一种技术。 记录质量变化对温度的关系曲线即热重曲线。热重曲线的纵坐标为质量(m)，横坐标为温度(T)或时间(t)。,特点：准确测量物质的质量变化及变化速度、样品用量少、速度快。适用于贵重药物或在空气中极易氧化药物的干燥失重测定。,差热分析法（DTA)：差热分析法是在程序控制温度下，测量待测物质和参比物之间的温度差（T）与温度(或时间)之间关系的一种技术。 差热分析曲线记录的纵坐标为样品与参比物的温度差(T)，横坐标为加热温度。,本法除测干燥失重外还可鉴别药物的晶形，也可检查药物的纯度。,干燥失重测定法注意事项： 颗粒大小：2mm以下（若供试品为较大结晶，应先迅速捣碎成2mm以下的小粒） 用量：取供试品约1g或各药品项下规定重量。 供试品厚度：供试品应平铺在扁形称量瓶中，厚度不可超过5mm；如为疏松物质，厚度不可超过10mm 操作注意：干燥时应将瓶盖取下，置于称量瓶旁，或将瓶盖半开进行干燥；取出时，须将瓶盖好。在每次干燥后应先置干燥器内放冷至室温，然后称定重量。 如供试品未达到规定的干燥温度即融化时，应先将供试品置较低的温度下干燥至大部分水份除去后，再按规定条件干燥。 干燥时间：第一次干燥24小时，干燥至恒重的第2次及以后各次的称重均应在规定条件下继续干燥1小时后进行。,1、干燥失重测定的方法有（ ）（多选） A炽灼（500600）法 B常压恒温干澡法 C减压干燥法 D干燥剂干燥法 E热分析法 2、干燥失重测定中应注意哪几个方面（ ）（多选） 供试品平铺在称量瓶中的厚度一般不超过5mm 干燥温度一般为105 可用干燥剂干燥 D. 主要指水分和挥发性物质 E. 测定时间不超过3小时,六、水分测定法： 水分测定仅仅是测定供试品中的水分，干燥失重是测定供试品中水分及其他挥发性成分，二者在测定方法、测定条件和要求上都不尽相同。 中国药典一部收载四种方法：烘干法、甲苯法、 减压干燥法、气相色谱法。 药典规定，一般将供试品先破碎成直径不超过3mm的颗粒或碎片。直径和长度在3mm以下者可不破碎。如使用减压干燥法需先经二号筛（二号筛筛孔内径850um±29um）。,（一）烘干法：适用于不含或含少量挥发性成分的药品。 取供试品25g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松样品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在烘箱中100105干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量。计算供试品中含水量（）。,（二）甲苯法：本法适用于含挥发性成分 的药材。（甲苯：芳香族易挥发液体，密 度比水小，与水不互溶，能溶解亲脂性的 挥发物质，沸点111） 仪器装置 如图：A为500mL的短颈圆底烧瓶 B为水分测定管 C为直形冷凝管 使用前，全部仪器应清洁，并置烘箱中 烘干。为减少甲苯与微量水混合而造成 的结果偏低，测量前甲苯应加少量水振 摇饱和，将水层弃去后再应用。,测定法：取供试品适量(约相当于含水量14mL)精密称定，置A瓶中，加甲苯约200mL，必要时加入玻璃珠数粒（促进沸腾），将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满B管的狭细部分。将A瓶置电热套中或用其它适当方法缓缓加热，待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出2滴。待水分完全馏出（即测定管刻度部分的水量不再增加时），将冷凝管内部先用甲苯冲洗，再用饱蘸甲苯的长刷或其他适当方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5分钟（确保供试品中水分全部蒸出），放冷至室温，拆卸装置，如有水粘附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离（可加亚甲蓝粉末少量，使水染成蓝色，以便分离观察）。检读水量，并计算供试品中含水量（）。,（三）减压干燥法：本法适用于含有挥发性成分的贵重药品。 先取直径12cm的培养皿，加入新鲜五氧化二磷干燥剂适量，使铺成0.51cm的厚度，放入直径30cm的减压干燥器中。然后取供试品24g，混合均匀。分取约0.51g，置已在与供试品相同条件下干燥并称重的扁形瓶中，精密称定，打开瓶盖，放入上述减压干燥器中，减压至2.67kPa以下持续半小时，之后室温放置24小时，可在减压干燥器出口连接新鲜无水氯化钙干燥管（吸水），后打开活塞，待内外压一致，关闭活塞，打开干燥器，盖上扁形瓶盖，取出称量瓶迅速精密称定重量，计算供试品中含有水分的百分数。 注意事项：减压干燥时减压宜逐渐进行，不可骤然大幅度减压。,（四）气相色谱法：本法灵敏、快速、准确度高，不受供试品组分和环境湿度的影响，适用于各类型中药制剂微量水分的测定。 色谱条件与系统适用性试验（用规定的样品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子）：用直径为0.250.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为载体，柱温为140150；热导检测器检测。注入无水乙醇（含水量约3%），照气相色谱法进行系统适用性试验，应符合下列要求：,(1)用水峰计算的理论板数应大于3000，用乙醇峰计算的理论板数应大于200。 n5.54（tR/ Wh/2）2 (2)乙醇和水两峰的分离度应大于2； R2（tR2tR1）/（W1+W2） (3)将无水乙醇注样5次，水峰面积的相对标准偏差不得大于2.0。（RSD=S/X平均×100%） （拖尾因子=W0.05h/2d,反映峰形情况，在此方法中影响不大）,标准溶液的制备：取纯化水约0.2g，置已称重25ml量瓶中，精密称定总重（为确定对照品中水的浓度），加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。 供试溶液的制备：取供试品适量（含水量约0.2g）（使其浓度与对照品相仿，计算结果误差小），粉碎或研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇50ml（与配制标准溶液的无水乙醇为同一批号试剂），混匀，超声处理20分钟，放置12小时，再超声处理20分钟，离心，取上清液，精密测量出其体积, 即得。,测定法：取无水乙醇（为确定其中的水