番红花球茎脱毒及快速繁殖.ppt
番红花球茎脱毒、快速繁殖,主讲：赵楠 09 生物技术（1）班 制作：王艳 何雪 评委：梁文鹏,番红花简介,植物学简介 番红花(Crocus sativus L.) 即藏红花、西红花 被子植物门、单子叶植物纲、百合目、鸢尾科、番红花属Crocus 球茎类多年生草本植物 花1-2朵，淡蓝色、红紫色或白色，有香味，直径2.5-3厘米； 球茎扁圆球形，直径约3厘米，外有黄褐色的膜质包被 原产于南欧和地中海地区，其主产地为西班牙,名称由来 番红花之名始见于明朝本草品汇精要 ， 因其源于西方，故名“番红花” 藏红花之名始见于清朝赵学敏的本草纲目拾遗 1963年版中华人民共和国药典正式以番红花作为本植物学名收藏 番红花为植物学名，但药材名仍为藏红花（其红色柱头）,药用价值及其他用途,药用价值 番红花干燥柱头为其主要药用部位即通常所说的藏红花。 藏红花一种名贵的中药材有镇静、祛痰、解痉作用，用于胃病、调经、麻疹、发热、黄胆、肝脾肿大等的治疗。 柱头的主要化学成分为番红花苷crocin、番红花苦苷picrocrocin、番红花酸crocetin以及挥发油等成分，具有理想的调节血脂、抗肿瘤活性。,其它用途 在地中海地区和东方菜肴中作调色和调味佐料 。 古代印度蒸馏番红花柱头得到一种金色水溶性布匹染料 。 在希腊和罗马，番红花作为香料 撒在会堂、宫廷、剧场和浴室。 这是由于番红花富含胡萝卜素因而具有鲜亮的颜色、特殊的香味，现在被用作食品添加剂、天然色素、香料、染料。,番红花球茎脱毒原因,繁殖方式 ：球茎繁殖 番红花为三倍体，有性繁殖易出现败育，故生产上采用无性繁殖的方式，即球茎繁殖来解决种源问题 出现的问题 ：球茎退化 无性繁殖也有许多不利的影响，其中最为突出的就是种质的严重退化问题。球茎退化而使球茎变小，从而影响开花率，严重影响番红花产量和质量。研究表明，引起番红花种质退化的主要原因，是由于多种病毒和细菌在番红花体内逐代积累，尤其是病毒。因此，球茎脱毒就成为提高药用部位柱头产量的前提条件 。,主要病原菌,目前已经研究报道的病原菌有三类：真菌，细菌花叶病毒 真菌：青霉菌 细菌：尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌 病毒：芜菁花叶病毒（TuMV） 鸢尾花叶病毒（IMV） 鸢尾轻性花叶病毒（IMMV）,建立番红花脱毒、大量繁殖体系,外植体 将球茎切开，取球茎切块35cm、叶尖部位12cm、球茎茎尖35cm 为实验用外植体 培养基组成 MS 培养基： PH 5.8 琼脂 4.2g 蔗糖30g 生长调节物质 6-，NAA B5 培养基： PH 5. 5 琼脂 4.2g 蔗糖30g 生长调节物质 6-，NAA White 培养基：PH 5.6 琼脂 4.2g 蔗糖30g 生长调节物质 6-，NAA 消毒试剂：HgCl2 (0.1%、0.2%、0.3%) ，NaOCl(1%、2%、5%) ， H2O2(3%、5%）,方法 取番红花整棵植株，用水冲洗30 min，洗去表面土壤，再用蒸馏水冲洗30min。 剥去番红花球茎表面膜质，将叶子从植株中剪下，与球茎一同放入 75% 乙醇中浸泡60s ，再放入，不同的消毒试剂中，浸泡不同时间，取出在无菌操作台内操作。将三种外植体接种于不同的培养基中，且每种培养基内的植物生长调节剂(6-，NAA)含量不同。培养基种类及激素配比见表。接种后置于18，每日光照12h。30h小时后统计统计愈伤组织形成状况。 诱导率=发育形成愈伤组织外植体个数总外植体个数×100%,愈伤组织继代培养及分化培养 在愈伤组织形成后，将愈伤组织继代培养，接种于不同的培养基中，激素种类浓度见表 接种后置于22环境中，每日光照16h ，30d后统计分化情况。,生根培养 切取分化培养基中愈伤组织形成的23cm 的小苗，接至加入不同浓度的NAA、IBA的1/2 MS 培养基中诱导生根置于22环境中，每日光照16h ，30d后，观察结果。,结果分析,不同消毒试剂与不同消毒时间对球茎切块外植体愈伤组织诱导的影响 由于番红花球茎在地下生长，因此面临消毒难的问题。通过对不同消毒试剂的不同浓度、不同时间的设置，来寻找最佳消毒方式。结果见下表,HgCl2 0.1% 8min 诱导率最高，为58.63%,结果分析,不同培养基对愈伤组织诱导率的影响 B5 培养基的诱导率最高 愈伤组织分化生芽时，MS 培养基时间最短。 因此，采用B5培养基诱导愈伤组织，采用MS 培养基作为愈伤组织分化、生根的培养基,结果分析,不同激素配比对愈伤组织诱导率的影响 实验证明，NAA与6-BA 联合应用为最佳 最适合诱导愈伤组织培养基为 B5+6-BA2mgL+NAA0.5mgL 最适合分化培养基为MS+6-BA2mgL+NAA0.5mgL 最适合生根培养基为 MS+6-BA0.5mgL+NAA2mgL,结果分析,不同外植体类型对愈伤组织诱导影响 实验数据表明，其球茎茎尖外植体效果最好，球茎切块外植体次之。但考虑到其茎尖有限，条件较严格，且受季节控制的因素，由于组织培养、大量繁殖的最佳外植体为球茎切块,结果分析,不同生长激素对番红花生根的影响 NAA 在 2mgL 的浓度下，生根效果最佳，且诱发的根较为粗壮。而IBA 则在 4mgL的浓度下，才表现出类似效果。且二者的移苗存活率相当,小结,以组织培养的技术手段，寻找到最合适番红花大量繁殖的外植体为：球茎切块外植体； 最适消毒方法：0.1%的HgCl2 时间为 8min 。 最适合诱导愈伤组织培养基为 B5 培养基 最适合分化培养基为 MS 培养基 最适合生根培养基为 1/2 MS 培养基 最适诱导愈伤组织、植株分化和生长的激素比例为： 6-BA 2mg/L NAA 0.5mg/L,文献,朱昱 秦路平 丁如贤 番红花球茎脱毒、快速繁殖及药效学研究 第二军医大学硕士学位论文 2007-05-01,谢 谢,
