dna粗提取的实验步骤.doc

实验步骤以洋葱为实验材料：1、称取30克已切碎的洋葱，放入研钵中，加入少量石英砂助研，倒入10mL 2mol/L的氯化钠溶液，充分研磨。 洋葱含有挥发性刺激物，有效减少刺激，才能使实验顺利进行。上课前，教师可先将洋葱放入冰箱冷冻一会儿，使其凉透但又不能结冰；或将洋葱切成几大块，放入清水泡一会儿，让其挥发性刺激物溶于水，可以减轻刺激。然后将洋葱切碎备用。研磨的目的主要是使洋葱细胞破裂，使DNA溶于2mol/L的氯化钠溶液，没必要将洋葱研成粥糊状，后者既浪费时间又影响实验效果。研磨时，切忌使用搅拌器（榨汁机）。使用搅拌器虽可以提高研磨效率，但搅拌器将洋葱切成极细小的颗粒，无法通过过滤将洋葱颗粒剔除。只能将酒精直接倒入滤液中，许多洋葱小颗粒因为轻会漂浮起来，DNA藏在其中，无法分辨。学生看不到白色纤维状粘稠物的DNA。2、研磨后，用漏斗和纱布将汁液过滤到小烧杯中，得到滤液。3、向滤液中加入95%的酒精溶液20mL，沿烧杯壁缓缓倒入，不要震动或搅拌。此时，烧杯中的液体分为上、下两层，下层较浑浊，上层澄清，很快上层溶液中就会有白色纤维状粘稠物析出，用玻璃棒可将其轻轻卷起。实例: 用鸡血细胞液粗提取 DNA 并鉴定步骤 1、 提取鸡血细将制备好的鸡血细胞液(已在课前配好) 510mL， 注入到 50ml 烧杯中。 向烧杯中加入蒸馏水 20mL， 同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌 5min， 然后， 用放有纱布的漏斗将血细胞过滤至 1000mL 的烧杯中， 取其滤液。 图示 胞的细胞核物质 2、 溶解细胞核内的 DNA 将物质的量浓度为 2mol/ L 的 NaCl 溶液 40 mL 加入到滤液中， 并用玻璃棒沿一个方向搅拌 1min， 使其混合均匀，这时 DNA 在溶液中呈溶解状态。3、析出含 DNA的粘稠物 沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水， 同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌， 这时烧杯中有丝状物出现。 继续加入蒸馏水， 溶液中出现的黏稠物会越来越多。 当黏稠物不再增加时停止加入蒸馏水。 4、滤取含 DNA的粘稠物 用放多层纱布的漏斗， 过滤溶液至 1000 mL 的烧杯中。取纱布上的黏稠物。 5、 将 DNA 的粘稠物再溶解 取一个 50 mL 烧杯， 向烧杯内注入物质的量浓度为 2mol/ L 的 NaCl 溶液 20 mL。 用钝头镊子将纱布上的黏稠物夹至NaCl 溶液中， 用玻璃棒沿一个方向不停地搅拌 3min， 使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中。6、过滤含 DNA的氯化钠溶液 取一个 100 mL 烧杯， 用放有两层纱布的漏斗过滤以上溶液。 取其滤液(DNA 溶于滤液中)。 7、 提取含杂质较少的 DNA 在上述滤过的溶液中， 加入冷却的、 体积分数为 95% 的酒精溶液 50 mL(加入时动作要慢)， 并用玻璃棒沿一个方向搅拌， 溶液中会出现含杂质较少的丝状物。 当玻璃棒上出现丝状物缠绕时， 继续慢慢搅拌， 至不再增加时， 用玻璃棒将丝状物卷起， 并用滤纸吸取上面的水分。 取两支 20 mL 的试管， 各加入物质的量浓度为 0.015mol/ L 的 NaCl 溶液 5mL， 将丝状物放入其中一支试管中， 用玻璃棒搅拌， 使丝状物溶解。 然后， 向两支试管中各加入 4 mL的二苯胺试剂。 混合均匀后， 将试管置于沸水中加热 5min，等试管冷却后， 观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。