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转 实验中医学课件实验中医学-中医药实验研究基本知识1河北北方学院中医系综合实验室贺金靳国印2009-7实验中医学的性质、内容、任务一.性质定义：实验中医学是用科学实验的方法研究和发展中医学的一门科学。此定义涉及的4个层次：实验中医学一.性质1.实验的定义实验是指科学上为阐明某一现象而创造特定的条件，以便观察它的变化和结果的过程。这是因为自然状态下，影响到所观察对象，如人、实验动物的因素太多，不创造特定的条件，所观察的变化可能由一些其他因素所引起。比如肥胖，有遗传、运动、睡眠、饮食、工作、情绪、社会环境等许多因素引起，不把条件限制，就不能确定肥胖的成因，也难以观察不同治疗或预防方法的区别。一.性质-1.实验实验就是为了调查一个或多个自变量对一个或多个因变量的效应控制过程。自变量由实验者操纵，因变量是被观察和记录的变量。而实验给调查者提供消除或尽可能减少额外变化的最好机会。实验用来检验理论，重复和扩展以前的发现，或者表明以前的研究不能被证实，部分观察什么会发生。实验实际上只是促成的观察。实验者应当怀疑和不抱成见，永远保持精神的自由。实验研究的出发点是假设或理论。一.性质-1.实验实验的目的之一是发现。发现-就是看见大家都看见的和思考没有人思考过的。实验的优点和重要性：自然观察法的缺点：1)其描述性致使无法评估事件之间的关系。2)有时所提供的资料不太充足。3)没有严格地维持在描述的水平上，却经常出现对观察结果的解释。实验的局限：各方面都优越的研究方法是不存在的关键是要选择最适合于被检验假设的研究方法。如果是关于自然环境中发生的行为，那么自然观察法将比严格控制的实验研究更适合；相反，如果理论假设能够通过相关法或者实验法合理地验证，那么就该运用实验研究方法。该著认为自然观察法中，无干扰观察、测量法更好。(B.H.坎特威茨等.实验心理学)2.中医学的定义1)首先是传统医学。世界卫生组织曾对传统医学作过如下定义："不论是否能解释，它是用于诊断、预防和消除身心和社会失衡的全部知识和实践的总结。它主要是依靠世代相传的实践经验和观察的结果，这些经验和结果不论是口头流传的或是文字记载的。"(1976年)"它是在现代医学传播和发展以前就已存在几百年的医疗实践的总结，而且至今还在应用。这些实践由于各国的社会传统和文化不同而存在很大差异。"(1996年)2)传统医学向现代化的过渡。过渡期的医学。这点十分重要，但一直被忽略。新中国成立以来，在党和政府的引导支持下，传统的中医学焕发出生机，迅速发展、壮大，其标志之一便是实验中医学的中兴，实现了与现代医学的接轨，并不断缩小两者间的差距，使古老的中医学注入了现代科学的新生命。3.与实验针灸学、中药药理学的区别这两门学科是实验中医学分化得最早的学科。实验针灸学主要研究经络及其传感的本质，针灸、推拿以及建立在经络理论基础之上的不同诊疗方法的本质和规律。中药药理学研究单味中药和复方的药理，与实验中医学中普遍运用复方的区别在于两者的着眼点或目的不同：中药药理学的着眼点在药，研究药的作用机制和开发新药，而实验中医学则以药为干预因素，通过药的干预，来探究有关生理、病理、治则、治法、预防、养生等等。中医学要不要发展、如何发展、如何高效地发展?通过几十年的探索，形成了比较一致的认识，即实验中医学以中医学为研究对象，以现代科学技术方法为主要研究手段，用以挖掘、解释并丰富中医学伟大宝库，加速中医学的现代化。其基础包括传统中医、现代中医、现代西医；要求顺应社会和中医药学自身发展的规律；要提高中医药的竞争力。比如治疗上是最安全的、最有效的、最方便的、最廉价的，以及有特色的。实验中医学-2、内容1.基本方法-中医学所特有的，以及一般医学、其他科学共有的。2.不同实验对象-人、实验动物。3.翔实的实验指导。4.科学、严谨的实验报告。实验中医学-3.任务实验中医学的任务是验证和发展中医学。1.验证中医学。中医学对生命的认识、对生理病理的认识、对不同的诊疗手段、养生方法的论述等是不是符合实际，是不是有效，需要给予验证，阐释其机制。例如，历代对某一疾病的防治积累了丰富的资料，有不同的治则、治法，不同的单方、验方，不同的剂型、剂量等，哪些是有效的，哪些效果要优越些，不同方法的适应证有何不同，有没有地域、季节差异等等，只有通过反复的实验才能给予验证，并解释其原理。迄今为止，实验中医学的工作主要集中在这一领域。中医药实验研究中医药实验研究是根据中医实践理论体系，采用现代科学技术方法来研究中药的组方、成分、作用机理及用途的一门科学。(弥补临床观察、直觉领悟之不足)中医药实验研究首要问题，就是遵循中医基本理论对实验研究的周密设计。因为实验设计是实验过程的依据，是实验数据处理的前提，也是提高实验研究质量的一个重要保证。中医药实验研究实验研究的一般原则和基本内容中医药实验研究实验设计基本要求中医药实验研究实验设计基本要求-选用解剖、生理特点符合实验目的要求的实验动物催吐实验-适宜选用猴、猫，不选用大小鼠，因为小/大鼠无呕吐反应。胆囊功能实验-不选用大鼠，因为大鼠无胆囊。发汗中药的研究-不能选用小鼠(无汗腺)。慢性支气管炎的实验-不能选用大小鼠，因为小/大鼠气管及支气管腺不发达。计划生育研究-常选用小鼠和大鼠。因繁殖力强，性周期和妊娠期短，生长快。如常用小鼠做抗生育、抗着床、抗早孕、抗排卵等实验应用上的首选动物。中医药实验研究空白对照：是指在不加任何处理的"空白"条件下进行观察的对照，较少用。假处理对照：即除不用被研究的药物外，对照组的动物要经受同样的处理，如麻醉、手术、注射不含药物的溶媒等。这种对照的可比性好，较常用。标准对照：指以标准值或正常值作为对照，以及在所谓标准的条件下进行观察的对照。组间对照：系在实验组间互为对照进行对比。常用的是已知药的标准药对照组。中医药实验研究常用的设计方法单组比较设计：配对比较设计：随机区组设计：完全随机设计：拉丁文设计：正交设计：序贯设计：中医在实验设计研究方面的不足中医药实验研究-新(中)药研制与实验设计新药的分类：按药品管理要求分为5类：第一类-创制第二类-新用法第三类-新制剂第四类-新剂型第五类-新适应症。中医药实验研究-实验动物与人用药量的换算目前，基本上是以g/kg、mg/kg或ml/kg的形式来计算实验动物用药量的。如以这种形式直接进行实验动物间用量的互换，甚至换算为人的剂量，或由人的剂量换算成实验动物的用量，则因种类、敏感性、耐受性等的不同，实用量会偏小或偏大，以致无法进行实验。按动物与人体表比换算法已知A种动物每公斤体重用药剂量，欲估算B种动物每公斤体重用要量时，可先查表，找出折算系数W，再以下式计算：B种动物剂量(mg/kg)=W×A种动物剂量(mg/kg)例一：已知体重12kg的犬，其每日服药剂量为10mg/kg，每日总量为120mg，试求人的日服药量。人日服总量=犬日服总量×人与犬体表比=120×3.1=372mg实验报告的基本要求1实验前应仔细阅读实验指导，做到心中有数。2实验结束应及时整理和总结实验结果，写出报告。实验报告内容应包括实验名称、目的、原理、材料(包括仪器、药品、动物)、方法、结果、讨论及结论。河北北方学院中医系综合实验室基础知识2贺金靳国印实验动物科学实验动物学是20世纪50年代崛起的一门独立的综合性边缘学科，是现代生命科学前沿领域研究中最为活跃的学科门类之一。实验动物科学以实验动物为材料，采用各种手段和方法在实验动物身上进行实验，研究实验过程中实验动物的反应、表现及其发生机制和发展规律，确保动物实验的可靠性、准确性和可重复性。即如何使动物实验合理化、规范化。简而言之，实验动物科学就是关于实验动物标准化和动物实验规范化的科学。(实验动物饲养学、实验动物医学等)一般分类实验用动物实验用动物泛指所有用于科学实验的动物。它包括实验动物、家畜(禽)和野生动物。家畜(禽)以满足人类社会生活需要而生产的动物。野生动物直接从野外捕获的动物。微生物学控制分类实验动物微生物学质量控制是实验动物标准化的主要内容之一，按微生物学等级分类，实验动物分为普通级动物、清洁级动物、无特定病原体动物、无菌动物。微生物学控制分类一、普通级动物普通级动物指不携带所规定的人兽共患病病原和烈性传染病病原的动物。饲养于开放环境，微生物等级要求最低，但要有良好的饲养设施和饲养管理操作规程及规章制度。如饲料、垫料要消毒；饮水要符合城市卫生标准；外来动物必须严格隔离检疫；房屋要有防野鼠、昆虫设备；经常进行环境及笼器具的消毒，严格处理淘汰及死亡动物。微生物学控制分类二、清洁级动物除普通动物应排除的病原外，不携带对动物危害大和对科学研究影响大的病原的动物。清洁动物饲养于屏障环境或IVC(独立过滤通风笼具系统)，饲料、垫料、笼器具都要经过消毒灭菌处理，饮用水除用高压灭菌外，也可采用pH值2.5-2.8的酸化水，工作人员需换灭菌工作服、鞋、帽、口罩，方能进入动物室操作。微生物学控制分类三、无特殊病原体动物或称SPF动物除清洁级动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原，这类动物称无特殊病原体(specific pathogen free，SPF)动物。SPF动物来源于无菌动物，必须饲养在屏障系统中，实行严格的微生物学控制。各种疫苗生产所采用的动物应为SPF级动物，在放射、烧伤等研究中具有特殊的价值。微生物学控制分类四、无菌动物无菌(germ-free，GF)动物指动物身上不可检出一切生命体的动物。进一步说，是指用现有的检测技术在动物体内外的任何部位均检不出任何微生物和寄生虫的动物。中药制剂的制备1、水煎液的常规制备2、水煎醇沉剂的制备3、流浸膏、浸膏的简易制备4、中药总成分提取水煎液的常规制备1、药物2、容器具3、用水和量4、煎药时间5、药液煎出量小鼠实验动物基本技术操作部分(一)河北北方学院中医系实验室贺金靳国印实验动物基本技术(一)实验动物：实验动物基本技术(一)实验项目：抓取、固定编号给药麻醉采血处死实验动物基本技术(一)抓取、固定右手提起小鼠尾巴，将其放在鼠笼盖或其他粗糙表面上，在小鼠向前挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双耳和颈部皮肤，将小鼠置于左手掌心，无名指和小指夹其背部皮肤和尾部，即可将小鼠完全固定。实验动物基本技术(一)编号：化学药品：3-5%苦酸液。编号的原则：先左后右，从上到下。一般把涂在左前腿上的计为1号，头顶部计为2号,右前腿为3号，左侧腹部计为4号，腰背部为5号，右侧腰部为6号，左后腿为7号,尾基部为8号，右后腿为9号.实验动物基本技术(一)给药皮下注射：注射时用左手拇指及食指轻轻捏起皮肤，右手持注射器将针头刺入，固定后即可进行注射。小鼠注射部位一般在背部或前肢腋下。实验动物基本技术(一)给药肌肉注射：注射时针头要垂直、快速、刺入肌肉，如无回血现象，即可注射，小鼠注射部位选大腿外侧肌肉进行注射。实验动物基本技术(一)给药灌胃给药：用左手固定小鼠，右手持灌胃器，将灌胃针丛鼠的口腔插入，压迫鼠的头部，使口腔与食道成一直线，将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食道可感到轻微的阻力，此时可略改变一下灌胃针方向，以刺激引起吞咽动作，顺势将药液注入。一般灌胃针插入小鼠深度为3-4cm，常用灌胃量为0.2-1ml。实验动物基本技术(一)麻醉方法：使用乙醚麻醉小鼠时，可将动物放入玻璃麻醉箱内，把装有浸润乙醚棉球的小烧杯放入麻醉箱，然后观察动物。实验动物基本技术(一)麻醉药量的确定：在给小鼠乙醚麻醉时，先用小剂量粗略探索中毒剂量和致死剂量，然后用小于中毒量的剂量。或取致死量的若干分之一座为应用剂量，一般可取1/10-1/5。实验动物基本技术(一)5、采血剪尾采血：动物麻醉后将尾尖剪去5mm，从尾根部向尾尖部按摩，血即从断端流出。实验动物基本技术(一)处死击打法：右手捏住鼠尾，提起，用力击打其头部，鼠痉挛后立即死去。断头法：见断头采血法。大鼠实验动物基本技术(二)实验动物基本技术(二)实验项目：抓取固定麻醉除毛采血处死实验动物基本技术(二)抓取大鼠的门齿很尖锐，不要突然袭击式地去抓它，这样容易咬伤手指。初学者应戴上较厚的棉布手套。抓取时，原则是快、准、狠。右手轻轻抓住大鼠尾巴的中部并提起，不要抓尖端，防止尖端皮肤脱落；实验动物基本技术(二)固定：大鼠固定板两人合作进行，一人持线绳，将鼠四肢捆绑结实，不要很紧，防止阻碍血行，引起鼠四肢长时间缺血或折断，加剧它的挣扎；不要太松，防止实验过程中，挣脱。然后将鼠仰置于鼠固定板上，将四肢线绳捆绑与侧面钉子处，最后，将门牙固定于顶端位置。如已经麻醉，则单人即可固定。实验动物基本技术(二)麻醉方法：腹腔注射法-全身麻醉麻醉时，以左手抓住动物，使腹部向上，常规酒精消毒，右手将注射针头于左(或右)下腹部刺入皮下，使针头向前推0.51.0cm，再以45度角穿过腹肌此时手下会有落空感，回抽无肠液，尿液，固定针头，缓缓注入药液，为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。实验动物基本技术(二)除毛：在动物实验中，被毛有时会影响实验操作与观察，因此必须除去。除去被毛的方法有剪毛、拔毛、剃毛和脱毛等。实验动物基本技术(二)采血股静(动)脉采血：大鼠多采用股静脉或股动脉。方法是：大鼠经麻醉后，采血者左手拉直动物下肢，使静脉充盈。或者以搏动为指标，剪开腹股沟处皮肤，即可看到股静脉，把此静脉剪断或用注射器采血即可，股动脉较深需剥离出，再采血。实验动物基本技术(二)处死颈椎脱臼法：右手抓住鼠尾用力向后拉,同时左手拇指与食指用力向下按住鼠头。将脊髓与脑髓拉断，鼠便立即死亡。实验动物基本技术(三)实验动物基本技术(三)实验动物：家兔实验动物基本技术(三)实验项目：抓取固定麻醉采血尿液采集处死实验动物基本技术(三)家兔的抓取家兔比较驯服，不易咬人，但应避免其挣扎抓伤皮肤。在兔笼中捉兔时，先轻轻打开笼门，勿使其受惊，随之用手伸入笼内，从头前阻拦，兔便匍伏不动。实验动物基本技术(三)家兔的固定-台式固定法(盒式固定多用作静脉注射、采血用)将家兔仰卧位于兔台上，用固定器绑缚四肢踝关节上，将两后肢拉直，压紧固定；固定前肢。注意不要，过紧或太松。兔头固定时，先将兔颈部放在半圆形的铁圈上，再把铁圈推向嘴部压紧后拧紧固定螺丝，将兔头夹的铁柄固定在兔手术台的固定柱上。实验动物基本技术(三)给药(经口给药多用灌胃法，剂量准确。)将家兔固定，再将特制的扩口器从侧面放入动物口中，扩口器之宽度可视动物口腔大小而定。灌胃时将扩口器从侧面放于动物上下门牙之后，实验动物基本技术(三)麻醉-耳缘静脉、乌拉坦麻醉家兔耳部血管分布清晰。耳中央为动脉，耳外缘为静脉。内缘静脉深不易固定，不用。外缘静脉表浅易固定，常用。实验动物基本技术(三)采血：1、心脏取血将家兔仰卧固定，在第三肋间胸骨左缘3毫米处感觉搏动位置。注射针垂直刺入心脏，回抽，血液随即进入针管。尿液的采集(一)、用代谢笼采集尿液代谢笼用于收集实验动物自然排出的尿液，是一种特别设计的为采集实验动物各种排泄物的密封式饲养笼。实验动物基本技术(三)处死：空气栓塞法向家兔静脉内注入一定量的空气，使之发生栓塞而死。当空气注入静脉后，可在右心随着心脏的跳动使空气与血液相混致血液成泡沫状，随血液循环到全身。如进入肺动脉，可阻梗其分支，进入心脏冠状动脉，造成冠状动脉阻塞，发生严重的血液循环障碍，一般在静脉内注入20ml空气即可致死。大承气一、中药药理实验基本要求1.实验前应仔细听实验内容，结合实验内容，复习理论知识，做到心中有数。实验中应认真、仔细、耐心地观察所出现的各种现象，实事求是记录，切忌夹杂主观因素。应坚持一丝不苟，严谨的科学作风，决不允许抄袭别人的实验结果写报告。2.实验条件应详细、明确，如仪器型号、试剂的浓度、中药的品种、复方的组成、提取方法、浓度和剂量、给药途径、动物的来源、品种、体重、年龄、性别、如何分组等都应写出。3.实验方法可简明扼要地叙述，但关键环节必须写清楚。4.实验结果应根据实验获得的数据进行整理，对一个教学实验小组或全实验室的数据进行整理、归纳、分析和对比，尽量总结出各种图表，进行统计学处理。5.讨论部分包括实验结果的分析、思考题的探讨、实验设计、实验方法及实验中出现异常现象的分析、认识、体会和建议等。讨论应注意结合中医药理论。科研报告还可对比前人的实验进行分析，阐明从本实验获得的新发现或尚存在问题。6.实验结束应及时地整理和总结实验结果，写出报告。各组整理各组的实验物品，每个小班留4名学生帮助打扫实验室。小白鼠小白鼠属于脊椎动物门，哺乳纲，啮齿目，鼠种。我国目前饲养最广泛的是1946年从印度某研究所引入到云南昆明饲养的品种，又名昆明种。50年代由昆明引到北京生物制品研究所，以后输送到全国各地饲养。小白鼠是药理实验常用的一种动物，常用于药物的筛选、LD50ED50的测定、中枢神经系统药试验、抗炎免疫药试验、避孕药、抗肿瘤以及抗衰老药试验等。常用体重1822g。1.捉拿方法右手提起鼠尾，放在粗糙物(如鼠笼)上面，轻向后拉其尾，当小鼠向前挣扎时，用左手拇指和食指捏住其双耳及颈背部皮肤，翻转小鼠使其腹部朝上，置于掌心，拉直后肢，然后以第四指和小指夹住鼠尾即可。固定过程中不要用力过大，勿握其颈部，以免窒息死亡。2.给药途径：灌胃(IG)：灌胃器是由注射器和特殊的灌胃针构成。小鼠的灌胃针长约45厘米，直径1毫米，大鼠的灌胃针长约68厘米，直径1.2毫米。灌胃针的尖端焊有一个小圆金属球，金属球是中空的。焊金属球的目的是防止针头刺入气管或避免损失消化道。针头金属球端弯曲成20度，以适应口腔、食管的生理弯曲。将小鼠固定后，右手持装有灌胃针头的注射器轻轻压其头部，使口腔与食管成一条直线，再将灌胃针自口角插入口腔，沿上腭插入食道。如遇阻力，可将针头抽出再另插，以免穿破食道或误入气管。当灌胃针进入约3厘米左右时即达胃内。如果灌胃针插入位置不正确，小鼠会强烈挣扎，必须拔出重插，否则可能将药物灌入气管，造成小鼠死亡。灌注量为0.3ml/10g体重。3，处死，左手拇指和示指掐住脖子的位置(头与身体之间能摸到一处缝隙)，右手抓住尾巴根部用力向上拉(大概上翘45度角)，感觉到头断了即可。用颈椎脱臼法成功的话，小白鼠会出现抽搐现象。4，截取小肠：小鼠的小肠分为十二指肠、空肠、和回肠三部分。大肠包括盲肠、结肠和直肠，盲肠是介于小肠和结肠之间的一个大的盲囊。我们截取的肠管是盲肠以上的小肠部分。注意要使小肠自然伸展状态下测量其长度，防止由于施力影响长度。大承气汤对小白鼠小肠运动的影目响(炭末法)的了解大承气汤对肠蠕动的影响。原理利用黑色炭末作为指示剂，观察炭末在肠道的推进距离。方中大黄泻热通便，荡涤肠胃，为君药。口服生大黄可刺激肠蠕动加速，有泻下作用，故对胃肠实热有"釜底抽薪"之功。大黄久煎或炮制之后，致泻成份分解，作用减弱，而芒硝在肠内不易被吸收，使肠内渗透压升高，大量水分保留在肠腔，机械性刺激肠壁而致泻。故生大黄与芒硝配伍有"增水行舟，润燥软坚"之功效，致泻作用增强二药相须为用。峻下热结之力甚强，积滞内阻，则腑气不通，故以厚朴、枳实行气散结，消痞除满，并助硝、黄推荡积滞以加速热结之排泄，共为佐使。器材手术剪、眼科镊、直尺、注射器、灌胃针头、天平，烧杯.搪瓷盘或蛙板。药品炭末生理盐水混悬液0.1g/ml(含炭末0.1g/ml，炭末为活性炭)，大承气汤水煎液2g/ml(含炭末0.1g/m1)，苦味酸。动物小白鼠。方法取禁食2024h，成年、体重相近的4只小白鼠，随机分为2组，每组2只，用苦味酸标记。分别用上述4种炭末液0.3ml/10g体重灌胃。给药30min后脱颈椎处死，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲部的肠管，置于托盘上。轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度作为"小肠总长度"。从幽门至炭末前沿的距离作为"炭末在肠内推进距离"。取各组2只小自鼠平均值，用公式汁算炭末推进百分率，并注意观察各组小肠容积是否增大。炭末在肠内推进距离(cm)炭末推进率=×100%小肠全长(cm)结果按结果记录分析并填表。表大承气汤对小白鼠肠蠕动的影响(X±SD)组别动物数(只)剂量(g/kg)小肠总长度(cm)炭末推进距离(cm)炭末推进率(%)生理盐水大承气汤注意(1)实验动物体重越接近越好，平均体重最好用2325g小鼠，肠管比较粗大，易于操作。(2)开始给药至处死动物的时间必须准确，以免时间不同造成实验误差。(3)轻拉小肠，尽量减少由于外力造成的肠管长度的误差。思考题(1)大黄致泻的主要成分及作用机理是什么?(2)大黄加芒硝为何致泻作用增强?有哪些主要方剂有大黄与芒硝配伍使用?实验过程：1，实验以小组为单位进行，这就是一个分工合作，互相配合的过程。所以要求各小组的成员明确责任，各司其职。有负责称重抽取药物的，有负责抓取动物灌胃的，有负责计时的，有负责剖腹截取肠管的，有负责量取长度的。2，领取动物，每组4只。尽量取相似体重的分到不同组中。编号称重并灌胃。同时记录灌胃时间。3，处死动物，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲部的肠管，进行测量。并记录。4，实验完毕，收拾实验台和实验室。人参对小白鼠游泳时间的影响【性味】甘微苦，温。【归经】入脾、肺经。【功用主治】大补元气，固脱生津，安神。【主要成分】人参皂甙和少量挥发油1.对中枢神经系统的作用2.提高机体的适应性人参可改变机体的反应性，与刺五加、北五味子等相似，具有"适应原"样作用，即能增强机体对各种有害刺激的反应能力，加强机体适应性。3.对心血管系统的作用4.抗休克作用目的观察人参对小鼠游泳时间的影响，掌握抗疲劳作用药物的常用筛选方法。原理人参能促进人体对糖原和三磷酸腺苷等能量物质的合理利用，并使剧烈运动时产生的乳酸转化为丙酮酸进入三羧酸循环，为机体提供更多的能量，减轻体力运动时的疲劳。本实验以小鼠游泳时间为指标观察人参的抗疲劳作用。器材天平、玻璃缸、负重物、温度计、小鼠灌胃器、秒表。药品人参水煎液2.5g/ml、生理盐水、苦味酸液。动物小鼠，体重1822g。方法玻璃缸内加水，水深20cm，水温保持在20±0.5。取2只小鼠，雌雄不限，称重，用苦味酸标记，随机分为两组。给药组每只灌胃人参水煎液0.25ml/10g，对照组每只灌胃等容量的生理盐水，给药后30min在尾部束一2g的重物，并分别放入玻璃缸内游泳，立即计时并注意观察，当小鼠头部沉入水中10s不能浮出水面者即为体力耗竭，停止计时，记录小鼠游泳时间。与对照组比较并进行统计学处理。综合全实验室的结果，分别算出两组的平均游泳时间结果按表记录注意(1)小鼠应该单只游泳，如果两只以上同时游泳，会影响实验结果。(2)水温过高或小鼠负重物较轻均可使小鼠游泳时间明显延长。豚鼠是啮齿目豚鼠科的通称，因肥笨且头部长的像猪,也叫荷兰猪。豚鼠科共5属15种，为南美洲特产。栖息于岩石坡、草地、林缘和沼泽。穴居，集成510只的小群，夜间寻食，主要吃植物的绿色部分。豚鼠的抓取先用手掌以稳准的手法迅速扣住豚鼠背部，抓住其肩胛上方，将手张开，用手指握住颈部，或握住身体的四周，再拿起来。怀孕或体重较大的豚鼠，应以另手托其臀部。豚鼠经口灌胃给药方法把豚鼠放在实验台上，用一块干纱布罩住其头，将豚鼠固定在左手掌下，用拇指和食指挤压其口角部让口张开。然后，右手持抽好药物的灌胃器，沿豚鼠上腭壁插入食道。如果灌胃器插入顺畅，位置正确，豚鼠会自动吞咽。否则，豚鼠会乱动，此时应立即拔出灌胃器，重新插入灌胃器，灌胃器进入深度为5cm左右。豚鼠一次灌胃最大容量2.0ml/100g.w。颈椎脱臼处死法此法是将实验动物的颈椎脱臼，断离脊髓致死，为大、小鼠最常用的处死方法。操作时实验人员用右手抓住鼠尾根部并将其提起，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按压鼠头及颈部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成颈椎脱臼，脊髓与脑干断离，实验动物立即死亡。击打头盖骨处死法主要用于豚鼠和兔的处死。操作时抓住实验动物尾部并提起，用木锤等硬物猛烈打击实验动物头部，使大脑中枢遭到破坏，实验动物痉挛并死亡。小青龙汤对组胺和乙酰胆碱致豚鼠哮喘模型的影响【目的】学习组胺和乙酰胆碱喷雾引喘法。观察小青龙汤的平喘作用。【原理】具有支气管收缩作用的药物如组胺、乙酰胆碱等，以喷雾法给予豚鼠吸入，可引起豚鼠呼吸急促、喘息，甚至窒息，从而导致豚鼠抽搐而跌倒。小青龙汤有阻断腺苷受体的作用，进而松弛支气管平滑肌，发挥平喘作用。【器材】天平、注射器、喷雾装置(可用超声雾化器)、秒表。【药品】0.4g/100ml磷酸组胺溶液、2g/100ml氯化乙酰胆碱、100g/100ml小青龙汤、0.85g/100ml生理盐水。【动物】英国种幼年豚鼠，体重150g左右。【方法】将筛选合格的豚鼠称重，随机分为两组，即空白对照组、小青龙汤组。空白对照组按10ml/kg灌胃给予生理盐水，小青龙汤组按10g/kg灌胃给予小青龙汤(给药体积为10ml/kg)，每组给药结束时计时。30min后(小青龙汤组的豚鼠为灌胃后60min)分别放入密闭的喷雾装置内，随即喷入磷酸组胺和氯化乙酰胆碱1：2混合液15秒。豚鼠在吸入混合液后经过一段潜伏期即产生"哮喘反应"。"哮喘反应"可分为4级，级呈现呼吸加速，级呈现呼吸困难，级呈现痉挛，级呈现跌倒、翻滚。记录各组动物至给予混合液到出现跌倒的时间即哮喘潜伏期，实验步骤1、领取动物，分组，标记，称重。2、对实验动物灌胃并计时。3、雾化致哮喘。4、计时并分析。实验结果【注意事项】豚鼠必须选用幼鼠，且体重不超过200g。每鼠每日只能测定一次引喘潜伏期，同日多次测定会影响实验结果。特别声明：1：资料来源于互联网，版权归属原作者2：资料内容属于网络意见，与本账号立场无关3：如有侵权，请告知，立即删除。105103105822105103105822