POCT产品方法学分析.doc

POCT的技术学分类分类方法原理简单显色直接观察/半定量酶标记免疫学反应免疫渗滤和免疫层析免疫学反应生物传感器光学和电学方法识别酶和抗体电化学检测电子探头对某些化学分子的敏感性分光光度光学吸光度生物芯片蛋白质之间相互作用目前应用的具体技术归纳起来主要有：一、干化学技术干化学技术是将多种反应试剂，干燥在纸片上，用被测样品中所存在的液体作反应介质，被测成分直接与固化于载体上的干试剂进行反应。加上检验标本后产生颜色反应，用眼观定性或仪器检测（半定量）。适用于全血，血清，血浆，尿液等各类样品。例如：前降钙素（PCT）的半定量检测就是使用此种方法。尿液蛋白质、葡萄糖等一般化学检查也都属于此范畴。近几年，干化学尿液分析取得了很大的进展，各型尿沉渣分析仪相继问世，为临床提供一个简便、快速的筛选方法，即将完全正常的标本通过干化学尿液分析仪筛选出去，有利于对异常的标本进行规范性检查。中华医学会经过三次专家研讨会，制定了筛选标准，即在干化学尿试带全部为阴性时，可以免去对红细胞和白细胞的显微镜检查，如果有一项阳性结果，必须同时进行显微镜检查。换句话说，迄今为止无一台仪器检查能完全替代显微镜检查，尿沉渣显微镜检查以它特有临床价值仍是尿液分析中不可缺少的检查手段。二、多层涂膜技术多层涂膜技术是从感光胶片制作技术移植而来。将多种反应试剂依次涂布在片基上，制成干片。采用多层涂膜技术制成的干片，比干化学纸片平整均匀，用仪器检测，可以准确定量，如目前临床使用的干板化学分析系统，可用于大多数血液化学成分，如蛋白质、糖类、脂类、酶、电解质、非蛋白氮类及一些血药浓度的监测，可供检测的项目达数十项，几乎覆盖了常做的临床生化检验项目。由于其操作简便、快速、常用于急诊检查，也相应推出了一些小型仪器，可做床边检验，但干片成本较高。三、免疫层析、色谱法POCT条带技术能用于测定蛋白质和酶，如心肌标志物，激素和各种蛋白质等，多为定性试验。基质中分析物的分离是通过纸层析法完成的，并且凭借固定在层析带表面的特异性抗体捕获目标分析物，用于定性分析，这种检测可通过观察颜色完成。另外也有小型定量测定仪，如瑞士Roche公司的心肌标志测读仪（Cardiac Reader），可用于测定肌钙蛋白T和肌红蛋白，尚可测定D-二聚体等。Males RG等人研究发现生物化学标志物对于急性心肌梗塞（AMI）的诊断越来越重要，尤其当心电图对诊断没有帮助时。POCT技术可以在病人原位进行诊断分析，最常被医生用于帮助诊断AMI的生化标志物有肌红蛋白（Mb），CK-MB，肌钙蛋白（cTnI）和肌钙蛋白T（cTnT），这些都可以用POCT技术来检查，而且其性能可与实验室依据的心肌标志物相比。胶体金技术也属于POCT的范畴，胶体金、银、硒及色素（包括荧光色素和非荧光色素）可以牢固吸附在抗体的表面而不影响抗体的活性，当标记抗体与抗原反应聚集到一定浓度时，可以直接呈现颜色。目前，金、银、硒及色素标记免疫反应的方法主要有斑点渗滤法和免疫层析法，用于快速检测蛋白质类和多肽类抗原，如cTnT、血清白蛋白、hs-CRP及一些病毒如HBV、HCV、HIV等的抗原和抗体定性。配合小型检测仪，可做半定量和定量。目前，有些公司采用免疫层析双抗原、双抗体夹心法原理，结合胶体金标记技术相继开发了生殖内分泌、传染性疾病、性病、肿瘤标志物、毒品等类几十项，近百种规格的胶体金检测试产品。如HCG测试卡，HBV测试卡等。Shiach CR等人用POCT在实验室测定凝血酶原时间（PT）发现两组INR时间是相似的，分别为60.19%和59.13%，调查问卷显示对POCT监测病人显示很满意。四、选择性电极技术用离子选择性电极结合传感器包括生物传感器和化学传感器技术，制成了便携式快速检测血气（PH、PCO2、PO2等）和电解质（K+、Na+、Cl-等）的仪器，已被广泛应用于临床。五、红外和远红外分光光度技术常用于制作经皮检测仪器，可用于检测血液血红蛋白、胆红素、葡萄糖等多种成分。这类检测仪器可连续监测病人血液中的目的成分，无需抽血，这可以避免抽血可能引起的交叉感染和血液标本的污染，降低每次检验的成本和缩短报告时间。但是，这类经皮检测结果的准确性有待提高。六、生物传感器新一代POCT仪使用生物传感器。一个生物传感器偶联一个特定的生物检测器（如酶、抗体或核酸探针）到一个换能器用于靶分析物的直接测定而无需从基质中分离它。它体现了酶化学、免疫化学、电化学与计算机技术的结合。应用它可以对生物体液中的分析物进行超微量的分析，成为检验医学的最佳框架。例如电解质的检测。商业的POCT仪器用电化学技术（如微型离子选择电极）和光学生物传感器去测定葡萄糖，电解质和动脉血气。随着抗体固定技术和特异DNA序列的应用，生物传感器探针将很快用于检测激素、药物、难于培养的细菌、病毒如衣原体、结核菌、人类免疫缺陷病毒。七、生物芯片生物芯片是利用上世纪末提出的以微电加工技术（Micro Electro Mechanical System，MEMS）为基础的微全分析系统（iniaturized Total Analysis System，uTAS）的概念，将所有试样处理及测定步骤合并于一体，分析人员可在很短时间和空间间隔内获取电信号形式表达的化学信息。微流控芯片（Microfluidic Chip）是uTAS中当前最活跃的领域和发展前沿，它集中地体现了将分析实验室功能转移到芯片上的理想，即芯片实验室（Lab-On-a-Chip，LOC），是系统集成微刻技术的结晶，是可以完成生物化学分析仪的微型芯片。实现对原有检验仪器微型化，制成便携式仪器，用于床边检验。如血细胞分析、酶联免疫吸附试验（ELISA），血液气体和电解质分析等都可进行POCT。目前生物芯片可分为基因芯片（Gene chip或DNA chip）、蛋白质芯片（protein chip）、细胞芯片（cell chip）和芯片实验室（Lab-On-a-Chip，LOC），它们具有高灵敏度、分析时间短、同时分析项目多等优点，它是将生命科学研究中所涉及的许多分析步骤，利用微电子、微机械、物理技术、传感器技术、计算机技术，使样品检测、分析过程，连续化、集成化、微型化，而且它还可促进缩微实验室的构建。而缩微实验室具有体积小、携带方便，能同时检验多种生物分子的特点，在军事医学领域中有巨大应用价值，随着科学技术的发展，在不久的将来芯片式的POCT仪将会逐步应用到各个领域。如蛋白质芯片已经应用于很多领域，包括生物标志物的检测，生物分子间相互作用的研究与质谱分析以及药物靶标及其作用机制的研究。缺陷1、质量控制体系不完善目前虽有不少报道证明了POCT的优越性，但缺乏严密的对照实验，因而很难说明问题，所以加强这方面的研究对明确如何合理应用POCT是至关重要的，应该对其地位和用途适当把握，否则任何滥用将把事物推向错误的绝端。而且目前尚未形成严格的质量保证体系和管理规范，所以实验结果质量不易保证。实验室结果质量必须有助于优质的医疗服务，不准确和不可靠的结果甚至比不作测试更糟。对于POCT结果可靠性的诸多争议，厂商和使用者都应予以重视。质量控制的难点在于不同于以往的均质的液相试剂，一批试剂可作成千上万个标本，质量是一致的，而现在POCT每一个测试单元都是独立的，怎么保证每一批产品，每个测试单元质量都是一样的？为了改进此问题，一种对患者测试数据具有储存、回放、分析、观察和制作质控图表的仪器的产生是必要的，Searles B等人已经尝试了一种数据管理软件用于解决此问题。2、检验成本偏高POCT所采用的方法都是凝聚着物理、化学、免疫、分子生物学、计算机科学等的尖端科技，同时POCT一般都是单个实验测试、单个项目为主，这和我们传统的检验科（或中心实验室）集中处理、组合处理病人样本相比，成本会高出许多。然而卫生经济学的宗旨是投资有限的资源，以期达到最大的健康利益。因此欲以用高成本的POCT检验获取高利润的做法是不可取的，更不能以此来取得较可观的利益。3、操作者的技术水平参差不齐POCT的操作者应是经过培训合格的专业或非专业检验人员或非检验医务人员，他们必须理解有关的检测原理并能熟练操作，还应具备标本采集、质量控制、结果记录和判断、仪器保养、试剂保存等多方面的知识和技能。然而，目前仍然有很多POCT操作者是未经过技术培训的医生、护士甚至是病人、病人家属，无形中降低了POCT的准确性和应有的技术含量。4、临床管理不够完善（1）POCT的法律法规不健全。在美国从事POCT的非检验人员，必须经过考核和培训，在达到一定的要求后，方可被正式认可参加POCT的质量工作；（2）POCT的行政管理和规章制度不完善。临床科室开展的POCT一般由医生活护士完成而不是由检验人员独立完成，职责分工不明及操作者专业知识欠缺，影响结果的准确性和可重复性；（3）POCT的结果报告形式混乱。POCT的结果报告应有统一的格式，且应与检验科的报告单有所区别。由于部分POCT的仪器方法学的缺陷，灵敏性和重复性欠佳，线性范围窄，只是急诊或急救时用于参考，必要时需要送到检验科进行复查，不同的报告格式就显得非常重要。同时由于POCT多数采用便携式仪器分散进行，检验结果常未纳入实验室资料管理系统或电子病理，对医院的医疗管理造成漏洞。 POCT需要注意的问题（一）质量是关键，质量就是生命POCT有如上许多特点，许多优势，但其能否按我们预期的设想发展，关键还在于质量。其质量的难点在于不同于以往均质的液相试剂。一批试剂可做成千上万个标本。质量是一致的；而现在POCT每一个测试单元都是独立的，怎么保证每一批产品，每批产品中每个测试单元质量都是一样的？十分困难，质量怎么控制至今没有完全成熟的经验或法规。质量涉及病人的生命，也直接关系生产厂商的生存竞争。（二）定性、定量与标准化POCT的早期产品都是定性，现在逐渐出现了定量产品。有用色卡对比的半定量，也有能制作标准曲线（或出厂前制作好的）用比色、测荧光的全定量产品。定性还是定量并不是由厂方决定，也不是说定量比定性高级，而是根据实际的需要，有些东西无法或无需定量，如性传染病检测、毒品检测，而有些东西又必须定量，如CRP、HbAlc、CTn、BNP等，因为它需要诊断也需要随访。但必须指出其性（是质）其量都必须有根据，可溯源，即其物质性质，其定量的基准要与现行的实验室认可标准有一致性，有可比性，不能由厂商自行标定。即使是定性，其实质还是有一个量的cut off ，如尿HCG阳性，应定位25MIU/ml，不能随意更动，定高了，假阴性多，定低了，假阳性多。 （三）、使用条件控制和人员培训POCT产品无论是生化、免疫、分子生物技术做成的其使用、保存仍然会受到时间、温度、湿度、光线等客观条件的影响，无论是显色、免疫结合、分子杂交在低温下必然慢，在高温下必然快，用肉眼判读时，时间短、光线暗读为阴性，时间一长，光线一亮读成了阳性。所以厂商在产品说明中必须注明必要的条件，操作者也必须遵守这些要求。POCT操作虽简单，但不可能让完全没有医学知识、无需一点培训的人员来操作。美国、欧洲等国已初步制定了POCT人员培训的要求，各质量准许、质量管理的办法，国内不久也将颁发相应的规定。循征医学要求用当前最新的研究成果为临床提供证据，要求建立最适当、最经济的诊断途径，POCT以其缩微的高新技术，快速而正确的即时报告，顺应了这一发展趋势，又因其能提高诊治效率，降低总医疗支出而进一步促进循征医学在临床上的贯彻执行。（医疗器械部） POCT-诊断技术的新革命POCT的发展和临床应用其涉及面之广，影响面之大，前所未有。正如循证医学中所说“实验诊断的发展不仅提高了疾病的诊断水平，甚至可以改变治疗方案，提高治疗效果”。POCT把它视为诊断技术的新革命，和对传统检验的巨大挑战，其理由是：诊断流程的变革检验成为临床对病人进行循证诊治不可或缺的重要依据，从医生开具检验单到拿到报告，必须经过十多个步骤，急诊检验最快要半个小时到一个小时，日常检验要一天或数天后才能拿到报告，反馈时间很长，作为中心实验室，面队大量的病员，批量的标本，必须这样做，无法省略任一步骤。关于TAT的问题，有人做过专门研究。TAT实际包括分析前、分析中和分析后三段时间，实际上分析中的时间最少，大量时间消耗在分析前和分析后，同时样品在离开病人现场后的传送中发生差错的机会也逐步增加，所以单靠分析技术的加速而流程不变的话，仍难达到STAT的目的。POCT之所以能够满足STAT的要求，不仅是由于分析方法简单、快速、正确，同时因为是现场分析，大大减少了样品转送流程，既缩短了报告时间，也降低了发生差错的机会，可以说是实现了个性化的服务。到医院看病实质上是两大块整体，一块是来看“有没有病”，是筛查性的；另一块是真有病，需医治，是治疗性的。传统的医疗机构分三级（国外称之谓不同的三级护理），现在不管有病无病都涌向三级医院，或逐级就医（以前尚需转诊），造成各级医院忙闲不均，卫生资源极大浪费，事实上病员中有一半是去问病，查病的，而有病的当中绝大部分是常见病，多发病，根本无需去大型的三级医院，造成就医拥挤，卫生资源过度浪费。大部分的筛查、鉴别、随访工作，倘若有正确的方法和合理科学的使用准则，完全可以在基层卫生系统，在病人附近得以解决。国外从卫生经济学和卫生资源利用率的调查研究发现，同一地区，同样的人口，将原来的多种大中医院，少量社区卫生所集中为一个大型综合医院（负责整个地区居民的疑难、重症病员的诊治）和多个社区卫生所（负责常见病、多发病的诊治和居民健康保健及随访、护理、急诊处理）不仅节约了资金，居民受益更多，健康程度提高。当然，社区医院的水平应有相当的提高，其中POCT将起主要的作用即改变以前“问病拿药”的状态，而是使用POCT以数据为准，同样实施循征医学的行医模式。 POCT的优点1、仪器或试剂体积小、携带方便、容易使用和出结果快速POCT最主要特点是强调出结果快速，大大缩短了实验结果周转时间。对于急诊治疗和抢救的病人，这些病人往往情况危急且病因不明，而传统的临床检验室测量时间一般要15分钟以上，POCT一般在5分钟以内即可完成测试，医生根据POCT提供的信息，对病人及时作出初步诊断并拟定救治方案，必将减少住院时间，降低发病率/死亡率，产生很大的社会效益和经济效益。同时对于一些需要长期监控的慢性病，如糖尿病的病人可以方便地按照医生的要求由病人自己或家属进行血糖和尿糖的监控。2、个性化服务的最佳体现医生根据症状开化验单，门诊病人尤其是对于急诊科的病人，绝大多数的症状都是原始的，没有经过药物或手术处理，医生此时开的化验项目都是针对当时的症状的，这时的化验结果更能反应病人的真实情况，对医生的正确诊治将提供非常有益的帮助。检验人员可即时报告结果利于和病人当面交流，体现了快速满意的人性化服务。3、POCT与临床试验室的比较临床实验室POCT周转时间慢快标本鉴定复杂简单标本处理通常需要不需要血标本类型血清血清、血浆、全血校正操作频繁而且烦琐不频繁并且简单试剂配置需要配制随时可用消耗品使用相对少相对多检测仪复杂度复杂简单对操作者的要求专业人员普通人亦可试验花费低高 POCT也就是及时检验的意思，自身存在的缺点有操作者的技术水平参差不齐、质量控制体系不完善、临床管理不够完善、检验成本偏高，四个缺点具体分析如下：第一、POCT操作者的技术水平参差不齐POCT的操作者应是经过培训合格的专业或非专业检验人员或非检验医务人员，他们必须理解有关的检测原理并能熟练操作，还应具备标本采集、质量控制、结果记录和判断、医疗器械的保养、生物诊断试剂保存等多方面的知识和技能。然而，目前仍然有很多POCT操作者是未经过技术培训的医生、护士甚至是病人、病人家属，无形中降低了POCT的准确性和应有的技术含量。第二、POCT质量控制体系不完善目前虽有不少报道证明了POCT的优越性,但缺乏严密的对照实验,因而很难说明问题,所以加强这方面的研究对明确如何合理应用POCT是至关重要的，应该对其地位和用途适当把握,否则任何滥用将把事物推向错误的绝端。而且目前尚未形成严格的质量保证体系和管理规范,所以实验结果质量不易保证。实验室结果质量必须有助于优质的医疗服务,不准确和不可靠的结果甚至比不作测试更糟。对于POCT结果可靠性的诸多争议,厂商和使用者都应予以重视。质量控制的难点在于不同于以往的均质的液相试剂，一批试剂可作成千上万个标本，质量是一致的，而现在POCT每一个测试单元都是独立的，怎么保证每一批产品，每个测试单元质量都是一样的？为了改进此问题,一种对患者测试数据具有储存、回放、分析、观察和制作质控图表的医疗器械的产生是必要的。第三、POCT临床管理不够完善1、POCT的法律法规不健全。在美国从事POCT的非检验人员，必须经过考核和培训，在达到一定的要求后，方可被正式认可参加POCT的质量工作；2、POCT的行政管理和规章制度不完善。临床科室开展的POCT一般由医生活护士完成而不是由检验人员独立完成，职责分工不明及操作者专业知识欠缺，影响结果的准确性和可重复性；3、POCT的结果报告形式混乱。POCT的结果报告应有统一的格式，且应与检验科的报告单有所区别。由于部分POCT的仪器方法学的缺陷，灵敏性和重复性欠佳，线性范围窄，只是急诊或急救时用于参考，必要时需要送到检验科进行复查，不同的报告格式就显得非常重要。同时由于POCT多数采用便携式医疗器械（如：便携式血红蛋白仪等）分散进行，检验结果常未纳入实验室资料管理系统或电子病理，对医院的医疗管理造成漏洞。第四、POCT检验成本偏高POCT所采用的方法都是凝聚着物理、化学、免疫、分子生物学、计算机科学等的尖端科技，同时POCT一般都是单个实验测试、单个项目为主，这和我们传统的检验科（或中心实验室）集中处理、组合处理病人样本相比，成本会高出许多。 化学发光法与POCT法测定肌钙蛋白I结果的比较及分析 【摘要】 目的：分析比较化学发光法与POCT法测定血清肌钙蛋白I（cTnI）在临床中的作用。方法：采用化学发光法与POCT法分别测定67例急性心肌梗死患者（cTnI）水平。结果：在cTnI低浓度和高浓度时，两方法的测定结果比较差异有统计学意义（P <0.05）。在cTnI中浓度两方法的测定结果比较差异无统计学意义（P0.05）。结论：化学发光法灵敏度高，且准确性好，适于急性心肌梗死临床诊断和监测，POCT法快速简便，适于急性心血管患者的急诊检测和初步筛查。【关键词】 化学发光法；POCT法；肌钙蛋白I POCT（Point of care test）也叫即时检验1,是一种快速简便、效率高、周期短的检验方法。对于急诊患者尤其是致残和致死率较高的急性心血管患者，POCT法可以协助临床医生尽早为患者作出明确诊断及治疗，对于控制病情发展、降低死亡率有重大的意义。急性心血管疾病如急性心肌梗死又是大多数心血管疾病的最主要死亡病因，临床快速诊断对于患者抢救和治疗以及控制病情发展十分重要。随着检验技术的不断发展，近年来血清心肌标志物在临床的应用得到了越来越广泛的重视。其中的心肌蛋白质类标志物如心肌肌钙蛋白I（cTnI）对心肌损伤有高度的特异性和敏感性，已成为临床诊断心肌损伤的确定标志物2，尤其对于急性心肌梗死（AMI）的临床诊断具有重要意义。cTnI是心肌细胞的一种结构蛋白，当心肌细胞因缺血、缺氧而变性、坏死时，cTnI透过细胞膜大量释放入血。有研究指出3，cTnI对AMI的早期诊断具有较好的价值,且可作为诊断AMI的标准之一。我院检验科采用两种实验方法化学发光法及POCT法测定cTnI,由于使用了不同的试剂、校准品和质控品,各自成为一个独立的检测系统,使检验结果的准确性和一致性难以得到保证,为了解两种方法是否具有可比性和一致性,根据卫生部临床检验中心关于实验室内质量控制校准和内部比对要求4，对本科室测定肌钙蛋白I的贝克曼化学发光仪与POCT仪结果进行比较分析，现报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料 选取20072009年本院心内科门诊及住院的急性心血管疾病患者67例，年龄3887岁，平均68岁。男性39人，女性28人。1.2 纳入标准 根据叶任高主编的第5版内科学的诊断标准5，均确诊为急性心肌梗死。1.3 仪器和试剂 美国BACKMAN ACCESS化学发光仪及其配套的校准液、质控物和试剂。美国PBM公司肌钙蛋白I快速测试板(采用固相免疫层析法)，及与测试板配套的DxpressTM便携式台式检测仪。1.4 方法 抽取静脉血6mL，注入两个干试管,待血液凝固后,3000r/min离心5min分离血清待用,分别用化学发光法和POCT法检测cTnI,记录检验结果。根据化学发光法测定的结果，分成4组进行比较。仪器的日常维护、试剂定标、质量控制、样本测试均严格按照说明书进行。化学发光仪cTnI线性范围0.0050.00ng/mL, 参考值为00.05ng/mL；POCT仪cTnI线性范围0.0530.00ng/mL, 参考值为00.05ng/mL。1.5 统计学处理 采用SPSS12.0软件进行分析。以均数±标准差(±s) 表示，计量资料比较采用t检验，检验水准为=0.05。2 结果 化学发光法和POCT法测定cTnI的结果比较见表1。在低浓度（0.05ng/mL)和高浓度（30.01ng/mL)时，两方法的测定结果比较差异有统计学意义（P <0.05）；在中浓度（0.0530.00ng/mL)，两方法的测定结果比较差异无统计学意义（P0.05）。表1 两种方法测定肌钙蛋白I结果比较(略)3 讨论 血清cTnI在急性心肌梗死(AMI)患者中可明显增高，AMI后26h cTnI即可升高，并可持续37d，具有出现时间早、特异性强、窗口期长等优点，对AMI的早期诊断具有较好的价值，已逐渐成为诊断AMI的金标准3，且cTnI与心肌梗死的产生程度相关，可作为动态监测及预后。因此,cTnI可作为高效、快速、便捷的心肌标志物及时为临床提供诊疗依据，临床对于急性心血管疾病尤其可疑急性心肌梗死者应及早检测cTnI，可提高临床诊断的准确率,并为疾病的治疗、疗效的评价以及预后评估提供实验室依据。POCT法快速简便、效率高，检验周期短(大约20min)，检测仪器、试剂携带便捷,且操作方便。POCT是检验医学发展的新领域, 顺应了当今社会高效率、快节奏的工作模式，满足了临床工作者和患者在时间上的需求，尤其对于急性心血管疾病如急性心肌梗死，可以使患者尽早得到诊断和治疗，对于控制病情发展、降低死亡率有重大的意义。但是，POCT仪测定结果的准确与否，会给临床诊断、治疗带来较大的影响，评价并保证POCT仪的准确性成为急需解决的问题。本组资料中，以化学发光法测定结果为标准，其理由为:(1)化学发光法为全自动，避免了人为误差；(2)化学发光仪的试剂定标、质量控制、仪器保养等程序较为完善；(3) 化学发光仪所测的其他项目如肿瘤标志物、激素类的多个项目的室内质控成绩以及参加省临检中心、卫生部室间质控成绩优秀；(4)化学发光法线性范围较POCT法更宽。通过比较，可以看出，cTnI在低浓度（0.05ng/mL)和高浓度（30.01ng/mL)时，两种方法的测定结果比较有差异，这是由于两种方法的检测线性范围不同, POCT法受方法学所限；在中浓度（0.0530.00ng/mL)时，两种方法的测定结果比较无统计学差异，说明两种方法在线性范围内具有可比性和一致性。因此，笔者认为，POCT法快速简便，可用于急性心肌梗死患者的急诊检测和初步筛查，但不适用于批量标本检测（仪器每次只能检测一块测试板），也不适用于心肌梗死患者早期诊断和治疗监测；而化学发光法结合了高灵敏的化学发光技术与高特异的免疫反应，具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽、可实现自动化等特点，适于急性心肌梗死临床早期诊断（或排除）以及治疗过程中的疗效监测。POCT法定期与化学发光法的测定结果进行比较，也是提高POCT仪检测准确性、线性范围的重要手段。化学发光检测原理化学发光作为一种分析工具的吸引之处就在于检测的简单性。化学发光的实质是自身发光，这意味着化学发光的分析测试仪器只需要提供一种可以检测光信号和纪录结果的方法就可以了。自发光检测仪需要一个闭光的样品室和光检测器。最简单的便是相片纸或X光片，甚至视觉检测器都可以。化学发光检测方法的简单性使得它的应用很简单并且完全可以自动化。但是它的灵敏度又是怎么样的呢？化学发光有如下两个内在的优势：1绝大多数的样品没有“背景”信号，如它们自身不发光。2化学发光的检测不是一个比例测试，这是与荧光和吸收或比色测试不同的。在荧光测试中，具有小的Stokes Shift的荧光基团非常难检测。荧光很难从激发波长中分辨出来。另外一个问题是，特别在样品是浑浊的情况下有一部分杂光会进入到检测器。在吸收光测试上，其灵敏度受到限制的根本因素是需要在两个相对较强的信号之间去区分一个较小的差别。需要注意的是检测器对光谱的敏感性近可能接近化学发光的光谱，以得到最大化的灵敏度。一般在自发光仪中的光电倍增管对蓝光有最佳的反应，对红光的末端光谱不太敏感。固态检测器对红光有较好的反应。X光片广泛用于记录在尼龙膜、纤维素膜或PVDF膜上的化学发光印迹分析。但是我们需要牢记在心的是X光片仅能够用于检测紫外到蓝光光谱范围内的光信号，虽然有一些特殊的光片对增强的绿光有敏感性。液体样品的检测有一些特定的词来描绘化学发光检测：灵敏度、线性和动态范围。每一个词的意义如下：1灵敏度指的是某种东西可靠检测的最低水平。“某种东西”是指在一个分析测试中的测试物。测试物是被标记了一种可检测的东西，如化学发光化合物或的一种酶。分析物也可以是一种通过与具有标记的亲合物有特异性结合反应而检测的物质。所谓的可靠检测指的是针对一个空白测试样品，检测器能够重复感应到最低水平的信号，而这种信号是由所检测物本身产生的。2线性描述的是信号与分析检测物浓度范围之间的关系。理想的比例因子是常数；信号点与分析检测物是一条直线关系。标准曲线可以不是直线，如s形，仍是有用的。3动态范围指的是被检测物浓度与信号单一模式的变换范围。它定义的是分析的工作范围。你期望通过化学发光得到什么水平的灵敏度呢？答案不一定会满足你的要求，“它是有条件的”。在很少情况下，检测器的灵敏度或化学发光方法会是检测的局限因素。现在的检测器可以达到很高的灵敏度。大多数情况下，而是其它的一些因素显示了分析检测的灵敏度。最通常的是生物成分（抗体、酶等）的非特异性结合到反应容器和支持物的表面。例如，免疫分析，印迹实验，核酸杂交和其它的酶联结合实验都是受制于此因素。管和微孔板玻璃、透明或半透明的塑料管、比色皿是化学发光测试比较理想的材料。理想的是光能够通过一个平面然后测试，以减少边际效应。曲面也可以使用，如圆柱型的测试管。用不同的测试管测试比较结果，这些管必须是统一生产的，才可以比较结果。微孔板从化学发光反应中发射出的光是各向同性的，即在各个方向上同等发射出来的。如果一个化学反应是在透明的微孔板中的微孔中进行，光不仅从垂直方向发散，还从水平方向发散出来。光很容易的通过各个孔之间的间隙和孔壁。光较强的孔就会干扰相邻的孔。因此，化学发光测试一般不用透明微孔板。不透明的微孔板和板条主要有两种白色和黑色。使用者需要注意的是黑色的因为有光吸收，所以它的信号会比白色板有很明显的减弱（将近10倍）。因为所有的孔是同等比例的收到影响，所以不管他们的强度，定量并没有问题。白色或黑色板的选择，主要是基于预期检测信号的强弱，白色板用于检测较弱光的检测，黑色板用于检测强光的检测。黑色板的另一优点就是可以削弱非特异性结合所带来的问题。此外，白色板并不是完全同等不透明。为荧光设计的白板的白色素比用于化学发光的白板的要少的多。在荧光检测时，每检测一次，一般在针对一个孔，消除了相邻孔之间的干扰。白色微孔板的好坏很容易检测，只要在板的后面放上一只灯，然后看每个孔。如果穿过的灯光不仅仅是淡淡的，那么用于较强的化学发光底物的分析是会有一些问题的。固相样品的检测（印迹膜）X光片它已经被认为是对固定在膜上的蛋白或核酸进行化学发光检测的强有力的工具，如Southern、Northern和Western杂交的化学发光检测。此类商业化的产品已非常广泛。如果能够控制好非特异性的结合，灵敏度是足够的。如果不能很好控制，将会X光片上曝光过度。解决这个问题的最好策略是减少结合的试剂的量，例如抗体或类似物。曝光时间1到10分钟通常是足够显现大多数的印迹。更长的很少能提高信号/背景。关于灵敏度相对的方面来讲，未得到信号并不意味着分析物的不存在。任何一种光学用膜片都有一个强度阈值，在这个阈值之上银颗粒的光化学转化才能成功。否则会失败，称之为“可逆失败”。在实际操作中，化学发光信号低于阈值强度的结果仅是简单的没有记录。更长时间的曝光也不能克服这个问题。可以通过一些方法来改进，在曝光之前如把膜片放在氢气和氮气的混合气体中预闪，即用低强度的光短时间的照射膜片，以提高光学颗粒的光子。CCD成像技术最近，基于CCD的影像系统已成为化学发光印迹结果获得和记录的好工具。这些系统在信号测试的动态范围上表现出很好的效果。CCD的量度大小为34个级数，而X光片仅为1个级数。摄像时间短，并且可以获得多个影像和容易存储。虽然需要投入设备的购置费，但是可以节省膜片和其它的投入。设备（光电倍增管）在发光仪上，PMT为传统的选择。它们的优势包括良好的灵敏度，宽广的动态范围和较宽的光谱相应。因为PMT具有很低的暗电流，使得它们具有极佳的信噪比。PMT有两种基本模式单光子计数和电流感应。有些复合系统是在每秒百万个光子以下为单光子模式，超过之后为电流感应。PMT单光子计数系统是超灵敏的。用这类检测器主要是为了满足灵敏度要求较高的测试和定量。越高要求的灵敏度，价格越高。样品测试室必须是光密闭性非常好的。如果光太强会损害PMT。PMT电流感应系统也能获得较好的灵敏度，经常用于比单光子计数系统检测的更强的光。对于选择何种模式的PMT检测器，需要与你的实际需要结合起来选择。现在，这两种检测器的化学发光仪操作都比较简单，灵敏度也都比较好。对此有一个正确的理解，你就可以选择一个比较适合你的应用的设备。PMT主要应用在液相中化学发光的检测，仪器形式可以为管式和板式。其检测结果单位值为RLU（Relative Light Unit），各个公司生产的产品其对RLU的定义会有所不同。固态检测光电二极管能够感应比光电倍增管所感应的更强的光强度。对于那些需要测试高强度光的应用，选择这样的检测器比较好。然而，固态检测器的暗电流比光电倍增管一般要高很多。解决这个问题的方法之一是通过Peltier或者是其它的热电制冷设备冷却固态检测器。在030摄氏度范围内，固态检测器的暗电流随温度的降低会急剧下降。冷却的检测器能够整合1到100秒范围内所检测到光信号而不会被暗电流所覆盖。CCD和其它的固态检测器拥有以下几个内在的优点：1、在可见光谱范围内，固态检测器有一个较好的光谱响应。发光反应发出红光，甚至近红外光。2、CCD影像系统可以对不同的目标物进行检测。基本上任何一种样品或容器都可以适用，如微孔板，细菌测试管或细胞培养皿，电泳凝胶和印迹膜。3、单个PMT系统在测读之前必须对样品位置进行定位。样品管重复多次带到一个固定位置，然后重复测读。微孔板PMT测读仪依赖于微孔之间的标准间隔，能够按照一个预算好的位置移动微孔板，由此微孔一个接着一个的测读。而摄像系统测读一个样品不需要预先知道它的位置，例如膜上的一个条带。影像系统能够把样品的浓度和位置信息给出。4、CCD影像系统能够同时获得大量样品的信息。如对96、384或更多数目的微孔板的数据的同步收集并不是一个奢望。固态影像系统可以一次就获得整个微孔板的影像和定量。仪器设计者或终端使用者需要注意的是影像检测器对于微孔板样品的检测存在一个重大的缺陷：三维的微孔板相比于二维检测物（如膜）会产生一个边际效应。因为光强度按照距离平方的倒数逐渐变弱，所以把摄像头放到尽可能离板近的地方由此可以得到最好的结果。然而，因为孔是有深度，最远孔的整个底部就可能看不到。这个孔的边缘部分的光信号就很可能检测不到。提高摄像头将削减检测器所获得的整体的光强度。几何计算模式可以拿来应用以弥补边际强度的丢失，但是外围孔的信噪比必然比中央孔的要差。CCD应用最普遍的设备系统为带制冷CCD的化学发光凝胶成像系统。为了提高检测速度和通量，有时也把CCD应用到高通量的板式化学发光检测仪上。辅助设备大多数研究用的发光仪和发光免疫分析仪都装有一些辅助装置，如样品孵育，样品注射器，光学滤光片等。1.、温度控制有时需要的结果进行比较，会因为温度的不同而收到干扰。特别是在一些酶催化的“glow”型的反应需要几分钟才能达到高峰，温度的变化会导致测试到的强度发生变化，降低分析的精确性。如果能够控制样品的温度和反应温度的统一，可以使得反应在固定条件下进行。样品发光强度可能由几个因素造成的：温度依赖的酶动力学和随后的底物化学反应动力学。缓冲液的pH值加上温度的影响可以引起信号的显著变化。2、单色分光和滤光片可以分离特定的波长或光谱范围的光。在化学发光应用中一般没有特殊的要求，它们是不需要的。在同一个反应体系中有两种能够发出不同光谱的发光物，其目的是为了分析检测两种不同的测试物。如在生物化学发光能量共振转移中，就用滤光片来分析蛋白质的相互结合。波长的选择不免会降低检测器上的光通过量从而倒是灵敏度的损失。3、中性滤光片使用中型滤光片可以是检测设备的检测范围延伸23个数量级。由特制的浅灰玻璃组成，放置于样品与监测器之间，这些滤镜起到类似“太阳镜”的作用将所有波长的光都以相同的因子进行减弱。使用此校正因子将测量得到的光校正到“真实”的强度。4、注射器可以使得底物或启动剂能够以精确的时间加入。对于一个随时间光信号产生变化的动力学样品来说，这是非常重要的。