第七章球菌.ppt

,陈民钧老师,北京大学医学院 学术交流中心,第七章 球菌,检验与影像学院 杜纪英,一 生物学性状,二 临床意义,三 微生物学检查法,病原性球菌及检验,掌握：病原性球菌的种类；葡萄球菌、链球菌与奈瑟菌的生物学性状、微生物学检验,目的要求,革兰氏阳性球菌,革兰氏阴性球菌,根据革兰染色的结果,病原性球菌(pathogenic coccus)，又称化脓性球菌(pyogenic coccus)。主要包括葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎球菌、淋球菌等。,葡萄球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌等,奈瑟球菌、布兰汉球菌等,病原性球菌的种类,葡萄球菌,staphylococcus,葡萄球菌属,目前有35个种、17个亚种，引起人类疾病的重要菌有金黄色葡萄球菌（S.aureus），表皮葡萄球菌（S.epidermidis），头状葡萄球菌（S.capitis），人葡萄球菌（S.hominis）等。 临床常以是否产生凝固酶分为凝固酶阳性和凝固酶阴性葡萄球菌（Coagulase negative staphylococcus, CNS）。 根据噬菌体分型，可分成45群26型。 利用质粒大小分型、血清学分型、抗生素分型和细菌DNA的RFLP或PFGE分型，用来研究细菌的致病性、耐药性、流行病学特点和细菌鉴别的关系。 该属细菌DNA G+C mol%为30%39%。,概 述,分布广泛,葡萄球菌在人体上的分布,医务人员鼻咽部带菌率可高达70%或以上，是医院交叉感染的重要传染源！,耐药菌株90%以上，由该菌所致的败血症或脓毒血症，仍占居首位。,一、生物学性状,形态与染色 培养特性 生化反应 分类 抵抗力,1、葡萄球菌的形态与染色（镜下形态）,形态：球形或略呈椭圆形 大小：0.5-1.2m,平均0.8m 排列：呈葡萄串状 染色性：G+,初接种时,There is nothing on it.,2、葡萄球菌的培养特征：营养要求不高,18-24小时后,I can see some small things . They are called colonies.,细菌在常见培养基上的生长情况,肉汤培养基：均匀混浊生 长, 稍有沉淀,普通平板：形成圆形、隆起、表面光滑、湿润、 不透明的菌落，注意颜色,血平板：菌落和溶血情况,3、重要的生化反应,触酶（+），可与链球菌鉴别 葡萄糖、麦芽糖、蔗糖+ 致病株分解甘露醇,分 类,（1）依据菌落色素、凝固酶、A蛋白等不同性状将葡萄球菌分类,（2）根据凝固酶阳性或阴性分类,凝固酶阳性的葡萄球菌 致病性强,凝固酶阴性的葡萄球菌 一般无致病性,（3）根据噬菌体分型 ：5群26型,三种葡萄球菌的主要性状,性状 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌 菌落色素 金黄色 白色 白色或柠檬色 凝固酶 + 分解葡萄糖 + + 分解甘露醇 + 溶血素 + 耐热核酸酶 + A蛋白 + 致病性 强 弱/无 无,菌落特点：单个菌落,抵抗力,是所有无芽胞菌中抵抗力最强的。 对青霉素、红霉素、庆大霉素敏感。 近年来由于广泛应用抗生素，耐药菌株逐年增多尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）已成为医院感染的重要病原菌。,二、致病性,致病物质 所致疾病,（一）致病因素 1.酶类 （1）凝固酶（结合型与游离型） （2）耐热核酸酶 （3）透明质酸酶、磷脂酶 2.毒素 （1）葡萄球菌溶素 （2）肠毒素 （3）毒性休克综合征毒素 （4）杀白细胞素 （5）表皮剥脱毒素,（二）所致疾病,1.化脓性疾病 1）皮肤化脓性感染 2）各种器官的化脓性感染 3）全身感染 2.毒素性疾病 1）食物中毒 2）烫伤样皮肤综合征 3）毒素性休克综合征（TSS） 4）假膜性肠炎 3.医院感染：凝固酶阴性葡萄球菌是人体皮肤黏膜正常菌群之一。,微生物学检验,标本采集,直接涂片镜检,分离培养,检验程序,鉴定方法,检验方法,微生物学检查法,标本:不同病种采取不同标本,化脓病灶 ： 脓液、渗出液 疑为败血症： 血液 脑膜炎： 脑脊液 食物中毒： 剩余食物、呕吐物和粪便,标本采集,检验程序,检验方法,球菌，0.8m左右大小，葡萄串状排列，革兰氏阳性者可作初步诊断,革兰氏染色后镜检:细菌的形态、排列、染色性,1.直接涂片镜检,2.分离培养和鉴定,标本,鉴定,是否是葡萄球菌？,是否是致病性葡萄球菌？,微生物学检查法,观察,涂片镜检,菌落色素、培养基上的溶血环,生化试验（凝固酶试验等）,培养基（平板）,菌落,3.鉴定试验,（1）血浆凝固酶试验 （2）甘露醇发酵试验 （3）耐热核酸酶试验 （4）肠毒素的测定 （5）SPA检测,（1）凝固酶（coagulase)：是鉴定金黄色葡萄球菌的重要标志,当细菌混悬于人或兔血浆时，纤维蛋白原与菌体表面的相应受体结合，发生交联而使细菌凝聚。,（1）玻片法,（测结合型凝固酶）,（2）试管法（测游离型凝固酶）,37水浴3-4h后凝固为阳性，24小时不凝固为阴性,药物敏感试验,药物选择 A组（常规首选药物）苯唑西林、青霉素；组（临床使用主要药物）阿齐霉素、克林霉素、万古霉素组（对组耐受、过敏或无反应者）环丙沙星、庆大霉素、氯霉素 组（尿道中分离的细菌）诺氟沙星、呋喃妥因。 MRS（耐甲氧西林葡萄球菌） 筛选:纸片扩散法 配制0.5麦氏单位菌液接种于普通M-H平板，贴1g/片苯唑西林药敏纸片，35，24h观察结果，金黄色葡萄球菌抑菌圈13为敏感，1112为中介，10为耐药，凝固酶阴性葡萄球菌18为敏感，17为耐药（48h观察结果）。,检验结果分析与报告,1.及时快速鉴定 2.分出凝固酶阳性菌和阴性菌 3.对MRS的药敏报告,Streptococcus,链球菌,copyright 2002,概 述,streptococcus分布广泛,我的鼻咽部就有,形态：球形或略呈 椭圆形 大小：0.6-1.0m 排列：呈链状排列 染色性：G+,形态与染色,生物学性状,培养特征,血平板：形成灰白色、圆形、隆起、表面光滑、半透明或不透明的细小菌落，注意溶血环,生物学性状,营养要求高，常用血平板,血清肉汤培养基，呈沉淀生长,甲型溶血性链球菌的溶血情况,生物学性状,乙型溶血性链球菌的溶血情况,生物学性状,丙型链球菌无溶 血,生物学性状,生化反应,链球菌不产生触酶,链球菌不分解菊糖,不被胆汁溶解,可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎球菌,生物学性状,可与葡萄球菌鉴别,分 类,1、根据溶血能力分类,甲、乙、丙型溶血性链球菌三类,2、根据抗原结构分类：根据细胞壁C抗原（多糖抗原）不同而分为20个群,A、B、C、DU、V(无I、J）群,生物学性状,抵抗力不强。 对青霉素、红霉素、四环素、磺胺敏感， 但目前耐药情况严重,抵抗力,四、微生物学检验,标本采集,直接涂片镜检,分离培养,检验程序,鉴定方法,检验方法,微生物学检查法,标本:不同病种采取不同标本,化脓病灶 ： 脓液、渗出液 疑为败血症： 血液 鼻咽部： 拭子 风湿热： 血清抗链O检测,标本采集,检验方法,球菌，0.5-1.0m左右大小，链状排列，革兰氏阳性者可作初步诊断,革兰氏染色后镜检:细菌的形态、排列、染色性,1.直接涂片镜检,2.分离培养和鉴定,标本,鉴定,是否是链球菌？,是那种链球菌？,微生物学检查法,观察,涂片镜检,菌落色素、培养基上的溶血环,生化试验,培养基（平板）,菌落,初步分类？,3.鉴定试验, 溶血链球菌的鉴定 （1）杆菌肽敏感试验 （2）Lancefield群特异性抗原鉴定 （3）试验 （4）试验 （5） 试验,3.鉴定试验,非 溶血链球菌的鉴定 （1）胆汁溶菌试验 （2）Optochin敏感试验 （3）胆盐七叶苷试验,3.鉴定试验,草绿色链球菌的鉴定 一般鉴定到群,检验程序,药物敏感试验,药物选择 A组：红霉素、青霉素、SMZ B组：头孢吡肟、头孢噻肟、氧氟沙星、培南类 C组：阿莫西林、头孢呋辛、氯霉素、利福平等,检验结果分析与报告,溶血链球菌为毒力强的致病菌应及时报告。 2. 咽部化脓性链球菌易引起并发症，及时报告尽早用药 3. 注意其他链球菌的报告,肺炎链球菌,S.pneumoniae,概 述,一、临床意义,二、生物学性状,三、检验程序,四、药敏试验,五、检验结果的分析与报告,临床意义,以肺部感染为主，多引起大叶性肺炎，若治疗不及时可继发胸膜炎、脓胸、脑膜炎和败血症,生物学性状,形态与染色：G+球菌,矛头状 ,成双排列，宽端相对 ，尖端向外,有荚膜,生物学性状,培养特性：营养要求高，兼性厌氧。初次分离需提供5%-10%的CO2。,18-24h后血平板上形成灰白色、圆形、针尖样的菌落。菌落周围有草绿色溶血环。,生物学性状,培养特性：培养48h后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹陷，像“肚脐”称脐状凹陷。,生物学性状,主要生化反应 optochin试验: 含5g optochin 纸片贴于 涂布有待测菌的平板上35孵育过夜，抑菌圈大于14mm即为敏感。,药敏试验,最后鉴定 发出最终报告,初步鉴定 菌落特征、菌体形态,直接涂片革兰染色,鉴定试验,血平板,营养肉汤增菌,35 5%-10%CO2,18-24h,35,18-24h,第一天,第二天,第三天,检验程序,药物选择： A组 青霉素、红霉素、SMZ B组 头孢吡肟、头孢噻肟、氧氟沙星、培南类 C组 阿莫西林、头孢呋辛、氯霉素、利福平,药敏试验,药敏试验,PRSP的筛选 耐青霉素的肺炎链球菌 （penicillin resistant streptococous pneumonia,PRSP） 1g苯唑西林抑菌圈20mm或MIC0.6 g/ml为PRSP,检验结果分析与报告,1. PRSP对青霉素类和一、二代头孢菌素具有很强的耐药性。应检测三、四代头孢菌素和碳青酶烯类药物的抗菌活性。 2.肺炎链球菌毒力较强，应及时报告给临床。,肠球菌属,Enterococcus,肠球菌属原来归类链球菌属 Schleifer和Kilpper-Balz1在984年正式命名 有19种肠球菌分成5群，临床分离的肠球菌多属于2群。 广泛分布于自然界及人和动物消化道内,形态与染色,形状：单个、成双 或短链球菌 染色：G+ 无荚膜、无芽孢、 部分有鞭毛,培养特性,兼性厌氧菌，最适生长温度35；大多数 菌株在1045均能生长.在含6.5%NaCl 肉汤中能生长,生化反应,在40胆汁培养基中能分解七叶苷，多数菌种PYR试验阳性,不含细胞色素氧化 酶和触酶。 但粪肠球菌培养于血培养基中,可生成细胞色素或触酶 在血平板上取菌触酶可以呈弱阳性。,所致疾病,各类感染，最常见尿路感染、心内膜炎、腹膜炎、牙髓疾病,标本采集 常规采集血、尿、创伤标本和其他拭 子，标本于1小时内接种完毕。,微生物检验,检验程序,微生物检验,检验方法 （1）PVR 试验 （2）胆汁七叶苷试验 （3）盐耐受试验 肠球菌属种的鉴定依赖于糖的代谢,微生物检验,药物敏感试验,药物选择 A组：青霉素、氨苄青霉素 B组：万古霉素 C组：四环素、红霉素、氯霉素、利福平 U组：环丙沙星、诺氟沙星,检验结果分析与报告,肠球菌一般鉴定到种，随着医院感染的增加，流行病学调查越来越重要。,革兰氏阳性球菌鉴定流程,肠球菌属,肠球菌属,奈瑟菌属,Neisseria,淋球菌,脑膜炎球菌,干燥奈氏球菌、微黄奈氏球菌、浅黄奈氏球菌,耐瑟菌属,鼻咽部,鼻咽部,泌尿生殖道,淋球菌,N.Gonorrhoeae,生 物 学 性 状,形态：呈肾形或豆形 排列：成双排列，凹面相对 染色性：G-,1、形态与染色,体内和新分离的菌株有荚膜和菌毛。,培 养 特 性,营养要求高 常用巧克力培养基,专性需氧，初次分离时须供给 5-10% CO2,最适温度 3536，低于30 或高于38.5 不能生长,菌落：无色、圆形、凸起、光滑、透明，似露滴状。血平板上不溶血。,生 化 反 应,氧化酶试验（+）,葡萄糖+,蔗糖,麦 芽 糖,葡 萄 糖,抵抗力：很弱,干燥、热、寒冷及阳光等均十分敏感,室温下三个小时死亡。对其他常用消毒剂极度敏感，体外很难存活。,对青霉素、链霉素、金霉素、磺胺等均很敏感。,传播途径：性接触，人类是淋球菌的唯一宿主。,临床表现（1）男性为前尿道炎 （2）女性为尿道炎和宫颈炎 （3）新生儿淋菌性结膜炎,所致疾病：淋病，为性传播疾病（STD）,传染源：病人,慢性感染,不育,致病性,新生儿可由母亲感染得淋菌性结膜炎,微生物学检查法,标本：脓性分泌物,直接涂片镜检：中性粒细胞内发现有G-双球菌时有诊断价值,分离培养和鉴定 TM、ML培养基 氧化酶（+）,核酸杂交技术/PCR检测,治疗：青霉素类、磺胺类药物等，但应注意耐药问题。,脑膜炎球菌meningococcus,流行性脑脊髓膜炎（流脑）,一、生物学性状,与淋病耐瑟菌相似,培 养 特 性,营养要求高 常用巧克力培养基,专性需氧，初次分离时须供给 5-10% CO2,最适温度 3537，低于30 或高于40 不能生长,菌落：无色、圆形、凸起、光滑、透明，似露滴状。血平板上不溶血。,能产生自溶酶,生化反应,葡萄糖、麦芽糖+ 触酶试验（+） 氧化酶试验（+）,蔗 糖,麦 芽糖,葡萄糖,抵抗力：很弱,对青霉素、链霉素、金霉素、磺胺等均很敏感。,所致疾病：流行性脑脊髓膜炎,传染源 ： 带菌者、病人,传染途径 ： 呼吸道,微生物学检查法,标本：脑脊液、血液、血瘀斑渗出液、 鼻咽部分泌物。,直接涂片镜检：脑脊液、出血瘀斑直接涂片镜检发现细胞内、外有G-双球菌时可作初步诊断。,快速诊断：反向血凝、SPA协同凝集试验、ELISA、PCR等,分离培养和鉴定 接种巧克力平板 ，生化反应,检验程序,脑膜炎球菌实验室判定标准：,菌体及菌落形态典型，在生理盐水中不自凝，发酵葡萄糖和麦芽糖，不发酵其他糖类，在普通培养基上不生长，能与相应分群血清凝集。,药物敏感试验,药物选择 青霉素、头孢类、四环素、环丙沙星和壮观霉素等 治疗首选青霉素，但要注意耐药现象。,检验结果分析与报告,早期快速诊断 诊断报告要慎重,微生物之家（2014年最新的CLSI的更新内容） 微生物论坛 临床微生物检验图谱,谢谢大家！,