第二章植物化学成分的研究程序gai.ppt
第二章 植物化学成分的研究程序,有效成分化学结构的研究方法,文献调研、成分预实验、提取,Content,研究对象的确定 文献资料查阅和信息收集 植物化学成分的预实验 植物化学成分的提取、分离、纯化和结构鉴定 植物化学成分的结构改造和构效关系,第一节 研究对象的确定,依据： 古代医学典籍、民族医学资料或民间经验 当地植物样品随机抽取 植物化学分类学知识 植物化学成分信息 偶然的信息和意外的发现 检索工具（internet）,第二节 文献资料查阅和信息收集,主要专著和教科书 主要工具书和检索工具 期刊杂志 网上查阅文献资料(文献查阅网站、专利） 其他有用信息,第三节 植物化学成分的预实验,在分离活性成分前，先用几种不同极性的溶剂分别进行提取，进行生物活性筛选，确定哪一个溶剂提取部位有效后，再对该部位进行各类化学成分的预试验，从而缩小预实验的范围。,预试验的要求： 1. 预试验之前，了解植物的产地、生物学特性和分类学鉴定，以及借助外观、色、嗅、味等对植物样品所含成分作初步观察，以提供进一步检查的参考。 如：甜味 可能含糖类 苷类 味酸 可能含柠檬酸 苹果酸等羟基酸 味苦 可能含有生物碱 苷类 苦味质 2. 简便快捷且尽量正确 一般试管试验 也可用纸片法 纸色谱或薄层色谱,预试验主要分两类： 一、单向预试法 仅为了测定某一特定成分。主要用水提取液、醇提取液和石油醚提取液来进行某类成分的检验。 二、系统预试法 对植物中的各类成分进行比较全面的定性检查。常用递增极性的方法，依次用石油醚、乙醚、乙醇和水等进行抽提。,植物的化学成分较复杂，有些成分是植物所共有的，如纤维素、蛋白质、油脂、淀粉、糖类、色素等。有些成分仅是某些植物所特有的，如生物碱类、甙类、挥发油、有机酸、鞣质等。,冬虫夏草,各类化学成分均具有一定的特性，一般可由植物的外观、色、嗅、味等作为初步检查判断的手段之一。 如植物样品折断后，断面不油点或挤压后有油迹者，多含油脂或挥发油； 有粉层的多含淀粉、糖类； 嗅之有特殊气味者，大多含有挥发油、香豆精、内酯； 有甜味者多含糖类；味苦者大多含生物碱、甙类、苦味质；味酸者含有有机酸；味涩者多含有鞣质等等。,一、 预试溶液的制备 1、 水提取液糖、多糖、有机酸、皂苷、酚类、鞣质、氨基酸、多肽、蛋白质 2、 乙醇提取液酚类、鞣质、有机酸、香豆素、强心苷、黄酮、蒽醌、甾体 3、 5%HCl-乙醇提取液生物碱 4、 石油醚提取液甾体、萜类、脂肪油,灵芝,预试验的注意事项,1根据各种成分的不同性质，选用适宜的溶剂提取，以保证有效成分能被提取出来。 2试验提取液的浓度应足以达到各该反应的灵敏度。 3试验提取液的酸碱度（pH）值应不致影响鉴别反应中所需要的pH值。相差甚大时应事先调节。 4提取液较深时，容易影响观察鉴别反应的效果，此时可适当稀释，或进一步提纯。,5鉴别反应时应注意防止多类成分的相互干扰，以免出现假阳性，或颜色不正等情况。最好在化学鉴别的同时，做空白试验和对照试验（用已知含某类成分的中草药或纯品做阳性对照）。 6在鉴别试验中，如果某一类成分的几个鉴别反应结果不一致时（即有的呈阳性反应，有的呈阴性）则应进行全面分析。首先应注意呈阳性反应的试验是否属于该类成分的专一反应，否则应检查其他类成分能否产生该反应，从多方面加以判断。但也应注意，某些反应只能对某一类成分中的某个化学基团呈性反应，如检查黄酮类的盐酸镁粉试验，它只对黄酮类中的羟基黄酮类（黄酮醇类）反应明显，其余类的黄酮类则不甚明显，但也不能轻易否定不是黄酮类，为了避免孤立和片面的下结论，一定要全面考虑综合分析。,二、鉴别方法 1、 氨基酸、多肽、蛋白质,（1）加热沉淀试验：加热煮沸 混浊或沉淀 （蛋白质） +5%H2SO4（不加热）混浊或沉淀 （2）双缩脲反应：+40%NaOH，1%CuSO4 紫色、红色或紫红色（多肽、蛋白质） （3）茚三酮反应：+0.2%茚三酮试液 蓝或蓝紫色（氨基酸、多肽、蛋白质） （4）吲哚醌反应：+吲哚醌试液 各种颜色（氨基酸） （5）Millon反应：+Hg，H2NO2 红色（蛋白质分子中有酪氨酸组成） （6）Hopkins-Cole反应：+乙醛酸，浓硫酸 各色（蛋白质分子中有色氨酸组成） （7）氨基酸的薄层层析检查： 吸附剂硅胶 展开剂 n-BuOH，n-BuOH：HAc：H2O 显色剂0.25%茚三酮试液 紫红色斑点,2、 皂苷,（1）泡末试验：振摇 大量持续性泡末 +0.1M HCl 二管泡末高度相同（三萜皂苷） +0.1M NaOH 碱管高于酸管（甾体皂苷） （2）溶血试验：+2%红血球悬浮液 溶血 （3）LiebermanBurchard反应：+醋酐-浓硫酸 紫红色（三萜皂苷） 黄-红-紫-污绿（甾体皂苷）,31号黄柴胡 （柴胡皂苷 ）,猴七 【主要成分】 三七皂苷、三七皂苷乙,人参皂苷-Rh2,人,3、 糖和苷,（1）斐林试剂：+硫酸铜、酒石酸钾钠 砖红色沉淀（还原糖） （）+1%HCl +NaOH 沉淀（苷元） 30min 上清液（+）（多糖） （2）Molish反应：+-萘酚-浓硫酸 紫红色环（多糖或苷） （3）银镜反应：+0.1N硝酸银、5N氨水 银褐色（还原糖） （4）薄层层析检查：吸附剂硅胶G或纤维素 展开剂 n-BuOH：Pd：H2O；15%HAc 显色剂 苯胺-邻苯二甲酸,4、 酚类和鞣质,（1）FeCl3试剂：+1%FeCl3试液 蓝、暗绿或蓝紫色（有机酸、或矿物酸有干扰） （2）三氯化铁-铁氰化钾试剂：喷洒蓝色斑点 （3）香草醛-盐酸试剂：喷洒 红色（间苯二酚、间苯三酚） （4）重氮盐试剂：+对硝基苯胺、亚硝酸钠 红色 （5）薄层层析检查：吸附剂硅胶G或纤维素 展开剂 n-BuOH：HAc：H2O； 显色剂1% FeCl3试液 1%三氯化铁-1%铁氰化钾试液 蓝、绿或黑色 鞣质与酚类的区别： +明胶 沉淀 上清液 +1%FeCl3试液 蓝、暗绿或蓝紫色,5黄酮及其甙类,（1）盐酸-镁粉反应：+HCl-Mg 红色 （2）三氯化铝反应：+AlCl3 黄色 （3）浓氨水反应：+NH3 亮黄或橙色,含罗汉果甙，另含果糖、氨基酸、黄酮等,6、 生物碱,（1）沉淀反应碘化汞钾试剂 白色或浅黄色沉淀 碘化铋钾试剂 橘红色沉淀 碘碘化钾试剂 浅棕或暗棕色沉淀 硅钨酸试剂 浅黄或黄棕色沉淀 磷钨酸试剂 浅黄色沉淀 磷钼酸试剂 白色或淡黄色沉淀 苦味酸试剂 黄色结晶或非结晶形沉淀 鞣酸试剂 棕黄色沉淀 氯化金试剂 黄色结晶 氯化铂试剂 白色结晶 雷氏铵盐 红色无定形沉淀 （2）薄层层析检查：吸附剂碱性氧化铝（级，干法铺板） 硅胶G（稀碱湿法铺板） 展开剂氯仿：甲醇 显色UV；碘化铋钾,野决明 全草及种子含多种生物碱,三尖杉： 含三尖杉碱、三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱等生物碱，约0.39%,7、有机酸,（1）PH试纸检查 （2）溴酚兰试液：喷洒蓝色背景黄 （3）薄层层析检查：吸附剂硅胶G或酸性氧化铝 展开剂 C6H6：EtOH 显色剂0.1%溴酚兰试液黄色,五味子,8、甾体,（1）LiebermanBurchard反应：+醋酐-浓硫酸 黄-红-紫-污绿 （2）氯仿-浓硫酸反应：+氯仿-浓硫酸 氯仿层红或青色 硫酸层绿色荧光 （3）五氯化锑或三氯化锑反应：+SbCl3或SbCl5 红色 （4）薄层层析检查： 吸附剂中性氧化铝或硅胶G 展开剂 C6H6-MeOH；CHCl3-MeOH 显色剂 10%磷钼酸 蓝-蓝紫色 5%三氯化锑试液 红、棕红或绿色,重楼云南重楼 化学成分 含多种甾体皂甙,小米辣： 化学成分：辣椒定是A，B，C三种甾体的混合物 ，有抑菌作用,9、香豆素、内酯,（1）开闭环反应：+1%NaOH澄清 +2%HCl混浊 （2）异羟污酸铁反应：+7%盐酸羟胺、10%KOH +稀HCl、1%FeCl3 红色 （3）重氮盐试剂：+对硝基苯胺、亚硝酸钠 红色 （4）薄层层析检查： 吸附剂酸性硅胶G或硅胶G 或酸性氧化铝 展开剂 甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5：4：1） 显色剂 UV蓝色荧光 异羟污酸铁试液 红色,10、强心苷,（1）Kedde试剂：+3，5-二硝基苯甲酸试液 紫红色 （2）Baljet试剂：+碱性苦味酸试液 橙或橙红色 （3）Legal试剂：+亚硝酰铁氰化钠试液 紫红色 （4）K-K反应：+FeCl3/冰HAc、浓H2SO4 上层绿蓝色 （2-去氧糖） 界面红棕色 （5）薄层层析检查：吸附剂硅胶G 或中性氧化铝 展开剂 n-BuOH：HAc：H2O（4：1：5） 显色剂 碱性3，5-二硝基苯甲酸试液紫红色 碱性苦味酸试液 橙红色,11、挥发油、油脂,（1）油斑检查：油斑挥发 挥发油； 油斑不消失油脂或类脂 （2）磷钼酸反应：喷洒5%磷钼酸试液 蓝色（油脂、三萜、甾醇）,第四节 植物化学成分的提取、分离、纯化和结构鉴定,提取分离的过程： 去其糟粕 取其精华 即 去粗取精 研究植物化学成分不外乎两种情况： a. 对活性成分的性质一无所知 b. 提取已知的成分或已知的化学结构类型 （黄柏中提取 生物碱黄连素）,对于活性成分一无所知的情况： 在临床或药理试验配合下，经不同溶剂提取，确定有效部位，然后再逐步划分，追踪活性成分最集中的部位，最后分得单体。 b. 对于已知成分或已知化学结构的情况： 查阅资料 得到较好的提取方法,各部位提取物,活性筛选指标,活性筛选和评价,最好采用 体内的方法,前体药物,活性部位,色谱或其他方法 进行分离,各种组分,活性测试,量较少，采用 体外方法,等剂量不等强度原则,各部分均有活性， 但活性均不强,失败,有效单体,化学结构,理化性质 波谱数据,作 业,请 简要叙述分析某药物中有效成分的研究程序？,
