融合和单抗W.ppt
动物细胞融合与单克隆抗体,动物细胞融合,比较植物体细胞杂交和动物细胞融合,细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性,生物膜的一定流动性,用纤维素酶、 果胶酶去壁,用胰蛋白酶 使细胞分散,物理法、化学方法,物理法、化学法、 灭活的病毒,获得部分 或完整植株,主要用于制备 单克隆抗体,1、二者的区别？,原理不同 诱导融合的方法和手段不同,2、动物细胞融合最重要的用途？,制备单克隆抗体,3、生成的细胞叫什么,杂交细胞,回 顾 1、抗体的化学本质？ 2、抗体由什么细胞产生？ 3、抗体的作用特点？ 4、抗体的分布？,（二）单克隆抗体的制备,1、抗体的传统生产方法,再从动物血清中分离抗体,产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,某抗原注入某种动物体内,2、缺点,单克隆抗体,由杂交瘤细胞产生的性质单一、特异性强、灵敏度高的抗体,小鼠骨髓瘤细胞,B淋巴细胞,经免疫的小鼠,提取,杂交瘤细胞,第一次筛选,第二次筛选,体外培养,注射到小鼠腹腔,提取单克隆抗体,动物细胞融合,杂交细胞,能产生特定抗体杂交瘤细胞群,动物细胞培养,1、在制备单克隆抗体过程中用到的技术手段有哪几种？ 2、在制备单克隆抗体过程中有几次筛选？筛选的结果？ 3、为什么要对小鼠注射抗原？,第一次筛选,杂交瘤细胞,第二次筛选,能产生特定抗体杂交瘤细胞群,产生相应的B淋巴细胞,4、杂交瘤细胞有什么特征？ 原因？ 5、两两融合形成的细胞有几种？如何筛选 6、如何大规模培养杂交瘤细胞？可以通过哪些途径大量获取抗体？,从培养液或小鼠腹水中提取,培养液中或小鼠腹腔中培养,既能在体外无限增殖，也能产生特定的抗体,具有双亲细胞的遗传物质,选择培养基,4、单克隆抗体的应用,、可用于作为诊断试剂： 有准确，高效，简易、快速的优点 、可用于疾病治疗 、可用于运载药物 （作为运载对应疾病的药物的 “生物导弹”。） “生物导弹”单克隆抗体药物,1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞,A,巩固练习,2动物细胞融合的目的中最重要的是（ ） A.克服远缘杂交不亲和 B. 制备单克隆抗体 C.培育新品种 D.生产杂种细胞 3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ） 诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同 C. 所采用的原理完全相同 D. 都能形成杂种细胞,B,D,4. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞（ ） A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成,D,5. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞， 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （ ） 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 A. B. C. D.,C,6.动物细胞融合和植物原生质融合决定于( ) A.细胞膜的流动性 B细胞膜的选择透过性 C.细胞质的流动性 D细胞质酶的活性,A,7.“生物导弹”是指（ ） A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物,D,8.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（） APEG B灭活的病毒 C电刺激 D离心,B,右图为细胞融合的简略过程，请据图回答： 若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用 处理，除去了 ； A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法 是 。 若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用 技术把 D 培养成植株。,纤维素酶和果胶酶,细胞壁,离心、振动和电激,植物组织培养, 若A、B是动物细胞，一般取自 ， 然后用 ，使其分散开来， A、B到 C 的过程中，常用的不同于植物细胞的 手段是 ，所形成的D称为 。 若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠，那么， 在获得此细胞之前，小鼠已被注射了 。 注射后小鼠身体产生了相应的 。图中B为 。 若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的 C有 种，用来培养的D细胞应该是 。从中选择出它的方法是 培养。获得D后，常用的培养方法是 。,胚胎细胞和幼龄动物,胰蛋白质酶或胶原蛋白质酶,灭活的病毒处理,杂交细胞,相应的抗原,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,三,杂交瘤细胞,用选择培养基,动物细胞培养,4、已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答： （1）试管中除融合的杂种细胞外，还有 中融合细胞。 （2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，并说原理。 方法 。 原理： 。,培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖细胞,加入氨基嘌呤后使D合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞中可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。,两种,
