探究性实验一 微生物的培养与应用.ppt
探究性实验一 微生物的培养与应用,课题1、 微生物实验室培养,1培养基概念、培养基的分类、特点和用途,2. 培养基的配制原则和营养构成,3配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项,4纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项,5对位训练,课题1、 微生物实验室培养 1培养基概念：,人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。,目的要明确：根据微生物的种类、培养目的选择不同的原料配制 培养基 营养要协调：配制培养基时要注意各营养物质的浓度和比例、PH 要适宜,2.培养基的配制原则和营养构成,(1)培养基的配制原则,(2)培养基的营养构成,各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源 和无机盐。 不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。,3配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项,计算称量溶化灭菌倒平板,倒平板的温度一般在50左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。 平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,4纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项,在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。,平板划线法、稀释涂布平板法,稀释涂布平板法：,.系列稀释操作(图1)：,a将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按101106的顺序编号。 b用移液管吸取1 mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水充分混匀。,c从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复b步混匀操作。 以此类推，直到完成最后1支试管的稀释。,.涂布平板操作如图2所示：,对位训练 1有关稀释涂布平板法的叙述中，错误的是( ) A首先将菌液进行一系列的梯度稀释 B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面 C适宜条件下培养 D结果都可在培养基表面形成单个的菌落,2分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂。请完成下列问题。 (1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是_和_。 (2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？_。,D,答案 (1)葡萄糖 尿素 (2)有选择作用。因为此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长,课题2、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,1筛选菌株的原理,2统计菌落数目的方法,3细菌分离与计数的实验流程,4该实验中的注意事项,5对位训练,课题2、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,1筛选菌株的原理,微生物的选择培养：在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中的唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。,2统计菌落数目的方法,原理：,方法：,缺点：,利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。,不能区分死菌与活菌。,用计数板计数。,每克样品中的菌株数(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。,(2)间接计数法(活菌计数法),原理：,当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。,操作：,a设置重复组，增强实验的说服力与准确性。 b为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。,计算公式：,土壤取样样品稀释取样涂布微生物的培养观察并记录结果细菌计数,3细菌分离与计数的实验流程,4该实验中的注意事项 (1)设立重复组：统计某一稀释度下平板上的菌落数时，要至少涂布3个平板作重复组，增强实验结果的说服力与准确性。 (2)对照原则 判断培养基中是否有杂菌污染，需将未接种的培养基同时进行培养。 判断选择培养基是否具有筛选作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。,误区警示 牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基应各有一个空白对照，即不涂布菌液，目的是验证培养基中是否含杂菌。 样品稀释度将直接影响平板上生长的菌落数。,3分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是 ( ) 加尿素 不加尿素 加琼脂 不加琼脂 加葡萄糖 不加葡萄糖 加硝酸盐 不加硝酸盐 A B C D,5对位训练,4在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。产生A同学结果的原因可能有 ( ) 土样不同 培养基污染 操作失误 没有设置对照 A B C D,C,A,5用稀释涂布平板法测定同一土壤样品的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是 ( ) A涂布了1个平板，统计的菌落数是230 B涂布了2个平板，统计的菌落数分别是216和260，取平均值238 C涂布了3个平板，统计的菌落数分别是21、212、256，取平均值163 D涂布了3个平板，统计的菌落数分别是210、241和248，取平均值233,D,课题3、分解纤维素的微生物的分离,1纤维素酶,2纤维素分解菌的筛选原理,3土壤中纤维素分解菌的筛选流程,4对位训练,1纤维素酶,2纤维素分解菌的筛选原理,纤维素酶是一种复合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，具有催化分解纤维素的作用，其作用过程如下：,土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落。,3土壤中纤维素分解菌的筛选流程,提醒 纤维素分解菌的选择培养基为液体培养基，因培养基中无凝固剂，利用液体培养基以增加纤维素分解菌的浓度。 选择培养基以纤维素做碳源和能源，其它绝大多数微生物不能正常生长；鉴别培养基因含琼脂，故为固体培养基，刚果红染色法就是应用的此培养基。 为确定得到的菌是否是纤维素分解菌，还需进行发酵产纤维素酶的实验。纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量测定。 流程中的“选择培养”是否需要，应根据样品中目的菌株数量的多少来确定。,6关于纤维素分解菌选择培养的正确叙述是( ) A可以增加纤维素分解菌的浓度 B可以减少纤维素分解菌的浓度 C所用培养基是固体培养基 D所用培养基是平板培养基,7在加入刚果红的培养基中出现透明圈的菌落是( ) A分解尿素的细菌 B硝化细菌 C分解纤维素的细菌 D乳酸菌,A,C,
