还原叶酸载体基因多态与儿童ALL易感的关系研究.ppt

还原叶酸载体基因多态性与儿童ALL易感性的关系研究,杨丽华 余晶 王斌,南方医科大学珠江医院 儿科中心,研 究 背 景,急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia， ALL）为最常见的儿童恶性肿瘤，约占25-30%,病毒 感染,病因？,现普遍认为，ALL的发生为基因-环境相互作用所致,理化 因素,遗传 素质,暴露于相同危险环境因素的儿童,其ALL发病的差异是由遗传易感性（susceptibility）来决定的,危险环境,Cancer,Cancer-free,Susceptibility: Metabolism, DNA damage & repair,5-MeTHF,图 1. 叶酸代谢途径 Dhillon et al.Mutat Res 2009; 665: 1-6,叶酸代谢相关 基因的多态性,影响细胞的叶酸代谢,干扰正常DNA 合成和甲基化,ALL？,（Reduced folate carrier, RFC）,还原叶酸载体,还原叶酸载体基因RFC1位于21q22.2-q22.3,编码一个含591个氨基酸的完整的膜蛋白,包含12个跨膜区(transmembrane domain，TMD),还 原 叶 酸 载 体,分生结构,第2外显子第80位核苷酸具有高频率的A G多态可引起第27位密码子HisArg,多态性,与正常人群的血浆叶酸和同型半胱氨酸水平有关 可能影响儿童ALL的遗传易感性、疗效、预后等,特性,研 究 目 的,了解在健康儿童和ALL白血病儿童中RFC1 80位点基因型分布特征 探讨RFC1 A80G多态性与儿童ALL易感性之间的关系,研 究 对 象,ALL组 45例，2008.10-2010.2儿科和血液内科住院的初治ALL儿童。男28例，女17例，年龄1-16岁，中位年龄5.53岁。 对照组 70例，同期门诊体检健康儿童。男45名，女25名，年龄1-14岁，中位年龄5.31岁。 两组均为华南地区出生汉族儿童,研 究 方 法,1.采集外周静脉血，抽提基因组DNA 2.PCR扩增 3.DNA片段大小检测及回收纯化 4.DNA测序 5.统计学处理,结 果,图2 RFC1基因第2外显子含80片段PCR产物2%琼脂糖凝胶电泳 M：Marker 1-7：分别为ALL标本1-7,图2 RFC1基因第2外显子含80片段的测序图 A.野生型(His27His) ：CAC B.杂合子突变型(His27Arg)：CNC (N代表A/G杂合) C.纯合子突变型(Arg27 Arg)：CGC,表1 RFC1 80基因型分布及Hardy-Weinberg平衡检验,拟合优度2检验结果： 两组人群均符合H-W遗传平衡(df=2，P0.05)， 说明这两个研究人群来自大的群体，不存在明显的自然选择、 迁移等因素对遗传平衡的影响,*ALL组与对照组相比，2=7.633，P=0.02,表2 两组RFC1基因80位点基因型频率分布,表3 两组RFC基因80位点G、A等位基因频率分布,*ALL组与对照组相比，2=5.983，P=0.01,两组RFC180各种基因型频率的分布差异具有统计学意义,两组RFC180等位基因A频率差异具有统计学意义,表4 RFC1 80多态性与儿童ALL易感性的logistic回归分析,* OR*（95%CI）经过年龄和性别校正,在调整了年龄、性别因素后， 携带RFC180AA基因型的儿童较80GG携带者 患ALL的风险增加4.15倍,讨 论（1）,华南地区汉族健康儿童的RFC1 80A等位基因频率为45.7%,Relton CL, et al 2004,裴丽君 2004,de Jonge R, et al 2009,RFC1 A80G多态性频率特征在不同种族或地域的人群间有不同差异,讨 论（2）,RFC1 80AA可显著性增加儿童ALL的患病风险 一方面，位于TMD1内的组氨酸碱性相对较弱，可改变RFC转运功能，引起叶酸摄取率 以及甲硫氨酸循环中的Hcy ，致使该循环转甲基能力 （Whetstine et al, 2001） 另一方面，含RFC1 80A等位基因的个体的淋巴细胞微核率较其它基因型者明显 ，严重影响了染色体的稳定性 (Dhillon et al, 2009 ),结 论,RFC1 A80G多态性频率特征在不同种族或地域人群间存在差异； RFC1 A80G多态性与中国汉族儿童ALL易感性有关，其中RFC1 80A等位基因可增加患病风险。,Thank You!,