HSP65HBV 表位融合蛋白对人PBMC的激活作用.pdf

4 0 6 C h in I b D ie g n . A p ri 1 , 2 0 0 6 , V . 1 1 0 , N . . 4 H S P 6 5 - H B V表位融合蛋白对人 P B MC的激活作用 王 华 ， 尹晓 光2 ， 吴秀丽 ， 王 丽 2 ， 王燕 媚 ， 于 永利2 ， 王丽颖 * 吉林大学基础医学院 1 . 分子生物学教研室; 2 . 免疫学教研室， 吉林 长春 1 3 0 0 2 1 ) 热 休克 蛋白 ( h e a t s h o c k p r o t e i n , H S P ) H S P 可 引导与其形成复合物或融合蛋白的抗原性物质在抗 原递呈细胞内经 MH C I 类途径加工递呈， 提供激活 抗原特异性 C T L的信号。P A D R E是一种辅助 T 细胞表位， 辅助 T细胞的活化对 C T L 的激活有促 进作用。基于以上研究， 我们检测了 H S P 6 5 / P A D R E / H B V多 表位融合蛋白( H S P 6 5 - H B V e p i ) 对 P B M C 的激活作用， 为研究该融合蛋白能否激发 H B V特异 性 C T L 的研究鉴定了基础。 1 材料与方法 1 . 1 材料 H S P 6 5 - H B V e p i , H S P 6 5 蛋白为 本室制 备( L P S 1 0 0 E U / m g ) o F I T C - a n t i - C D 6 9 及 P E标 记的 a n t i - C D 4 , C D1 9 , C D 5 6 ( B D公 司) 。I MD M ( G I B C O ) , K 5 6 2 细 胞株为 本室保存， L D H杀伤检测 试剂盒( P r o m e g a ) o 1 . 2蛋 白刺激 P B MC S常规法分 离 P B MC , I MD M- 5 % A B血清培养于 1 2 孔板。加蛋白 H S 6 5 - H B V e p i 1 0 0 K g / m l 刺 激3 天 。 设立 培 养 基、 H S P 6 5 和H S P 6 5 / H B V e p i 蛋白1 0 0 水浴热变性对照( 检 测残留L P S 的影响) 。 1 . 3 表面分子染色收集细胞， 印砂F A C S ( P B S / 0 . 5 m M E D T A / 2 % F B S ) 缓冲液 重 悬细 胞， 加1 0 荧光标记的 单抗， 冰上放置3 0 m i n , 离心洗涤， 流式 细胞仪检测。 1 . 4 L D H方法检测 N K细胞毒蛋白刺激 P B MC s 1 h ， 按L D H 细胞毒检测说明书 检测 对K 5 6 2 的 杀伤 作用。 2 结果 2 . 1 H S P 6 5 - H B V e p i 对人 辅 助T 细 胞, B 细胞 和 N K 细 胞的 急 性 激 活 作用 H S P 6 5 - H B V e p i 刺 激的 P B MC中被 急性激 活的辅 助性 T细 胞 ( C D 4 ' C D 6 9 ' ) , B细胞( C D 1 9 ' C D 6 9 ' ) , N K细胞( C D 5 6 ' C D 6 9 ' ) 占 淋巴 细胞数的比 例明显高于培养基及热 变性对照组， 培养基及热变性对照组的结果没有明 显差异， 说明 样品中 残留的痕量L P S 对检侧结果没 有影响( 表 1 ) 0 表1 H S P 6 5 - H B V 呵及 对 照 刺 激 的 P B MC表面分子染色结果比较 H S P 6 5 - H B V卿 C13 4 ' CD 6 9- C D1 9 ' C D 6 9 ' 仁 D 5 6 夺 C刃 巧9 十 Me d i u m 0 . 6 0 1 . 6 9 % 1 . 3 3 % H S P 6 5 0. 8 0 % 2 . 7 9 % 1. 72% 1. 1 7% 2 . 5 2% 2 . 0 0% H B a t e d 0 . 5 5 % 1 . 5 6 % 1 . 5 5 % 2 . 2 H S P 6 5 - H B V e p i 刺激 的P B M C 对K 5 6 2 细 胞 的N K细胞毒作用H S P 6 5 - H B V e p i 与H S P 6 5 对 照组刺激的 P B M C对 K 5 6 2 细胞的杀伤率明显高于 培养基对照 组( E / T 二l o o : 1 ) 。说明H S P 6 5 系列蛋 白具有 N K活性( 表 2 ) 0 表2 H S P 6 5 - H B V e p i 及 对照 利激的P B M C 对 K 5 6 2细胞的杀伤率 %1 比较 组别M e d iu m H S P 6 5 H S P 6 5 - H B V e p i S p e c i fi c l y s is 3 3 件t 5 . 8 3 9 . 8 t 1 0 刀4 5 . 7 t 3 滩 井 通讯 作者 3 讨论 在免疫应答过程中， 热休克蛋白( h e a t s h o c k p r o t e i n , H S P ) 可引 导 与 其形成 复 合物 或融 合 蛋白 的抗原性物质在抗原递呈细胞内经 M H C I 类途径 加工递呈， 提供激活 抗原特异性C T L 的信 号 。此 外H S P 蛋白 具有N K活性， 对机体的 抗病毒反应很 有 意 义 ， 。 辅助T 淋巴细胞反应在体液和细胞免疫反应 中都发挥重要用。P A D R E是一种辅助 T细胞表 位， 辅助 T细胞的活化对 C T L的激活有促进作 用 3 基于以上研究， 我们检测了我们所设计的 H S P 6 5 / P A D R E / H B V多表位融合 蛋白( H S P 6 5 - H B - V e p i) 对P B M C 的 激活 作用 。 C D 6 9 分 子在 静 息的 淋巴细胞上不表达， 是淋巴细胞的早期活化表面标 记。 我 们的 结果 显示: H S P 6 5 - H B V e p i 融合 蛋白 具 史匡实验诊断学2 0 0 6 年4 月第1 0卷 第4 期 4 0 7 有活化辅助 T细胞、 B细胞和 N K细胞的活性。为 研 究该融合蛋白能否激发人H B V 特异性C T L 的 研 究 鉴定了基础。 参考文献: 1 B s a u S , B in d e r 川，R a m a li n g a m T , e t a l . C D 9 1 i s a c o m m o n r e c e p - f o r f o r h e a t s h o c k p r o t e in s g p 9 6 , h sp 9 0 , h s p 7 0 a n d ca l re c ti c u li n J I m m u n it y , 2 0 0 1 , 1 4 : 3 0 3 . 2 M u l th o ff C , M iz z e n L , W in c h e s t e r C C , e t a l . H e a t s h o c k p r o te in 7 0 ( H s p 7 0 ) s t i m u la te s p r n li f -t iu n a n d n y t o ly ti c a c ti v it y o f N K ce ll s J . E x p H e r m to l 1 9 9 9 , 2 7 : 1 6 2 7 3 L i v in g s to n B D , A le x a n d e r L e t a l, 川 t in e d h e lp e r T ly m p h o c y t e fu n c - ti o n a s s o c i a te d w it h c h r o n ic h e p a t it is B v ir u s i n f e c t io n a n d i t s r o l e in r e s p o n se to t h e r a p e u tic v a c c i n a t i o n in h u m a n s J .1 I m m u ml , 1 9 9 9 , 1 6 2 : 3 0 8 8 . ( 收稿日期: 2 0 0 5一 0 4一 0 1 ) 文章编号: 1 0 0 7 一 4 2 8 7 ( 2 0 0 6 ) 0 4 一0 4 0 7一 0 2 可溶性转铁蛋白受体在糖尿病患者诊断中的价值 董梅， 俘爱华， 杨彩峨， 孟祥红， 李艳艳 ( 解放 军总K 院3 0 9 临床部， 北京1 0 0 0 9 1 ) 摘要: 目的探讨可溶性转铁蛋白受体水平对糖尿病患者在鉴别缺铁性贫血( I D A) 和非缺铁性贫血( AC D) 诊断 中的意义。 方法采用散射比蚀检侧技术检测s T f R水 平。结 果 糖尿 病患者一 I D A组， T f R 水平显著高于对照组( P 0 . 0 1 ) ; 糖尿病患者一 I D A 组也显著高于糖尿病患者一 普通组与糖尿病患者一 A C D组( P 0 . 0 5 ) v结论 . T f R 在缺铁 性贫血和慢性疾病继发性贫血的鉴别诊断上有明显的临床意义。 关键词: 可溶性转铁蛋白受体; 糖尿病患 者; 贫血 中图分类号: 8 5 8 7 . 1文献标识码: A T h e a p p l i ca t io n o f s o l u b e t r a n s f e r r in g r e c e p t o r in t h e d i a g n o s i s o f d ia b e t i c 刀 O N G M e i , T O N G A i- h n a , Y A N G C a i- e , , s t a l . ( 3 0 9 t h C l i n ic a l D i v is io n o f C h i n e s e P L A G e n e r a l H o sp i ta l , B e ij i n g 1 0 0 0 9 1 , C h i n a ) A b s t r a c t : O b j e c t iv e T o i n v e s ti g a t e o n t h e s i g n if ic a n c e o f t h e le v e l o f s o lu b le t r a n s fe r ri n g re ce p t o r i n id e n ti f ic a ti o n d i a g - n o s is o f iro n d e f i c i e n t a n e m i a ( I D A ) a n d A n e m ia o f c h r o n i c d i s e a s e , A C D ) i n d ia b e t i c p a t ie n t . Me t h o d s T h e le v e ls o f s T f R w e re d e t e c te d b y n e o p o m e t ry. R e s u lt s T h e l e v e l o f s T f R i n d ia b e t i c I D A g r o u p w a s h i g h e r t h a n t h e c o n t r a s t g r o u p s s ig n i fi - c a n t ly ( P 0 . 0 1 ) ; T h e l e v e l o f . T f R i n d i a b e t ic , I D A g r o u p w e re h i g h e r t h a n t h e d i a b e t e s - c o m m o n g ro u p a n d d ia b e t e s - A C D g ro u p ( P 0 . 0 5 ) . C o n d u s i o n I t i s o f m a r k e d c li n ic a l si g n ifi c a n c e t o d e t e r m i n e s T f R in t h e d i f fe r e n ti a l d ia g n o s is o f I D A a n d c h ro n i c d is e a s e f o ll o w e d a n e m ia . K e y w o r d s : s o l u b le t r a n s fe r r i n g ; d ia b e t ic p a t ie n t ; a n e m i a ( C h i n J L a b D i a g n , 2 0 0 6 , 1 0 : 4 0 7 ) 判断机体铁缺乏的传统实验如血清铁、 血清转离心1 0 m in ， 取血清用于 各项测定。 铁蛋白、 铁蛋白等， 因受急性时相反应， 在诊断 铁缺1 . 2 方法 可溶性转铁蛋白 受体、 铁蛋白 使用 德灵 乏及鉴别缺铁性贫血( I r o n d e fi c i e n t a n e m ia , I D A ) 和公司R N II 特种蛋白分析仪、 采用散射比浊检测技 慢性疾病性贫血( A n e m ia o f c h r o n ic d i s e a s e , A C D ) 时术原 装配套试剂盒， 具体操作见说明书。试剂盒提 不 够 理 想， 而 可 溶 性转 铁 蛋白 受体 不 是急 性 时 相反供 的s T f R 参考 范 围0 . 8 3 - 1 . 7 6 m 岁L o 应物质， 是 铁缺乏的敏感指标。本文探讨了可溶性2 结果 转铁蛋白 受体水平对糖尿病病人在鉴 别缺铁性贫 血1 2 8 例糖尿病患者血清可溶性转铁蛋白 受体、 ( I D A ) 和 非缺铁性贫血( A C D ) 诊断中的意义。血清铁水平见表I ， 各组间s T f R比较见表2 。 糖尿 1 材料与方 法病一 I N A 组s T f R 水平显著高于对照组( P 0 . 0 1 ) , 1 . 1 病例 选择符合 W H O制定的糖尿病诊断标也显著高于糖尿病一 普通、 糖尿病一 A C D组( P 准确诊病人1 2 8 例， 正常对照组5 0 例。清 晨空腹采0 . 0 5 ) ; 糖尿病一 I D A组F e 水平显著低于对照组( P 血5 m l 于血清管中。室温 3 0 m i n 后， 3 0 0 0 r / m i n 0 . 0 5 ) ， 也极显著低于糖尿病一 普通、 糖尿病一 A C D