V6421-APP 过度表达的 PC12 细胞凋亡的信号传导机制.pdf

由国医药舅刊 ·1 2 1 3 · _|_ 2 0 0 8 年第1 0 卷第8 期( 总第6 l 期) V 6 4 2I - A P P 过度表达的P 0 12 细胞凋亡的信号传导机制 安丽荣1 ，郭艳芹t ，金连弘z ( 1 牡丹江医学院红旗医院神经内科，牡丹江1 5 7 0 0 1 ；2 哈尔滨医科大学组胚教研室，哈尔滨1 5 0 0 8 6 ) 了【摘要】目的：研究过焘衾送爻晶v i 荔泛p ；薹茜的琵晶脆羞赢化席菇获基一焉基知蠡藉兰爵蔷霸善i 茹。菇芸：羞建立稳定装运爻鸳 §的A p P ，V 6 4 2 1 一A P P 蛋白的细胞株的基础E ，使用M 订、H o e c h s t 3 3 3 4 2 观察在无血清培养2 4 小时餍，1 0 0 p m o l LH 2 0 2 作用2 4 小时对； ：P C I 2 细胞豹影响。使嬲W e s t e r n 捡测引起细胞凋亡的过程中可能的相关基因p - i n k ，f a d 的表达。结鬃：通过M T T 和H o e c h s t 3 3 3 4 2 分别证i ；实无血清培养2 4 小时螽氧化应激损伤，V 6 4 2 一L A P P 转染组细胞损伤数目和凋亡数目明驻增加。W e s t e r n 印迹法显示饪凋亡过程巾，过度袭； i 达v “2 l A P p 缀p - J N g 和F a s L 的蛋j 表达明显增多。结论：在氧化应激引起与飚尔茨海默病相关的过度表达v 6 4 2 一脚p 细胞的凋亡过口 i 程巾，P T N K ，F a s L 都参弓细胞凋亡的过程。 镌 ? 关键词lP C I 2 细胞；捌亡；阿尔茨海秋病；J N K 名 ；【中豳分类号】R - 3 3【文献标识码】A【文章编号】1 0 0 9 0 9 5 9 ( 2 0 0 8 ) 0 8 1 2 1 3 - 0 3乏 iA p o p t o t i cM e c h a n i s mi nt h eP C I 2C e l l so fV 6 4 2 I A P Po v e r e x p r e s s i o n 一一一点 争 A nL i t o n 9 1 ，G u oY a h q i n l j i nL i a n h o n 9 2 霪 i( 1 D e p a m n e n to fN e u r o l o g y ，H o n g q iH o s p i t a lo fM u d a n j i a n gM e d i c a lc o l l e g eM u d a n j i a n g1 5 7 0 0 1 ，C h i n a ；磊 ； 2D e p a r t m e mo fH i s t o e m b r y o l o g y ，H a r b i nM e d i c a U n i v e r s i t y ，H a r b i nt 5 0 0 8 6 ，C h i n a ) 缓 ：【A B S T R A C T 】o b j e c t i v e ：T os n l 曲t h ea p o p t o t i c 矗辨蠢t m n s d u c t i o nm e c h a n i s mc a u s e db yo x i d a t i v es n si nP C I 2c e l l so fA l z h e i m e r ' si ：d i s e a s e - l i n k e dh u m a aV 6 4 2 1 - a m y t o i dp r e c u r s o rp r o t e i n ( a p p ) g e n eo v e r e x p r e s s i o n M e t h o d s ：T h eo v e r e x p r e s s i o no ft r a n s f e c t e dA P P ，V 6 4 2 1 - 秀 iA P Pg e n ei nP C I 2c e l lw c T ec o n s t r u c t e d M “ ITa n dH o e c h s t3 3 3 4 2w e r eu s e dt Oo b s e r v ed l eo v e r e x p r e s s i o no fa m y l o i dp r e C U r s o rp r o t e i nO nj ，c e l lv i a b i l i t ya n da p o p t o s i so fh y d r o g e ap e r o x i d e - i n d u c e dP C I 2c e l lw i t h o u tf e t a lb o v i n es e n R T If o r2 4h o u r W c s t e mw a 骘r e e dt Oo b s e r v et h e e x p r e s s i o no fp o s s i b l eg e n ei nc e l la p o p t o t i cp r o c e s s R e s u t 堪：I nt h eV 6 4 2 I A p pt l ' a r t s f e c t e dg r o u p ，M T I ；a n dh o e c h s t 3 3 3 4 2g s s a ys h o wt h a t 一 i 蟛u r ya n da p o p t o t i cc e l l sw e r eo b v e s u si n c r e a s e d 洫h y d r o g e np e r o x i d e - i n d u c e dP C I 2c e l lw i t h o u tf e t a lb o v i n es e r 啪f o r2 4h o u r I n ! a p o p t o t i cp r o c e s s ，P - j N Ka n dF a s L e s c r eo b v i o u sm o r emt h eV 6 4 2 1 一A P Pt r a n f f e c t e dg r o u pt h a no t h e rg r o u p sb yw e s t e r nb l o t t i n g ； C o n c l u s i o n ：I nP C I 2c e l l so fA l z h e i m e r ' sd i s e a s e h n k e dh u m a nV 6 4 2 1 一a m y l o i dp r e c u r s o rp r o t e i n ( a p p ) g e n eo v e r e x p r e s s i o n , p 0 N Ka n dF a s L i ；w e r ei nt h ea p o p t o t i cp r o c e s sc a u s e db yo x i d a t i v es t r e s s · l ；【K E YW O R D S P C I 2c e l l ；a p o p t o d s ；A t z h e i m e r 7 sd i s e a s e ：c - J u nT - t e r m i n a lk i m s e缓 阿尔茨海默病( A l z h e i m e r 7 sd i s e a s e ，A D ) 是由多种因 素引起，以进行性痴呆为主要临床特征的神经系统退行 性疾病。A D 的病因至今不清，a p p 、早老素( p s 一1 、p s - 2 ) 基因 的突变已被证实与A D ，尤其是家族性A D 有重要联系墉。 于是，研究者们利用基因转染技术，开始在细胞或动物上进 一步研究过度表达的相关基因对细胞及动物的影响嗍。 P C I 2 细胞株源于大鼠嗜铬细胞瘤，和某些神经元在发生 上都源自神经嵴细胞，其在形态、生理、生化功能方面接 近于神经元，因此在国内外用作研究神经细胞的模型，广 泛用于神经细胞死亡方式及神经毒理方面的研究 6 1 。本文 的目的是在已经构建的过度表达人的V 6 4 2 I - A P P 蛋白 的P C I 2 细胞的基础上f 7 1 ，氧化应激诱导细胞凋亡，研究引 起细胞凋亡的可能的信号传导机制，从而为深入研究A D 的神经元凋亡机制提供有意义的依据。 1 材料和方法 1 1M T T 法测细胞活力 将对数生长的各组P C I 2 细胞1 0 0 斗L ( 5 x 1 0 5 w e l l ) 密 度接种于9 6 孔培养板上，每组7 孔。3 7 0 C 孵育过夜，细胞 完全贴壁后，处理组用无血清的D M E M 培养基作用2 4 小时，再加入1 0 0 肛m o l L H ：O ：作用2 4 小时，每孔加入 M T T1 0 9 。L ，继续孵育4 h ，弃去上清，每孔加入二甲基亚 砜1 5 0 9 。L ，在平板振荡仪上3 7 0 ( 2 振荡1 0 m i n ，用酶标仪 5 9 5 n m 波长比色，读取各孔吸光度，测定对各组细胞活力 的影响，以吸光度值A 5 9 5 n m 表示。细胞抑制率= ( 对照组平 均A 5 9 5 n m - 处理组平均A S 9 5 n m ) 对照组平均A 5 9 5 n m 。 1 2H o e c h s t 3 3 3 4 2 检测细胞凋亡 对数生长的各组细胞以1 0 0 0 斗L ( 6 x 1 0 s w e l l ) 密度接 种于6 孔培养板上。3 7 。( 2 孵育过夜后，处理组用无血清的 D M E M 培养基作用2 4 h ，再加入1 0 0 斗m o l LH ：0 2 作用 2 4 h 。观察前0 5 h 加入H o e c h s t 3 3 3 4 2 ，在荧光显微镜的紫 光下观察。每组随机选择视野，计数2 0 0 个细胞，重复3 次，计算凋亡率。 1 3W e s t e r n 检测p - J N K F a s L 置于冰上收集细胞，每瓶加入1 0 0 斗L 细胞裂解液 ( 1 m M P M S F ，2 5 ×1 0 嘞L e u p 叩t h l ×1 0 P e p s t a i n , 1 5 0 m M N a c l ，1 N P 4 0 ，O 5 D e o x y c h o l a t e ，0 1 S D S ，P H 8 0 ) 作用 1 h ，超声破碎，4 0 C 1 6 0 0 0 x g 离心1 5 m i n ，收集上清液，用 B r a d f o r d 方法测定蛋白含量。煮沸5 m m ，按蛋白含量测定 结果每孔上样1 0 0 斗g ，进行1 2 S D SP A G E 分离样品。尔 后。3 0 0 m A ，低温2 h 将胶中蛋白以湿法转印至P V D F 膜 上。该膜经封闭剂( 5 牛血清白蛋白B S A ，0 0 5 T w e e n 一 2 0 溶于T B S 中) 4 过夜封闭，次日与溶于T B S T 中的 p - J N K ，F a s L ，A C T I N 多克隆抗体稀释液( 1 ：2 0 0 ) 室温孵 育l h ，T B S T 洗5 m i n x 3 次，与辣根酶标记的二抗稀释液 ( T B S T ) 室温孵育l h ，T B S T 洗5 m i n x 3 次，T B S 洗5 m i n x 2 次，用E C L 显色试剂盒在x 一光片上显色，保存。 作者简介：安丽荣( 1 9 7 3 一) ，女，主治医师，博士。研究方向：脑的老化和老年性痴呆。E m a i l - a l i r o n g y a b o o c o n - L c n 万方数据 12 14 C h i n e s eJ o u m a lo fM e d i c i n a lG u i d e 2 0 0 8V o l u m e1 0N o 8 ( S e r i a lN o 6 1 ) 1 4 统计学分析 实验结果用S P S S l 0 0 软件处理，所有试验结果均表 示为，采用方差分析检验方法对数据进行统计。P 0 0 5 ，V 6 4 2 I - A P P 过度表达组( 6 5 + 1 ) ， P 0 0 5 ，三组之间无显著性差异。无血清培养2 4 h 后，1 0 0 m o V LH ：0 2 作用2 4 l l ，与对照组( 2 3 + 1 5 ) 相比，A P P 过度 考蝴( 3 0 ±3 5 ) ，P 0 0 1 ，V 6 4 2 I A P P 列掂毒茛赵组( 35 5 ±4 ) ， P O 0 1 ，有显著性差异。A P P 过度表达组与v 6 4 2 I A P P 过 度表达组相比，P O 0 5 ，有显著性差异( 图2 ) 。 ( 3 ) 蛋白质水平检测p - J N K ，F a s L ：在各组的1 3 - a c t i n 表达量一致的情况下，采用W e s t e r n 方法检测氧化应激处 理不同时间，细胞内p - J N K ，F a s L 的含量( 图3 ) 。可见在处 理3 0 m i n 时，在A P P 组和V 6 4 2 I - A P P 组P - J N K 表达，而 且变异组V 6 4 2 I A P P 组明显比A P P 组表达增多；在氧化 图3 各组细胞在凋亡过程中基因的表达差异 ( 1 、4 、7 为对照组：2 , 5 、8 为野生型A P P 表达组：3 、6 、9 为变异型V 6 4 2 I A P P 表达组) 应激6 0 m i n 时，A P P 组和V 6 4 2 I A P P 组P - J N K 表达量 基本相同，而对照组未表达P - J N K 。在处理3 0 m i n 时，在 三组都有微量的F a s L 表达；在氧化应激6 0 m i n 时，三组 F a s L 表达明显增加，而且变异组V 6 4 2 I A P P 组明显比 A P P 组和对照组表达量增多。 3 讨论 近年来，越来越多的证据表明，氧化应激介导了神经 细胞凋亡。A D 病人线粒体D N A 氧化损伤较对照组增加 3 倍网。H ：O 对细胞的损伤是通过H 2 0 ：在代谢过程中产 生活性氧( R O S ) ，R O S 的生成可在众多的细胞系中激活 I N K 激酶的活性并导致细胞凋亡的发生【9 1 。 T N K 属于丝裂原活化蛋白激酶( m i t o g e n - a c t i v a t e d p r o t e i nk i n a s e ，M A P I O 的一种，由于T N K 信号传递途径在 细胞应激反应中起重要作用，可被细胞外应激信号激活， 故又被称为应激活化的蛋白激酶( s t r e s sa c t i v a t e dp r o t e i n k i n a s e 。S A P K ) 。在去除神经生长因子的P C I 2 细胞和交感神 经元中，抑制T N K 和c - j u n 的活性可抑制细胞的凋亡即q 。 但是活化T N K 途径引起细胞凋亡的确切机制并不清楚。 F a s F a s L 是近年来又发现的一个重要的细胞凋亡基 因之一，是将凋亡信号转导入细胞内的主要系统之一。研 究发现，应用l N K 抑制剂可阻断F a s L 的诱导表达；采用 F a s F C 但抗中和F a s L ，可以阻止由于N G F 缺失而引起 的细胞凋亡。所以F a s L 被认为是T N K 途径激活后导致凋 亡的重要因素。但是在一些细胞中1 N K 的激活并不一定 引起F a s 的表达。 A n n eE c k e r t 等成功地采用质粒转染P C I 2 细胞，获 得稳定表达的细胞1 3 , 4 。C e l i om a r q u e s 等( 2 0 0 3 ) 把A P P 基 因的细胞转染与细胞内信号转到联系起来。采用与F A D 有关的双突变A P P ( K M 6 7 0 6 7 1 N L ) ，野生型A P P 和空载 体转染P C I 2 细胞。在细胞凋亡的过程中，研究引起细胞 万方数据 巾国医药身刊 ·1 2 1 5 · 2 0 0 8 年第l O 卷第8 期( 总第6 1 期) 凋亡的信号转导通路：C a s p a s e ，J N K 。本实验以P C D N A 3 作为基因表达的载体，在脂质体的介导下转染培养的 P C I 2 细胞，获得稳定表达过多A P P 的细胞株。在过度表 达的A P P 的P C I 2 细胞模型的基础上，进一步研究氧化 应激引起的细胞凋亡过程中的信号转导通路，这种模型 的优点是：在大多数实验中，采用合成的A B 以斗M 浓 度处理培养的神经元，海马神经元和P C I 2 细胞；而在 A D 患者脑脊液中天然生成的A B 浓度是p M 。这种方法 更接近于生理条件下模拟A D 患者的脑内环境。采用 合成的A f 3 加入到细胞培养液中：而A B 在细胞内产生。 在A B 分泌到细胞外，沉积于老年斑之前，已经在细胞内 聚集。细胞内累积的A B 损伤了细胞的正常功能，表现出 A B 神经毒性的连锁反应。这更接近于生理条件下模拟脑 内环境。为深入研究A P P 对细胞的作用机制及A D 病的 形成原因提供有意义的资料。 H o e c h s t 3 3 3 4 2 是分子生物学与形态学相结合的研究 方法，能准确的反应细胞凋亡最典型的形态特征。 H o e c h s t 3 3 3 4 2 法显示1 0 0 斗m o l LH 2 0 作用2 4 小时引起 转染A P P 组和转染V 6 4 2 I P C I 2 组细胞凋亡数目明显比 对照组多，说明转染A P P 后P C I 2 细胞在受到外界氧化 应激损伤时，细胞更容易受到损伤。 研究发现J N g 信号转导系统既与A D 早期的A 1 3 沉 积及T a u 蛋白的异常磷酸化有关，又参与了这些异常的 病理因素所致的神经元凋亡，进而导致A D 的发生和发 展。F a s - F a s L 是近年来又发现的一个重要的细胞凋亡基 因之一，是将凋亡信号转导入细胞内的主要系统之一。通 过本实验，证实在表达人的A P P 蛋白的P C I 2 细胞中，氧 化应激引起细胞凋亡的过程中，P - J N K 被活化，同时伴随 着F a s L 基因的表达。与野生型A P P 转染组和对照组相比， 变异A P P 转染组的P - J N g 蛋白表达和F a s L 的m R N A 表 达及蛋白表达时间较早表达，表达数量也明显增多。 本文的研究结果为研究氧化应激引起的A P P 过度表 达的P C I 2 细胞凋亡提供了有意义的资料。虽然P C I 2 细胞 在形态、生理、生化功能方面更接近于神经元，在国内外用 作研究神经细胞的模型，尽管其研究结果无法完全代替神 经元，但可以间接地为基础研究或临床治疗提供新的思路。 参考文献 lH a s h i m o t oY 。N i i k u r aT I t oY e ca 1 M u l t i p l em e c h a n i s m su n d e r l i e n e u r o t o x i c i t vb yd i f f e r e n tt y p e so fA l z h e i m e r sD l S e a s em u t a t i o mo fa m v l o l d p r e c u r s o rp r o t e i n JB i o lC h e m , 2 0 0 0 ；2 7 5 ( 4 4 ) ：3 4 5 4 1 3 4 5 5 1 2O a k l e yH ，C o l eS L ，L o g a nS ，e ta 1 I n t r a n e u r o n a lB a m y l o i da g g r e g a t e s 。 n e r o d e g e n e r a t i o n ，a n dn e u r o nI o s si nt r a n s g t ：n i cm i c ew i t hf i v ef a m i l i a l A k h e i m e r 7 sd i s e a s em u t a t i o n s ：p o t e n t i a lf a c c o P si na m y l o i dp l a q u ef o n n a t i o n 【1 1 I N e u r o s c i ，2 0 0 6 ：2 6 ：1 0 1 2 9 1 0 1 4 0 3M a r q u e sC A 。K 甜U B o n e r tA c ca 1 N e u r o t o 】d cm e c h a 曲n i sc a u s e db y t h eA l z h e i m e r sD L e a s e - l i n k e ds w e d i s hA P Pm u t a t i o n ：o x i d a t i v es t l “ B s 。 c a s p a s e sa n d J N Kp a t h w a y 】JB i o lC h e m ，2 0 0 3 ；2 7 8 ：2 8 2 9 4 2 8 3 0 2 4E c k e f tA ，S t e i n e rB ， V l a r q u e sC ，e ta 1 E l e v a t e dv u l n e m b i l i wt oo x i d a t i v e s t r e s s - i n d u c e dc e l ld e a 出a n da c t i v a t i o no fc a s p a s e - 3b yt h es w e d i s ha m y l o i d p r e c u r s o rp r o t e i nm u t a t i o n 】JN e u r o s c iK e s ，2 0 0 1 ；6 4 ：1 8 3 “ - - 1 9 2 5B i l l i n g sL M ，O d d oS ，G r e e nK N ，c ta 1 I n t r a n e u r o n a lA Bc a u s e $ t h eo n s e to f e a r l yA l z h e i m e r s d i s e a s e r e l a t e d c o g m t i v ed e f i d t si nt r a n s g e n i cm i c e 】 N e u r o n 。2 0 0 5 ；4 5 ：6 7 5 “ - ' 6 8 8 6S u z a k iY ，Y o s h i z u m iM ，K a g a m is J ，e ta 1 H y d r o g e np e r o x i d es t i m u l a t e sc S r C m e d i a t e db i gm i t o g e n a c t i v a t e dp r o t e i nk i n a s e1 M K l ) a n dt h e M E F 2 Cs i g n a l i n gp a t h w a yi nP C I 2c e l l sp o t e n t i a lr o l e 血c e l ls u r v i v a l f o l l o w i n go x i d a t i v ei n s u l t s 【J 】JB i o lC h e m ，2 0 0 2 ；2 7 7 ( 11 ) ：9 6 1 4 - - ' 9 6 2 1 7 安丽荣。金连弘，赵育桢等人的a p p 基因转染P C I 2 细胞及效果检测】 解剖科学进展，2 0 0 5 2 ：3 4 - 3 6 8I S u z u m a ，I CS u z u m a ，H T a k a 画，e ta 1 C y c l i cs t r e t c hi n d u c e dr B a c t i v e o x y g e ns p e c i e s ( p o s ) e n h a n c e sa p o p t o s i si np o r c i n er e t i n a lp e r i c y t e s 口R P c ) t h r o u g hJ N K S A P Ka c t iv a t i o n 【I 】I n v e s t O p h t h a h n 0 1 V i s S c i ， 2 0 0 3 ；4 4 ：3 8 8 8 3 8 9 2 9Y o s h i z u m iM ，A b eJ I ，H a e n d e l e l “ ，e ta 1 S r ca n dc a sm e d i a t eI N Ka c t i v a t i o n b u tn o tE R K l 2a n dp 3 8k i n e sb yr e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s 】JB i o lC h e m , 2 0 0 0 ；2 7 5 ( 16 1 ：1 1 7 0 6 - 1 1 7 1 2 1 0C h e nK ，V i 乜I A ，B e r kB C ，e ta 1 C - j u nn - t e r m i n a lk i n ea c t i v a t i o nb y h y d r o g e np e r o 】d d e i ne n d o t h e l i a lc e l l sr e v o l v e s S r C - d e p e n d e n te p i d e r m a l g r o w t hf a c t o rr e c e p t o rt r a n s a c t i v a t i o n 】JB i o lC h e m , 2 0 0 1 ；2 7 6 ( 1 9 ) ：1 6 0 4 5 1 6 0 5 0 1 1N i c u l e s c uH L 。B o n o c oE 。K a s u y aY 。c ta 1 W i t h d r a w a lo fs u r v i v a lf a c t o n r e s u l t si na c t i v a t i o no ft h eI N Kp a t I l w a yi nn e u r o n a lc e l l sl e a d i I l gt of a s l i g a n dr e d u c t i o na n dc e l ld e a t h 【I 】M o lC e lB i o l ，1 9 9 9 ；1 9 ( 1 ) ：7 5 1 7 6 3 ( 上接1 2 1 2 页) 与1 3 - a c t i n 比值分别为( o 4 6 + 0 0 5 ) 、( o 4 9 ± 0 0 1 ) 、( o 5 1 + 0 0 3 ) ，阳性对照灰度比值为( o 4 8 _ + 0 0 4 ) ，其差 异有统计学意义( P 0 0 5 ) 。 M ：D N AM a r k e r ：1 ：未加药组： 2 ：1 2 5 n g m l 处理组： 3 ：2 5 0 n g m l 处理组： 4 ：5 0 0 n g m l 处理组： O r ' - - - 1 5 0 b p 5 ：正常人淋巴细胞 一2 7 l b p 图3 不同浓度T P L 作用C A 4 6 细胞7 2 h 后P 1 6 糠M 表达变化 3 讨论 T r i p t o l i d e 是传统中药雷公藤中提纯的含环氧的二萜 内酯化合物。我所经基础实验及临床I 、期研究发现其 对多种髓系及淋巴细胞白血病均有较好的疗效。近年来 国内外的研究证实，雷公藤内酯醇具有广谱抗肿瘤作用。 除直接抑制肿瘤细胞的生长外，t r i p t o l i d e 还能诱导多种 肿瘤细胞的凋亡刚。而本课题组前期的实验研究提示在 多种恶性血液病中，p 1 6 基因发生异常的主要形式是基因 缺失和基因异常甲基化臣q 。本研究发现小剂量t r i p t o l i d e 即 可明显抑制C A 4 6 细胞的增殖，该作用呈现剂量和时间 依赖性，其可能机制为通过诱导C A 4 6 细胞异常甲基化 的p 1 6 基因去甲基化，从而使p 1 6 基因恢复表达，对细胞 周期起负调控作用，但其诱导去甲基化、恢复p 1 6 基因表 达的机制还有待于进一步探讨。 参考文献 1H e r m a nJ G ，G r a f tJ P - ，M y o h a ne nS ，e ta 1 M e t h y l a t i o ns p e c i f i cP C I L ：a n o v e lP C I La s s a yf o rm e t h y h t i o ns t a t u so fC p Gi s l a n d P r o cN a t iA c a d S d U S A ，1 9 9 6 ；9 3 ：9 8 2 1 “ - ' 9 8 2 6 2P a l m i s a n o W A ，D i v i n eK I LS a c c o m a n n oG ，e ta 1 P r e d i c t i n gl u n gc a n c e rb y d e t e c t i n ga b e r r a n tp r o m o t e m a e t h y l a t i o ni ns p u t u m C a n c e r K e s ，2 0 0 0 ；6 0 ： 5 9 5 4 - 5 9 5 8 3 Y i n j u nL ，J i eJ ，Y u n g u iw T r i p t o l i d ei n h i b i t st r a n s c r i p t i o n6 c t o rN F k a p p a Ba n dr e d u c e sa p o p t o s i so fm u l t i p l em y e l o m ac e l l s 【l 】L e u kR e s ，2 0 0 5 ；2 9 ( 1 ) ： 9 9 “ - 1 0 5 4C h o iV J ·K i mT G ，K i mY H ·e ta 1 I m n s u n o s u p p r e s s a n tP G 4 9 0 ( t r i p t o l i d e ) i n d u c e sa p o p t o s i st h r o u 曲t h ea c t i v a t i o no fc a s p a s e 一3a n dd o w n r e g u l a t i o n o f X I A Pi nU 9 3 7c e l l s U lB i o c h e mP h a r m a c o l ，2 0 0 3 ；6 6 ( 2 ) l ：2 7 3 2 8 0 5 沈建箴，周华蓉去甲基化在治疗恶性血液病中的研究中华内科杂志 2 0 0 6 ；4 5 ( 5 ) ：3 5 5 3 5 6 6 周华蓉，沈建箴。付海英，等巢式M S P 法检测恶性血液病细胞株p 1 6 基 因启动子甲基化状态的研究中国实验血液学杂志2 0 0 6 ；1 4 ( 2 ) ：3 7 5 一- 3 7 8 万方数据