[水产标准]-SC-T 3017-2004 水产品中氯霉素残留量的测定 气相色谱法.pdf

I CS B 5 0 6 7 . 0 5 0 9 1 1 : 中 华 人 民 共 和 国 水 产 行 业 标 准 S C / T 3 0 1 8 -2 0 0 4 水产品中氯霉素残留量的测定 气相色谱法 D e t e r m i n a t i o n o f c h i o r a m p h e n i c o l r e s i d u e s i n f i s h e r y p r o d u c t s G a s c h r o ma t o g r a p h y 2 0 0 4 一 0 1 一 0 7 发布2 0 0 4 一 0 3 一 0 1 实施 中华 人 民共 和 国农 业 部发 布 S C A T 3 0 1 8 -2 0 0 4 月 U胃 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准起草单位：国家水产品质量监督检验中心。 本标准主要起草人：冷凯良、李兆新、李晓川、王联珠、翟毓秀、陈远惠。 S C/ T 3 0 1 8 -2 0 0 4 水产品中氮霉素残留量的测定气相色谱法 范围 本标准规定了水产品中氯霉素残留量的气相色谱测定方法。 本标准适用于水产品可食部分中氯霉素残留量的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件， 其随后所有 的修改单（ 不包括勘误的内容） 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日 期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 G B / T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 样品经乙 酸乙醋提取并浓缩， 提取物溶于水， 用正己烷脱脂， C 1 8 固相萃取柱净化， 硅烷化试剂衍生 化后， 用配有电子捕获检测器的气相色谱仪测定， 外标法定量。 4 试剂 所有试剂在氯霉素出峰处应无干扰峰， 最好选择优级纯或色谱纯试剂。 4 . 1 氯霉素标准品： 纯度）9 9 %. 4 . 2 甲醇： 色谱纯。 4 . 3 乙酸乙醋： 色谱纯。 4 . 4 正己烷： 优级纯。 4 . 5 氯仿： 分析纯。 4 . 6 乙睛： 色谱纯。 4 . 7 无水硫酸钠： 分析纯， 6 5 0 灼烧4 h ， 冷却后贮于密闭容器中备用。 4 . 8 氯化钠： 分析纯。 4 9 4 9 6 氯化钠溶液： 称取氯化钠2 0 g ， 加水溶解， 稀释到5 0 0 m L o 4 . 1 0氯霉素标准溶液： 准确称取氯霉素标准品0 . 0 2 5 0 g ， 用甲醇溶解并定容至5 0 m L ， 配成浓度为 5 0 0 u g / m L的 标准贮备液， 置4 冰箱中 保存， 保存期不超过3 个月。临用前， 取此贮备液， 用甲醇稀释 成浓度为0 . 1 0 0 u g / m L的 标准工作液。 注： 通常的玻璃器皿洗涤程序对于从玻璃表面除去痕量抓霉素不总是很有效的， 建议使用甲醇淋洗所有玻璃器皿， 以避免污染问题。 4 . 1 1 衍生化试剂： N , o - 双（ 三甲基硅烷基） 三氟乙酸胺（ B S T F A ) 三甲基氯硅烷（ T MC S ） 体积比9 9 : 1 . 4 . 1 2 水： 实验用水应符合G B / T 6 6 8 2 中一级水标准。 5 仪器 实验室常规仪器、 设备及下列各项。 5 . 1气相色谱仪： 配6 3 N 1 电子捕获检测器。 5 . 2 电子天平： 感量0 . 0 0 0 1 g o S C / T 3 0 1 8 -2 0 0 4 5 . 3 均质机。 5 . 4 离心机。 5 . 5 旋涡混合器。 5 . 6 电热恒温水浴锅。 5 . 7 旋转蒸发器。 5 . 8 鸡心瓶： 5 0 m L , 1 0 0 m L ， 细口。 5 . 9 玻璃离心管： 5 0 m L o 5 . 1 0 刻度离心管： 5 m l , ， 具塞。 5 . 1 1 氮吹仪。 5 . 1 2 Cs 固相萃取柱， 填料3 0 0 m g , 5 . 1 3 S P E固相萃取装置。 5 . 1 4 无水硫酸钠柱： 砂芯玻璃层析柱中装无水硫酸钠5 g o 6 色谱条件 6 . 1 色谱柱： D B - 5 石英毛细管柱， 固定相： S E - 5 4 ( 聚甲基苯基乙烯基硅氧烷） , 3 0 mX0 . 5 3 m m X 0 . 5 卿； 或与之相当的 色谱柱。 6 2 载气： 氮气， 线速度2 9 c m / s , , 6 . 3 进样口温度： 2 6 0 ' C o 6 . 4 温度程序： 初始柱温1 5 0 C， 维持1 m i n , 1 5 t / m i n 升至2 6 0 C， 维持1 0 m i n 或直到氯霉素已经流 出， 然后设定3 0 C / mi n 升至2 8 0 r - ， 维持5 m i n ， 以确保所有的样品已经流出。 6 . 5 检测器温度： 3 0 0 。 6 . 6 进样方式及进 样量： 无分流方式进 样， 1 IA L o 6 . 7 检测器： 6 3 N i 电子捕获检测器。 7 测定步骤 7 . 1 样品预处理 鱼去鳞、 皮， 沿背脊取肌肉； 虾去头、 壳、 附肢， 取可食肌肉部分； 蟹、 中华鳖等取可食肌肉部分； 样品 切为不大于0 . 5 c m X 0 . 5 c m X 0 . 5 c m的小块后混匀， 放置冰箱中冷冻贮存备用。 7 . 2 提取 将样品 解冻， 称取样品5 g （ 精确到0 . 0 0 1 g ) , 置于5 0 m L 玻璃离心管中， 加 人乙酸乙醋2 0 m L ， 均质 机均质1 m i n ， 分散均匀， 提取氯霉素， 4 0 0 0 r / m i n 离心3 m i n ， 将乙酸乙醋层转移到1 0 0 M L细口 鸡心瓶 中。再向离心管中加乙酸乙醋1 0 m L ， 用原均质机均质混合1 m i n , 4 0 0 0 r / m i n离心3 m i n ， 合并乙酸乙 醋提取液于1 0 0 m L细口鸡心瓶中， 于4 0 水浴中减压旋转蒸发至干。 注： 均质机清洗方法， 先用大量水浸洗， 再用甲醇浸洗， 最后用燕馏水漫洗。 7 . 3 脱脂净化 向鸡心瓶中加1 M L甲醇旋涡混合溶解残留物， 再加人1 5 m L正己烷和2 5 m L 4 %氯化钠溶液， 盖 塞振荡混合1 m i n ， 充分混合提取脂肪， 转移到另一5 0 m L 离心管中， 4 0 0 0 r / m in 的速度离心2 m i n ， 除 去上层正己烷相并弃去。再向水相中加1 0 M L正己烷， 重复提取一遍， 弃去正己烷相。 水相中加人1 5 m L乙酸乙醋， 旋涡混合器混合2 m i n , 3 0 0 0 r / m i n 离心3 mi n ， 吸取乙酸乙醋层， 经 过无水硫酸钠柱脱水过滤于5 0 m L鸡心瓶中。再向水相中加人5 m L乙酸乙醋， 重复上述操作。用少 量乙酸乙醋淋洗无水硫酸钠柱， 合并提取液于5 0 m L鸡心瓶中， 在4 0 水浴中减压旋转蒸发至干。对 S C A T 3 0 1 8 -2 0 0 4 于大部分样品， 到此步骤净 化效果已 可达到 要求， 对于净化不完全的 样品可经( 8 固 相萃取柱进一步净 化。 加人2 m L乙酸乙酷溶解提取物并转移于5 m L具塞离心管中， 用1 M L乙酸乙醋洗涤鸡心瓶， 合并 乙酸乙醋， 于5 0 'C -5 5 的砂浴中吹氮蒸发至近干， 再用 1 m L乙酸乙醋洗涤离心管壁并吹干。注意 防潮。 7 . 4 C , 8 柱净化 注意： 以下步骤必须连续做完， 切莫让吸附剂变干。 给每个样品准备一根q8 柱， 顺序用5 m L 甲醇, 5 m L 氯仿、 5 m L甲 醇和5 m L 水淋洗活化q 8 柱， 弃 掉洗涤液。用5 m L体积分数为5 的乙睛水溶液溶解7 . 3 中在4 0 水浴中减压旋转蒸发至干的提取 物， 吸 取水溶液装人C1 8 柱过柱， 弃掉流出 液。 注意流速保持每秒一滴， 否则净化效果和回收率都较差。 用1 ML 水淋洗鸡心瓶2 遍， 并将淋洗液加入q8 柱过柱， 弃掉流出液。用5 mL水淋洗qs 柱， 让洗涤液 完全流出q s 柱， 用微氮吹干。 用乙 睛将q s 柱中的氯霉素洗脱， 洗脱2 次， 每次1 . 5 m L ， 合并洗脱液于 5 m L 具塞离心管中。在温度5 0 'C - - 5 5 的砂浴中， 用氮气吹除乙睛至近干， 再用1 M L乙睛洗涤离心 管壁并用氮气吹干。注意防潮。 7 . 5 衍生化 7 . 5 . 1 试样的衍生化 向 干的 残留物中加1 0 0 I .L 衍生化试剂， 盖塞并旋涡混合l o s ， 在7 0 烘箱中反应3 0 m in 。再在 5 0 'U -5 5 砂浴中， 用氮气流吹除多余的试剂， 至样品管刚好吹干为止（ 注意： 此步过长的吹干时间可 导致丢失分析物） 。加人0 . 5 m L正己烷， 旋涡混合l o s ， 供气相色谱分析用。 7 . 5 . 2 标准工作液的衍生化 取适量标准工作液于5 m L具塞离心管中， 在温度5 0 一5 5的砂浴中， 用氮气吹除溶剂至干。 以下按7 . 5 . 1 的步骤操作。 7 . 6 样品测定 分别注人1 t .L 适当 浓度的 氯霉素标准硅烷化衍生物溶液及样品 提取物硅烷化衍生物溶液于气相 色谱仪中， 按上述色谱条件进行色谱分析， 记录峰面积， 响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据 标准样品的保留时间定性， 外标法定量。 7 . 7 计算 样品中氯霉素的含量按公式（ 1 ) 计算。 一 AxC, x V AS Xm 式中： X 样品中氯霉素含量， 单位为微克每千克（ F ig /kg ) ; C s 标准 衍生物溶液相当 氯霉素 含量， 单位为纳克每毫升（ n g / m L ) ; A 试样液中 氯霉素衍生物的 峰面积或峰高， 单位为 微伏秒或毫米（ 卢 . s 或m m ) ; V 样品提取物衍生化溶液体积， 单位为毫升（ m L ) ; A S 氯 霉 素 标 准 衍 生 物的 峰 面 积 或 峰 高， 单 位为 微 伏秒 或 毫 米( t t v “ s 或m m ) ; m 样品质量， 单位为克（ 9 ） 。 注： 计算结果需扣除空白 值。 8 方法回收率 标准添加浓度为0 . 1 t e g / k g - 2 0 . 0 K g / k g 时， 回 收率） 7 0 010 0 S C / T 3 0 1 8 -2 0 0 4 9 方法检测限 本方法检测限： 0 . 3 u g / k g . 1 0 允许差 两次平行测定结果相对偏差镇1 5 %。 1 1 方法的线性范围 本方法的 线性范围： 标准衍生物溶液相当 氯霉素浓度为0 . 5 n g / m L - - 2 5 0 n g / m L .