[水产标准]-SC1002-1992.pdf
中华 人 民 共 和 国行 业 标 准 S C 1 0 0 2 一9 2 草鱼出血病组织浆灭活疫苗检测方法 主题内容与适用范围 本标准规定了草鱼出血病组织浆灭活疫苗制品的取样和试验方法， 以及判定原则等。 本标准适用于草鱼出血病组织浆灭活疫苗的检测， 不适用于检测其他鱼用菌( 疫) 苗。 2 引用标准 S C 1 0 0 1 草鱼出 血病组织浆灭活疫苗 N Y 7 成品检验的有关规定 3 取样 3 . 1 每批制品随机取样作为待检样品。 取样量: 制品在5 0 瓶以下者， 取2 - 4 瓶; 制品在5 0 1 0 。 瓶者， 取样5 瓶; 制品在 1 0 0 瓶以上者， 取样1 0 瓶。 3 . 2 在无菌条件下， 将每批待检样品混匀， 并分装到灭菌小瓶中， 数量根据检测项目 和要求而定， 置于 4 C 冰箱中待检。 4 p H检验 采用经计量部门检定的市售p H比色计或精密试纸进行测试。 p H值为5 . 5 -7 . 。 者为合格品。如 p H小于5 . 5 或大于7。 ， 则为不合格品。 5 无菌检验 在无菌条件下， 用生 理盐水将待检疫苗稀释1 0 倍， 从每管吸取。 . 2 m L的量分别接种到普通肉 汤、 厌气肉肝汤和琼脂斜面上各一管， 在3 7 条件下培养9 6 h ， 均应无菌生长。 如有菌体生长， 则为不合格 口/ 口口 。 6 安全性检验 6 . 1 试验容器 6 . ， . 1 选用容积为1 - - 2 m ' 的水泥池或水簇箱等容器。容器需配有控温和通气增氧装置。 6 . 1 . 2 容器在使用前用1 0 0 p p m漂白 粉水溶液消毒2 4 h ， 消毒后用自 来水冲洗干净， 并放人适量经活 性碳处理的自来水曝气2 4 h 后待用。 6 . 2 试验鱼种 6 . 2 . 1 应选用全长为8 1 5 c m体质健壮， 游动活泼， 无任何损伤和疾病的当年草鱼种， 并在试验前用 2 %的食盐水浸浴5 1 0 m i n , 6 . 2 . 2 将符合6 . 2 . 1 条的鱼种放人符合6 . 1 条规定的容器中， 于2 8 - 3 0 水温下饲养， 观察1 5 d . 所 有鱼均应活动正常。 如发现有鱼种出现有出 血病症状， 则该批鱼种不得使用。 6 . 3 安全性试验 中华人民共和国农业部1 9 9 2 一 1 1 一 0 6 批准 1 9 9 3 一 0 4 一 0 1 VA S c 1 0 0 2 一 9 2 用无菌生理盐水将待检疫苗样品稀释1 0 倍。 取符合6 . 2 条规定的鱼种1 0 尾， 将稀释后的疫苗用无 菌注射器对鱼种作腹腔或背肌注射， 注射剂量为0 . 3 - 0 . 5 m L / 尾。 注射后的鱼种放入试验容器内， 2 5 - 2 8 水体中饲养， 观察1 5 d ， 如发现有鱼患出血 病， 则该批疫苗为不合格。 7 效力检验 7 . 1 鱼种免疫 7 . 1 . 1 按6 . 1 条规定准备试验容器， 按6 . 2 条规定选择试验鱼种。 7 . 1 . 2 将经安全试验的待检样品用无菌生理盐水稀释1 0 倍， 用无菌注射器对鱼种进行注射免疫， 每尾 注射剂量为。 . 3 - 0 . 5 m L ， 试验鱼种不少于2 5 尾。注射后的鱼种在2 5 -2 8 的水温下饲养1 5 3 0 d , 该鱼种即为免疫鱼种。 了 . 2 免疫保护率的测定 了 . 2， 免疫鱼攻毒 7 . 2 . 1 . 1 病毒液的制备: 按s c 1 0 0 1 附录A的规定制备未经灭活的活毒悬液( 活毒悬液的毒力测定见 附录 A) , 7 . 2 . 12 攻毒试验: 用生理盐水将活毒悬液稀释成毒力强度为1 0 0 L D s u / 0 . 5 m L后， 以0 . 3 -0 . 5 m L / 尾的剂量， 分别注射经免疫的试验组鱼种和未经免疫的对照组鱼种各2 0 尾。 攻毒后的鱼种在2 5 -2 8 'C 的水体中观察1 5 d ， 记录各组的死亡鱼数， 计算死亡率。 7 . 2 . 2 免疫保护率的计算 根据7 . 2 . 1 . 2 条的试验结果， 按下式计算: 免疫保护率( %) =对照组鱼种死亡率一试验组鱼种死亡率 对照组鱼种死亡率 X1 0 0 判定: 免疫保护率在8 0 %以上的制品为合格品。 8 物理性状检验 制品的感观性状应符合s c 1 0 0 1 的规定。 凡含有异物、 摇不散的凝块、 霉团及变质有异味者， 均应剔 出。同时应检验装量是否准确， 封口 是否严密， 瓶签有无差错不清等。 出厂检验应逐瓶进行。 9 有效期检验 按标签上注明的保存方法进行保存， 在保存期内应定期进行p H值、 无菌性、 安全性、 效力和物理性 状的检验。如发现制品质量发生明显改变， 则应重新确定制品的有效期。 1 0 样品保存 按N Y 7 的规定执行。 1 1 检验报告 每批制品的检验经过和结果， 应详细记载在记录本上， 填写检验报告单( 见附录B ) , 检验人员签字 或盖章。 S C 1 0 0 2 一9 2 附录A 活毒悬液毒力的测定 ( 补充件) 活毒悬液毒力的测定方法采用动物半数致死剂量( L D s o ) 法。 A 1 试验容器与试验鱼种的准备 按6 . 1 条与6 . 2 条规定准备试验容器和选择试验鱼种。 A 2 鱼种攻毒 A 2 . ， 将待测毒力的活毒悬液用生理盐水作1 0 倍连续梯度稀释成6 个梯度( 1 。 一 , 1 0 - ' , “ “ “ , 1 0 - ' ) a A 2 . 2 用灭菌注射器对鱼种进行腹腔或背肌注射活毒悬液， 每一梯度注射 1 0 尾鱼种， 并分别饲养于各 试验容器中。 注射剂量为每尾。3 -0 . 5 m L 。 同时设只 注射生理盐水的1 0 尾鱼种作对照。 所有的鱼 均 在2 5 2 8 水体中 饲养1 5 d 。 记录各容器中鱼种的死亡尾数， 计算各梯度活毒悬液的鱼种累计死亡率。 A 3 攻毒鱼种半数致死量计算 A 3 . 1 半数致死量: 能使半数攻毒鱼种死亡的活毒悬液的稀释度， 作为病毒致病能力判定的终点， 通常 以能使半数攻毒鱼种死亡的活毒悬液稀释度倒数的对数表示。 A 3 . 2 计算 攻毒鱼种半数致死量( L D s o ) =高于5 0 %死亡的活毒悬液稀释度倒数的对数+距离比例X 稀释系数的对数 其中: 距离比例= 高于5 0 %的死亡率百分数一5 0 % 高于5 0 %的死亡率百分数一低于5 0 %的死亡率百分数 (A1) S C 1 0 0 2 一 9 2 附录B 草鱼出血病组织桨灭活疫苗成品检验报告单 ( 补充件) 产品编号: 检验 日期年 产品制造单位 产品批号( 或生产日 期) p H检验 检验方法 检验结果p H= 无菌检验 普通肉汤培养 厌气肉肝汤培养 琼脂培养 安全性检验 试验鱼数 ( 尾) 试脸结果 效力检验 试验鱼数 ( 尾 ) 免疫保护率% 物理性状检验 ( 逐瓶检验) 色泽 异物 不散结块 母团 异味 密封程度 结果判定 检验单位:检验人签名或盖章: 附加说明: 本标准由农业部水产司提出。 本标准由中国水产科学研究院长江水产研究所归口。 本标准由浙江省淡水水产研究所负责起草。 本标准主要起草人杨广智、 叶雪平、 罗毅志。
