三黄消渴片的药效学研究.pdf

8 6 4 新疆医科大学学报J O U R N A LO FX I N J I A N GM E D I C A LU N I V E R S I T Y2 0 0 9J u l ，3 2 ( 7 ) 黄消渴片的药效学研究 王纤汝+ ，张彦，李娟 ( 新疆医科大学第四附属医院药学部，新疆乌鲁木齐8 3 0 0 0 0 ) 摘要：目的：研究三黄消渴片对链脲佐菌素( S T Z ) 造W i s t a r 大鼠糖尿病动物模型的治疗效果。方珐：用链脲 佐菌素( S T Z ) 腹腔注射加喂高脂饲料造模，观察三黄消渴片对模型大鼠血糖( T C ) 、血脂( T G ) 、糖耐量、糖化血红蛋 白以及糖尿病足等体症的改善作用。结果：三黄消渴片能明显降低模型大鼠的血糖、血脂及糖化血红蛋白。改善 糖耐量异常，改善糖尿病大鼠“三多一少”症状及糖尿病足等体症。结论：三黄消渴片能改善糖尿病患者的中医临 床症状，能明显降低m L 糖，调节血脂和体重。 关键词：三黄消渴片；糖尿病大鼠模型；糖尿病足；血糖 中图分类号：R 一3 3 2 ；R 9 7 7 1 5 ；R 9 6 9 4文献标识码：A文章编号：1 0 0 9 - 5 5 5 1 ( 2 0 0 9 ) 0 7 0 8 6 4 0 4 S t u d yo ft h ep h a r m a e o o l y n a m i c so fs a n h u a n gx i a o k et a b l e t s W A N GQ i a n - r u ，Z H A N GY a n ，L IJ u a n ( D e p a r t m e n to fP h a r m a c y ，F o u r t hA f f i l i a t e dH o s p i t a ，X i n j a n gM e d i c a lU n i v e r s i t y ， U r u m q i8 3 0 0 0 0 ，C h i n a ) A b s t r a c t ：0 b j e c t i v e ：T os t u d yt h et r e a t m e n te f f e c t so fs a n h u a n gx i a o k et a b l e t so nW i s t a rr a tm o d e lb u i l tb y S T Z M e t h o d ：I n j e c t i n gi nS T Zt oW i s t a rr a ta n df e e d i n gw i t hh i g hf a td i e tt Ob u i l dm o d e l O b s e r v i n gt h e i m p r o v e m e n t so fb l o o ds u g a r 。b l o o dg r e a s e ( T C ，T G ) ，i m p a i r e dg l u c o s et o l e r a n c e ( I G T ) a n dd i a b e t e so f f o o t ，e t c ，w h i c hw e r es y m p t o m so fs a n h u a n gx i a o k et a b l e t sm o d e lr a t R e s u l t s ：S a n h u a n gx i a o k et a b l e t s c o u l dr e c e d eb l o o ds u g a r ，b l o o df a ta n dg l y c o s y l a t e dh e m o g l o b i n ，i m p a i r e dg l u c o s et o l e r a n c eo b v i o u s l ya n d i m p r o v et h er a t s s y m p t o mo fd i a b e t e so ff o o te t c C o n c l u s i o n ：S a n h u a n gx i a o k et a b l e t sc o u l di m p r o v et h e b o d ys y m p t o m so fd i a b e t e sa n dr e c e d eb l o o ds u g a r ，a c c o m m o d a t ea v o i r d u p o i sa n d ( T C ，T G ) K e yw o r d s ：s a n h u a n gx i a o k et a b l e t s ；t h em o d e lo fb i gr a to nd i a b e t e s ；t h ef o o t o fd i a b e t e s ；b l o o ds u g a r 糖尿病( D i a b e t e sM e l l i t u s ，D M ) 是一组代谢性 临床综合症，第1 7 界国际糖尿病大会报道，全球已 确诊1 5 亿人，预测2 0 2 5 年将增至3 亿。在发达国 家D M 患病率已达3 7 ，成为仅次于癌症、艾 滋病、心血管病之后第4 位需要优先考虑的疾病，已 成为世界第5 位死亡主因 1 。我国D M 发病率 1 9 9 6 年为3 2 ，预计2 0 1 0 年将达到1 4 ，其中2 型糖尿病约占9 0 9 5 2 3 。 糖尿病以高血糖为主要标志，临床上出现烦渴、 多尿、多饮、多食、疲乏、消瘦、尿糖等表现。糖尿病 是因为胰岛素分泌量绝对或相对不足而引起的糖代 谢，蛋白质代谢，脂肪代谢和水、电解质代谢的紊乱。 三黄消渴片原方是新疆著名中医专家、主任中 医师张询邦教授临床治疗糖尿病的经验方，由黄芪、 地黄、山楂、黄连等组成，具有益气养阴、清热消渴的 功效。本研究采用链脲佐菌素( S T Z ) 致糖尿病大鼠 模型，观察i 黄消渴片对糖尿病大鼠的治疗效果。 1 材料与方法 1 1 试药、动物及仪器三黄消渴片( 浸膏粉) ( 新 疆华世丹药业有限公司中试生产，批号：2 0 0 6 0 1 1 2 ) ， 生药含量：3 2g 生药g ，人拟用处方量0 5g 片× 6 片次×3 次d ；正糖胶囊( 威海东宝制药有限公司 生产；国药准字B 2 0 0 2 0 0 7 2 ；批号：0 5 0 5 0 1 ) ，人用量： 0 4g 粒×6 粒次×3 次d 。链脲佐菌素( 北京拜 尔迪公司，批号：S - 0 1 3 0 ) ，用时将o 1m o l 1 的柠檬 酸缓冲液在冰浴下配制成S T Z 溶液( S T Z 溶于0 1 m o l L ，p H 4 5 的枸橼酸缓冲液) ，调至p H 4 0 ，现配 现用。高脂饲料( 胆酸钠0 5 ，胆固醇1 ，猪油 5 ，蛋黄粉l o ，基础饲料8 3 5 ) ；鼠基础饲料 ( 营养成分符合G B l 4 9 2 4 3 - 2 0 0 1 ) ，供应单位：新疆 - 作者简介：王纤汝( 1 9 6 9 ) ，女，大专，主管药师。研究方向：药效学。 三 万方数据 新疆医科大学学报J O U R N A I 。O FX I N J I A N GM E D I C A I ，U N I V E R S I T Y2 0 0 9J u l ，3 2 ( 7 ) 8 6 5 实验动物研究中心，合格证号：S Y X K ( 新) 2 0 0 3 0 0 0 3 。雄性W i s t a r 大鼠，清洁级。由新疆医科大学 医学实验动物中心提供。实验动物生产许可证：新 医动字S C X K ( 新) 2 0 0 3 0 0 0 1 。G M 3 0 0 瑞特血糖监 测系统及配套试纸，台湾华广生技股份有限公司； 7 6 0 0 0 1 0 全自动生化分析仪，日本日立公司；K D & 4 0 型低速离心机。科大创新股份有限公司中佳分公 司；D T 一5 0 0 A 型电子天平，常熟衡器厂；L S Y 一4 型电 热恒温水浴箱；北京市医疗设备厂。 1 2 动物造模取健康W i s t a r 大鼠舍1 0 0 只，体 重在1 5 0 1 8 0g ，取1 0 只作为正常对照组，喂以正 常饲料。其余9 0 只喂以高脂饲料，自由进食和饮 水，与第四周后按腹腔注射链脲佐菌素5 0m g k g ， 正常对照组大鼠予以i p 枸橼酸缓冲液，5d 后尾静 脉取血，测定空腹血糖及血脂( T C 、T G ) 。选取血糖 高于1 1 1m o l L 的大鼠作为糖尿病模型大鼠 3 ，进 行试验，成模率达7 9 ，死亡率1 8 。造模后的大 鼠均表现明显的多饮、多尿、多食、体重下降，并有精 神萎靡、反应迟钝、动作迟缓、蜷卧拱背、皮毛污秽、 无光泽、松散、身体消瘦、窝湿等现象。 1 3 给药与分组将模型大鼠分为5 组。分别为 模型组( 1 5m l 1 0 0g 生理盐水) 、阳性对照药物正 糖胶囊组( O 7 5g k g ) 、三黄消渴片治疗组( 2 2 5 、 4 5 0 、6 7 5g k g ) ，共5 组。每组大鼠均每日灌胃一 次( 1 5m i 1 0 0g ) 。正常对照组以等容积纯化水灌 胃。模型动物均用高脂饲料饲养，正常对照组用基 础饲料饲养，用药共计1 2 周，每天观察各组大鼠的 活动状态、精神状态、摄食量、饮水量、皮毛、大、小便 情况、每周换窝次数，每1 0 天测量一次体重，每2 0 天测一次T C 、T G ，血糖值。于第1 2 周取血测血糖 ( T C ) 、糖耐量、血脂( T G ) 、糖化血红蛋白等值。 1 4 统计学处理采用S P S S l 3 0 软件进行数据 处理分析，所有指标均以均数±标准差( z ±s ) 表 示，组间比较采用方差分析，检验水准a = O 0 5 。 2 结果 2 1 三黄消渴片对大鼠体重的影响各给药组大 鼠体重均比给药前体重有所增加，模型组大鼠体重 比给药前减轻，各给药组大鼠体重和模型组体重相 比，差异具有统计学意义( P 0 0 5 ) ( 表1 ) 。 表1 给药前后各组大鼠体重变化( g ，J ' - 、2 ：s ) 分组 ( g 荆k 最g ) n 给药前体重给药后体重P 值 疰：亏便型组比较，P 0 0 5 2 2 三黄消渴片对S T Z 造模大鼠空腹血糖的影响 ( 分组给药同上)模型组大鼠空腹血糖较正常组明 显升高，并且一直持续较高。三黄消渴片各组大鼠经 过治疗后空腹血糖值与模型组比较差异具有统计学 意义，各组治疗前后空腹血糖值也有明显下降( 表2 ) 。 表2 给药前后各组血糖变化( m o l L ，硅s ) 拄：与梗型纽比较，P 0 0 5 2 3 三黄消渴片对S T Z 造模大鼠糖耐量的影响 分组给药同上，在给药第1 2W 后，大鼠禁食不禁水 8h ，腹腔注射1 1 1m o l I 。的葡萄糖溶液2g k g ，然 后测定0 、6 0 、1 2 0 、1 8 0 、2 4 0m i n 血糖值( 表3 ) 。正 常组大鼠在1 8 0m i n 时血糖恢复到正常血糖值，模 型组大鼠在2 4 0m i n 时血糖值仍然维持较高的水 平，糖耐量异常。各给药组大鼠在2 4 0m i n 时血糖 值开始下降。 表3第1 2 周各组糖耐量实验数据( m o l L ，硅5 ) 2 4三黄消渴片对S T Z 造模大鼠糖尿病足的影响 模型组大鼠在造模8W 后出现糖尿病足现象，并 且耳边缘处出现红斑，紫癜及炎性反应。在大鼠后 肢关节处有皮肤溃疡，坏疽及感染现象，组织干枯， 骨质外露。有的鼠是双腿全部溃烂；有的是双耳缘 皮肤出现紫癜；有的是单肢、单耳。模型组大鼠 万方数据 8 6 6 新疆医科大学学报J O U R N A LO FX I N J I A N GM E D I C A l 。U N I V E R S I T Y2 0 0 9J u l 。3 2 ( 7 ) 9 0 有糖尿病足及微血管病变，而阳性药物对照组 和三黄消渴各组大鼠均未出现此症状。 2 5 三黄消渴片对S T Z 造模大鼠血脂的影响给 药1 2 周后，禁食不禁水8h 后取血测血清总胆固醇 ( T C ) 及甘油三脂( T G ) ( 表4 ) ，三黄消渴片治疗组 和模型组比较差异有统计学意义( Pd 0 0 5 ) ，三黄 消渴片各组给药后比给药前血脂也有明显下降( P d 0 0 5 ) 。 表4 给药前后各组T C 、T G 变化l m o l L ，士s ) 注：与模型组比较，P d O 0 5 ，与给药前后自身比较。P d O 0 5 2 6 三黄消渴片对S T Z 造模大鼠糖化血红蛋白的 影响给药1 2 周后心脏取血于抗凝管中测定糖化 血红蛋白( 表5 ) ，可以看出模型组大鼠体内糖化血 红蛋白含量较正常组明显升高，三黄消渴片对糖尿 病大鼠糖化血红蛋白含量有所降低，与模型组比较 有统计学差异。 表5 第1 2 周各组糖化血红蛋白实验数据f 。x 。a ：s ) 注：与模型组比较。P d 0 0 5 3 讨论 糖尿病尤其2 型糖尿病是严重危害人类健康的 主要疾病，是人类致死、致残的主要原因= 4 。糖尿病 的发病率逐年增加，其中2 型糖尿病的发病率占糖 尿病发病率的9 0 以上，因此对2 型糖尿病的研究 十分重要。人类普通2 型糖尿病的发病有两大机 制：胰岛素抵抗及胰岛B 细胞功能受损。环境因素 如高脂高能量饮食所致的超重及肥胖在胰岛素抵抗 的发生中起重要的作用。2 型糖尿病的特征有高血 糖、高血脂、胰岛素敏感性下降( 胰岛素抵抗) 、肥胖， 并可以合并心、脑、肾、眼、神经血管等多种慢性并发 症 5 _ 6 。大量文献表明高脂饮食配合小剂量S T Z 诱 导成的糖尿病大鼠模型是最接近人类2 型糖尿病的 模型。因此本实验采用高脂饮食喂养4w 后在注射 链脲佐菌素5 0m g k g 的方法造模，造模效果好。 三黄消渴片主要由黄连、黄芪、地黄和山楂四味 药组成。中医认为黄连具有清热燥湿，泻火解毒的 功效。临床和实验研究表明黄连中的小檗碱( 黄连 素) 具有降血糖、促胰岛素分泌和抗胰高血糖素等作 用，通过抑制糖原异生而实现。2 型糖尿病患者连 续服用黄连素能辅助降低血糖和血脂，改善患者微 循环，减少血管并发症f 7 】。中医认为黄芪具有补气 固表，利尿脱毒，排脓，敛疮生肌的功效，黄芪多糖 ( a s t r a g a l u sp o l y s a c c h a r i d d e ，A P S ) 为黄芪的有效成 分之一。现代药效学研究发现，A S P 能降低葡萄糖 负荷、对抗肾上腺素引起的小鼠血糖升高。地黄中 的活性成分地黄寡糖实验证明f 8 1 呵通过促进胰岛素 分泌使肝糖原生成增加，最终使血糖下降。山楂中 医认为具有消食健脾，行气散瘀的功效，其中含有多 种活性成分，如黄酮类化合物、有机酸、膳食纤维和 固醇等，山楂是目前调节血脂的保健品中使用频率 最高的一种，而黄酮类化合物的药理研究也显示降 血脂作用。据文献报道 9 ，山楂能明显降低高脂血 症大鼠的血清T G 水平、肝脏甘油三酯含量和肝脏 胆固醇含量，它主要通过抑制胆固醇的合成而发挥 降血脂的作用本次研究证实，三黄消渴片能降低糖 尿病大鼠空腹血糖；对糖耐量异常有所改善；能明显 降低糖尿病大鼠的T G ；对糖尿病大鼠糖化血红蛋 白含量有所降低，与模型组比较均有统计学差异( P d 0 0 5 ) 。 另外，临床上糖尿病人大多伴有四肢麻木、疼 痛，感觉减退，部分严重的病人出现下肢溃烂的症 状。本次研究还证实，三黄消渴片能有效控制糖尿 病大鼠后肢关节处皮肤溃疡，坏疽及感染现象。 对绝大多数糖尿病人来说，阴虚为病之本、燥热 为病之标，燥热伤津耗气的结果必然出现气阴两虚。 气阴两虚在糖尿病发展的病理过程中占主导地位。 治疗关键在于扶正祛邪，标本兼治，彻底消除导致本 病发生的病理因素。目前，中医药多从阴虚、气虚、 阳虚及痰浊、淤血、热毒等角度对糖尿病、高脂血症 的治疗进行研究。课题组检索1 9 9 4 2 0 0 2 年糖尿 ( 下转8 6 9 页) 万方数据 新疆医科大学学报J O U R N A LO FX I N J I A N GM E D I C A LU N I V E R S I T Y2 0 0 9J u l ，3 2 ( 7 ) 8 6 9 G a l e c t i n 一3 在良性结节中很少表达，在全部乳头状 癌和大部分滤泡癌中表达，而在滤泡腺瘤中则很少 表达，他门认为G a l e c t i n 一3 是一个可靠的、易于滤泡 腺瘤鉴别的生物学指标。本实验结果显示，G a l e c t i n 一3 在P T C 与F T C 中的阳性表达率与肿瘤旁甲 状腺组织及滤泡腺瘤相比具有显著性差异( P 0 0 0 1 ) ，这与国内外的研究报道相一致。但是，G a l e c t i n 3 在P T C 与F T C 中的不同表达形式，既在 P T C 呈弥漫性分布，而在F T C 则呈局灶性分布是 本实验获得的特征性结果之一。另外，实验结果显 示G a l e e t i n 一3 在U D C 的未分化部位呈阴性表达，而 在分化部位则呈阳性表达，提示甲状腺未分化癌与 甲状腺分化癌为同源性肿瘤。G a l e c t i n 一3 在F A 阳 性例( 卵= 3 ) 呈局部性分布表达提示具有潜在恶性。 陈宁等 7 对P T C 病人进行研究发现，C D 4 4 v 6 与P T C 的淋巴结转移有关，可作为P T C 病人预后 和转移的生物学指标。王化修等【8 1 研究显示，甲状 腺癌中C D 4 4 v 6 表达明显高于正常甲状腺组织，与 国内外的研究报道相一致。本实验结果显示， C D 4 4 v 6 在P T C 与F T C 中的阳性表达率与肿瘤旁 甲状腺组织及滤泡腺瘤相比具有显著性差异( P 0 0 0 1 ) 。本组C D 4 4 v 6 在P T C 与F T C 中也显示不 同的表达形式既在P T C 多呈局灶性分布，而在 F T C 则多呈局部性分布，C D 4 4 v 6 表达形式与G a - l e c t i n 一3 在P T C 与F T C 中的表达形式相反。另外， 实验结果显示，C D 4 4 v 6 与G a l e c t i n - 3 相同，在F A 阳性例( 挖= 3 ) 呈局部性分布；C D 4 4 v 6 在U D C 未 分化部位的表达也与G a l e c t i n - 3 相同。 甲状腺滤泡上皮肿瘤联合检测的结果显示， G a l e c t i n 一3 与C D 4 4 v 6 在P T C 中共同阳性例数2 7 例，表达的正相关性为2 7 3 0 ( 9 0 ) ，两者之间有相 关性( r = 0 6 9 ，P 0 0 5 ) 。G a l e c t i n - 3 与C D 4 4 v 6 在F T C 共同阳性例数9 例，表达的正相关性为9 1 1 ( 8 1 8 1 ) ，两者之间有相关性( ，一0 6 3 ，P 0 0 5 ) 。需要指出的是，G a l e c t i n - 3 、C D 4 4 v 6 在P T C 与F T C 中的表达形式恰恰相反。 本实验运用免疫组织化学法研究探讨G a l e c t i n 一3 、C D 4 4 v 6 在滤泡上皮起源的甲状腺肿瘤中表 达的异同性及表达分布特性，从而试解释生物学特 性及肿瘤相互间的关系。结果提示，G a l e c t i n 一3 、 C D 4 4 v 6 在P T C 与F T C 表达都具有特异性，联合检 测G a l e c t i n 一3 、C D 4 4 v 6 可能是滤泡上皮起源甲状腺 肿瘤病理鉴别诊断及临床预后的重要生物学标记 物。G a l e c t i n 一3 、C D 4 4 v 6 在P T C 与F T C 表达分布 特性显示P T C 与F T C 存在有关联性可能。 参考文献： 1 田丰秋。冯晓海甲状腺乳头状癌的诊断及转移相关的免疫组 化研究 J 中华肿瘤防治杂志，2 0 0 7 ，1 4 ( 1 3 ) ：7 8 9 2 肖红，段绍斌，张建勇。等甲状腺组织中g a l e c t i n 一3 、C K l 9 的 表达及应用价值 J 新疆医科大学学报，2 0 0 6 ，2 9 ( I I ) ：9 5 一 1 0 1 3 桌明英，扬军甲状腺乳头状癌中C D 4 4 v 6 和P 5 3 的表达及 其意义 J 实用肿瘤学杂志，2 0 0 7 ，2 1 ( 3 ) ：2 5 3 4 尼加提·热合木，居来提·吐尔荪。阿布都卡的·依马木，等 滤泡上皮起源甲状腺腺癌特异性生物标记物研究进展 J 新 疆医科大学学报。2 0 0 7 ，3 0 ( 4 ) ：4 2 0 4 2 3 5 徐莹甲状腺肿瘤G a | e c t i n - 3 表达及其意义 J 复旦大学学 报2 0 0 2 。2 9 ( 3 ) ：2 3 0 2 3 2 6 王丽华赵咏桔G a l e c t i n 一3 、C D 4 4 v 6 在甲状腺结节型中的的表 达及其意义 J 中华肿瘤杂志，2 0 0 5 ，2 7 ( 9 ) ：5 4 7 7 王化修伍石华，蒙松年，等存活素和C D 4 4 v 6 在甲状腺癌组 织中的表达及意义 J 1 实用癌症杂志，2 0 0 6 。2 1 ( 6 ) ：8 8 5 8 陈宁，粱青春甲状腺乳头状癌淋巴管密度与C D 4 4 v 6 表达 及其意义 J 实用预防医学，2 0 0 7 ，1 4 ( 3 ) ：1 8 8 收稿日期：2 0 0 9 0 2 1 6 ( 上接8 6 6 页) 病、高脂血症治疗的有关文献，发现气阴两虚型的比 例为最高。而治疗此型不仅要补气养阴，还需要与 补气活血、补气解毒、养阴活血、养阴解毒相结合，才 能提高临床疗效。 综上所述，在本试验条件下，三黄消渴片能降低 S T Z 造模糖尿病大鼠的血糖、血脂和糖化血红蛋白 量，能控制因糖尿病引发的血管及神经末梢病变，增 加体重，等。 参考文献： 1 杨明功糖尿病流行现状及防治对策口 疾病控制杂志，2 0 0 0 ， 4 9 ( 3 ) ：1 9 3 - 1 9 6 2 洪丽莉，许冠苏，申国明，等S D 大鼠2 型糖尿病模型的建立 J 实验动物科学与管理2 0 0 5 ，2 2 ( 4 ) ：卜3 3 曹莉，顾振纶，茅彩萍葛根素对糖尿病小鼠胰岛素抵抗的影 响 J 中草药，2 0 0 6 ，3 7 ( 6 ) ：9 0 1 9 0 4 4 B a i l i e sB K D i a b e t e sm e l l i t u sa n di t sc h r o n i cc o m p l i c a t i o n s J A O R NJ ，2 0 0 2 ，7 6 ( 2 ) ：2 6 6 2 7 6 5 R a oG D i a g n o s t i cy i e l do fs c r e e n i n gf o rt y p e2d i a b e t e si n h i g h r i s kp a t i e n t s ：as y s t e m a t i cr e v i e w J JF a r oP r a c t ，1 9 9 9 ， 4 8 ( 1 0 ) ：8 0 5 8 1 0 6 R e u s e hI E C u r r e n tc o n c e p t si ni n s u l i nr e s i s t a n c e 。t y p e2 d i a b e t e sm e m t u s a n dt h em e t a b o f i cs y n d r o m e J A mJC a r d i o l ， 2 0 0 2 ，9 0 ( 5 A ) ：1 9 - 2 6 7 杨艳。郑志国，吉民，等吲哚里西啶和喹诺里西啶生物碱 的来源及药理作用 J 药学进展2 0 0 1 ，2 5 ( 3 ) ：1 5 2 1 5 5 8 曾 艳，贾正平，张汝学，等地黄寡糖在2 型糖尿病大鼠模型 上的降血糖作用及机制 J 中国药理学通报，2 0 0 6 ，2 2 ( 4 ) ： 4 1 1 - 4 1 5 9 高莹，肖颖山楂及山楂黄铜提取物调节大鼠血脂的效果 研究口 中国食品卫生杂志，2 0 0 2 。1 4 ( 3 ) ：1 4 - 1 6 收稿日期：2 0 0 8 - 0 7 一0 4 万方数据