东北雷公藤对肾炎大鼠血清中MMP-2、MMP-9和TGF-β1的影响.pdf
第 3 1 卷第 1 期 2 0 0 5 年 1 月 吉林大学学报(医学版 ) J o u r n a l o f J i l i n U n i v e r s i t y ( Me d i c i n e E d i t i o n ) Vo l . 3 1 No . 1 5 8J a n . 2 0 0 5 文章编号 1 6 7 1 - 5 8 7 X ( 2 0 0 5 ) 0 1 - 0 0 5 8 - 0 3 东北雷公藤对肾炎大鼠血清中MMP - 2 , MMP - 9 和T G F - 0 1 的影响 罗萍 ，顾华 ，卢雪红 ，苗里宁 ，王丽华2 ，张向领3 ，杨洁 ( 1 . 吉林大学第二医院肾内科，吉林 长春 1 3 0 0 4 1 ; 2 . 吉林大学基础医学院 生物化学教研室，吉林 长春1 3 0 0 2 1 ; 3 . 解放军第2 0 8 医院骨科，吉林 长春1 3 0 0 6 2 ) 摘要目的: 通过观察东北雷公藤对肾炎大鼠尿蛋白 及血中T G F - 几 、 MMP - 2 和MMP - 9 的影响， 研究其在 肾炎大鼠中的作用。方法: 用E L I S A方法检测大鼠血清中MMP - 2 , MMP - 9 和T G F - (3 , . 结果: 经东北雷公藤治 疗后肾炎大鼠 尿蛋白 ( 1 7 0 . 3 8 士3 2 . 6 2 ) m g / 2 4 h 明显低于治疗前 ( 3 2 7 . 3 8 士4 8 . 6 7 ) m g / 2 4 h , P 0 . 0 5 ) . C o n c l u s io n T r i p t e r i u m R e g e l i i m a y h a v e t h e e f f e c t o f p o s t p o n i n g g l o m e r u l o s c l e r o s i s i n r a t s . K e y w o r d s ; T r i p t e r y g i u m w i l f o r d i i / im m u n o l o g y ; d i s e a s e m o d e l s , a n i m a l ; g e l a i n a s e A / b l o o d ; g e l a t i n a s e B / b l o o d ; r e c e p t o r s , t r a n s f o r m i n g g r o w t h f a c t o r b e t a / b l o o d 肾小球疾病是一种免疫介导损伤性疾病，目 前 尚缺乏有效的治疗方法，且往往疾病迁延不愈，进 行性发展， 导致肾小球硬化。 有人认为川 细胞外基质 ( e x t r a c e l l u l a r m a t r i x , E C M) 合成与降解失衡是导 收稿日 期2 0 0 3 - 1 2 - 2 2 基金项目 吉林省科技厅资助课题 ( 9 9 0 5 7 0 ) 仁 作者简介罗萍 ( 1 9 6 3 -) ，女，吉林省长春市人，副教授，在读医学博士，主要从事肾小球疾病临床与病理研究。 万方数据 罗萍， 等. 东北雷公藤对肾炎大鼠血清中M MP - 2 , M M P - 9 和T G F - 几的影响 致肾小球硬化的主要原因。东北雷公藤 ( 又名黑 蔓)是卫矛科雷公藤属植物，遍布于我省长白山地 区，与雷公藤属同属植物，但其所含成分却不完全 一致。 有关东北雷公藤的 研究资料甚少 2 ,3 。 本研究 通过东北雷公藤对肾炎大鼠尿蛋白及血中转化生长 因子- R , ( T G F - 月 ， ) 、 基质金属蛋白酶2 ( MMP - 2 ) 、 基 质金属蛋白酶 9 ( MMP - 9 )的影响，进一步研究东 北雷公藤在治疗肾炎中的作用。 1 . 4 MMP - 2 , MMP - 9 和T G F - (3 , 检测E L I S A方 法定量检测大鼠MMP - 2 , MMP - 9 , T G F - R , ， 试剂 盒购自上海森雄科技有限公司。 2 结果 1 材料与方法 2 . 1 尿蛋白含量变化测定结果经东北雷公藤治 疗的肾炎大鼠尿蛋白与模型治疗组比较明显降低 ( P 0 . 0 5 ) ，见表 1 , 1 . 1 东北雷公藤的成分提取东北雷公藤粗粉用 7 0 %乙醇浸泡 ( 乙醇液面需高出东北雷公藤平面 1 0 c m) 2 4 h 后，收集乙醇浸出液， 经蒸馏浓缩，回 收浓缩液静置，过滤，弃去沉淀物。滤液加人等量 石油醚充分摇匀，混均后装人分液漏斗静置，分层 后弃去石油醚萃取液，保留水层。水层用同样方法 再经石油醚萃取2 次。同理水层依次用氯仿、乙酸 乙醋、正丁醇各萃取 3 次，最后所得水层经蒸馏浓 缩，即为东北雷公藤昔类。 1 . 2 肾炎 模型建立 参照鲁斌等 4 阿霉素肾病模 型的制做方法。大鼠尾静脉注射阿霉素，分 3 次给 药， 第1 次按阿霉素4 m g· k g - ， 给药， 第7 天后按 3 . 5 m g · k g - ， 给药， 第1 4 天后再按3 . 5 m g · k g - ' 给药，第 2 1 天后留取尿液，查 2 4 h尿蛋白定量。 1 . 3 动物分组将 4 5 只大鼠随机均分为 3 组: 正 常对照组、模型对照组 ( 按上述方法制作模型成功 后，未给予任何药物治疗)和模型治疗组 ( 肾炎模 型制 作 成 功 后，每 日给予 东 北 雷 公 藤 昔 液 0 . 7 5 m L ，相当于东北雷公藤生药 1 1 . 2 5 g “ k g - ' , 连续灌胃2 8 d 后，留取 2 4 h尿液及血样) 。 T a b . 1 T h e c h a n g e s o f u r i n e p r o t e i n i n r a t s ( n 二 1 5 , 牙 士 s , m g / 2 4 h ) Gr o u p Ur i n e p r o t e i n No r ma l c o n t r o l Mo d e l c o n t r o l Mo d e l t r e a t me n t P r e - t r e a t me n t 9 . 6 9 士1 . 3 4 3 3 8 . 8 6 士4 3 . 7 2 3 2 7 . 3 8 士4 8 . 6 7 P o s t - t r e a t me n t 9 . 7 3 士 1 . 5 9 3 6 7 . 6 7 士8 6 . 3 2 1 7 0 . 3 8 士3 2 . 6 2 * P 0 . 0 5 ) 。 模型对照组大鼠血清中T G F - p ; 表达明显增 强 ( P 0 . 0 1 ) ， 而经东北雷公藤治疗后血清T G F - 民 低于模型对照组 ( P 0 . 0 5 ) ，见表 2 0 T a b . 2 T h e c h a n g e s o f s e r u m MMP - 2 , MMP - 9 , a n d T G F - R 1 i n r a t s ( n =1 5 , x士s ) Gr o u p M M P- 2M M P- 9T G F - P I (Ps/.g· L - 1 ) 4 1 2 . 5 0 士8 0 . 3 2 2 4 0 . 6 3 士3 8 . 3 4 ' 3 8 2 . 2 6 士4 0 . 3 8 ( P e / !+ g · L - 1 ) N o r ma l c o n t r o l Mo d e l c o n t r o l Mo d e l t r e a t me n t 5 1 2 . 1 0 士1 几 2 . 4 2 2 3 4 . 3 5 士8 1 . 4 7 . 2 5 6 . 7 5 士9 1 . 4 8 ' ( P e / n g· L - 1 ) 1 8 7 . 5 0 士3 0 . 2 6 2 8 7 . 6 0 士4 3 . 3 7 ' 2 1 0 . 6 7 土3 9 . 3 6 0 * P 0 . 0 1 c o m p a r e d w i t h n o r m a l c o n t r o l g r o u p ; 0 P 0 . 0 1 c o m p a r e d w i t h m o d e l c o n t r o l g r o u p 3 讨论 各种肾小球疾病进行性发展，最终将导致肾小 球硬化，发生肾功能衰竭。肾小球疾病发病初期免 疫介导损伤起着主要作用，之后出现肾小球 E C M 不断积聚， E C M过度积聚的结果使肾小球正常结构 消失， 引起肾小球硬化 5 1 。 正常情况下E C M生成与 降解处于动态平衡， E C M合成与降解的失衡是引起 肾小球E C M积聚并导致肾小球硬化的重要机制， 当各种损伤因子和有害成分，如高糖、细胞因子出 现时或发生改变时，平衡被打破，系膜细胞的形态 和功能发生改变， 某些细胞因子和E C M 分泌增多。 万方数据 吉林大学学报 ( 医学版)第 3 1 卷第 1 期2 0 0 5 年 1 月 纤溶酶原激活物 ( p l a s m i n o g e n a c t i v a t o r , P A ) / 纤 溶酶系统属于丝氨酸蛋白酶系统， 是E C M重要的 降解系统之一。 金属蛋白酶是调控肾脏E C M代谢 的另一重要降解系统， 包括明胶酶、 间质胶原酶、 基 质溶素、 弹力蛋白 酶以 及分泌型和膜型M MP 等， 可 以协同地降解多种E C M。 正常肾小球E C M 主要位 于肾小球毛细血管拌基膜和系膜区，含有比较丰富 的N型胶原， 而MMP - 2 , MMP - 9 对N型胶原的降 解起重要作用，因此其表达的异常，致N型胶原合 成和降解失衡，可造成 E C M积聚，导致肾小球硬 化。 T G F - 几是导致E C M积聚的重要生长因子， 并 且与组织硬化密切相关I “ , T G F - p ， 既可通过上调 P A I - 1 的表达， 使其与P A相结合， 减少或抑制纤溶 酶生成， 也可下调基质金属蛋白酶 ( MMP s ) 的表达 及其活性， 干扰肾小球内E C M 的降解过程， 加剧了 肾小球纤维化过程。 因此， 寻找一种调节E C M降解 酶系的药物，干预细胞外某些细胞因子的表达，为 治疗或防止肾小球疾病进展起重要作用。鲁斌等闭 报道，阿霉素制作的急性肾病模型类似于人类微小 病变表现，而慢性肾病模型类似于人类慢性肾炎或 局灶节段性肾小球硬化。本研究以肾炎大鼠为研究 对象，采用多次小剂量阿霉素尾静脉注射诱导大鼠 慢性肾炎模型，研究结果表明，经东北雷公藤治疗 后的肾炎大鼠 尿蛋白 含量明显下降 ( P 0 . 0 1 ) ， 同 时提高肾炎大鼠血清中MMP - 2 水平，并可减少 T G F - 几在血液中的表达， 从而减少E C M积聚， 延 缓肾小球硬化，对保护肾脏肾功能将会起到一定作 用 。 参考文献 1 林洪志， 于志恒， 陈香美. 金属蛋白酶组织抑制剂- 1 基因转染 对系膜细胞表达纤连蛋白和N型胶原的影响 J . 中华肾脏病 杂志，2 0 0 2 , 1 8 ( 3 ) : 1 6 6 - 1 7 0 . 2 田建明， 叶金梅， 朱宇明. 东北雷公藤抗炎作用研究 J . 中 成药， 1 9 9 9 , 2 1 ( 1 1 ) : 5 8 4 - 5 8 6 . 3 罗萍， 李艳辉， 顾华， 等. 东北雷公藤对肾小球肾炎治疗 作用的实验研究 J . 吉林大学学报: 医 学版， 2 0 0 3 , 2 9 ( 5 ) : 6 0 6 - 6 0 7 . 4 鲁斌，李新民，马融 . 对改良的阿毒素肾病模型的 评价 J . 实验动物科学与管理，1 9 9 9 , 1 6 ( 3 ) . 5 - 7 . 5 B e r g u k E C , H e e r E D , H o e d i m a e k e r P J , e t a l . A r e a p p r a is a l o f i m m u n e m e d i a t e d g l o m e r u l o s c l e r o s i s J . K i d I n t , 1 9 9 6 , 4 9 : 6 0 6 - 6 1 2 . 6 L a i K N , T a n g S C , G u h J Y . e t a l . P o l y m e r i c 1 g A 1 f r o m p a t i e n t s w i t h I g A n e p h r o p a t h y u p r e g u l a t e s t r a n s f o r m i n g g r o w t h f a c t o r - b e t a s y n t h e s i s a n d s i g n a l t r a n s d u c t io n i n h u m a n m e s a n g i a l c e l l s v i a t h e e n i n - a n g i o t e n s i n s y s t e m J . A m S o c N e p h r o l , 2 0 0 3 , 1 4 ( 1 2 ) :3 1 2 7 - 3 1 3 7 . 米非司酮治疗子宫肌瘤6 8 例临床分析 武警吉林省总队医院药局张洒亮，于虹 1 临床资料 1 . 1 一般资料研究对象为2 0 0 1 年 5 月一2 0 0 3 年 5 月本院门诊经盆腔及B超检查证实为子宫肌瘤患者 6 8 例，年龄 2 9 - 4 9 岁， 平均为4 1 岁。浆膜下肌瘤6 例，壁间肌瘤4 8 例，翁膜下肌瘤4 例，混合性肌瘤 1 0 例。 1 . 2 用药方法及疗程自月经第 1 -3 天开始应用米非司酮2 5 m g ，每日1 次睡前服用，连续服用 3 个月为 1 个疗程。 1 . 3 观察方法观察临床症状和体征， 同时采用麦迪逊S O N O A C E 5 0 0 0 型超声波仪测定子宫三维径线、 肌瘤的个数、 大小 及位置， 并常规检查肝、 肾功能， 正常者每天晚上口 服2 5 m g 米非司酮， 疗程结束后均采用B 超阴道探查方式复查肌瘤变化， 肌瘤消失者停药，肌瘤缩小者停药 1 个月，转经后再服第二个疗程。 1 . 4 疗效判定标准有效: 肌瘤消失。 使用1 -2 个疗程后， 经阴道B超复查， 子宫体大小正常， 未见肌瘤; 肌瘤明显 缩小。服药 2 个疗程后，经阴道B超复查，肌瘤为服药前的1 / 2 。无效:肌瘤大小无变化。 1 . 5 结果6 8 例患者使用米非司酮后均在服药的第 2 个月停经，2 个疗程后B超复查: 浆膜下肌瘤6 例，消失2 例，明 显缩小 3 例， 无效 1 例; 私膜下肌瘤4 例， 明显缩小 1 例， 无效3 例; 壁间肌瘤4 8 例， 消失2 3 例， 明显缩小 2 0 例， 无效5 例; 混合性肌瘤 1 0 例，消失 1 例，明显缩小4 例，无效 5 例。 2 讨论 米非司酮用于治疗子宫肌瘤， 国内外虽报道较少， 但均认为治疗效果肯定。 研究已证实， 子宫肌瘤的发生、 发展与雌激 素受体、 孕激素受体有关。 孕激素在子宫肌瘤的发生、 发展中有可能起协同作用， 肌瘤组织中性激素含量显著高于同一子宫 正常组织， 为米非司酮治疗子宫肌瘤提供了理论根据。 米非司酮治疗子宫肌瘤的疗效较为满意， 不同种类及体积的肌瘤对米 非司酮的敏感性不同. 本组资料显示， 治疗效果最理想的是壁间肌瘤， 其次是浆膜肌瘤， 最差的是猫膜下肌瘤， 但服药后均 能改善临床症状。综上所述，米非司酮治疗子宫肌瘤有一定效果，为子宫肌瘤患者提供了一条新的治疗途径. ( 邮编:吉林 长春 1 3 0 0 5 2 ) 万方数据
