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中药牛至单体体外抗解脲脲原体与人型支原体作用 严奉祥1， 朱炳阳1， 尹卫国2， 潭海平3， 迟秀玲1， 严宇桢3， 温曙光4， 李莲3， 颜涛1， 郭峰1， 吴移谋2 摘 要 目的 观察唇形科植物牛至 （满坡香） 单体抗解脲脲原体与人型支原体的作用， 揭示牛至单体更广的抗 病原微生物的范围， 寻找新的抗解脲脲原体与人型支原体药物。方法 采用直接液体培养基稀释方法， 测定中药牛至单 体对 60 株泌尿生殖道支原体的体外抗菌效应。结果 迷迭香酸的半数最低抑菌浓度为 1. 024 mg/ ml， 咖啡酸的半数最低 抑菌浓度为 0. 512 mg/ ml， 香荆芥酚的半数最低抑菌浓度为 0. 512 mg/ ml， 百里香酚的半数最低抑菌浓度为 0. 512 mg/ ml。 结论 中药牛至单体具有较强抗血清型解脲脲原体或人型支原体的作用。 关键词 解脲脲原体； 人型支原体； 牛至单体；半数最低抑菌浓度 中图分类号 R 375； R 285. 5 文献标识码 A 文章编号 1001 -7089 （2006） 02 -0068 -03 Effect of Oregano Monomers against Ureaplasma Urealyticum and Mycoplasma Hominis in Vitro YAN Feng-xiang， ZHU Bing-yang， YIN Wei-guo， et al （Institute of Pharmacy and Pharmacology， University of Nanhua， Hengyang 421001， China） Abstract： Objective To determine the antibacterial effect of four monomers（rosmarinic acid， caffeic acid， cavacrol and thymol）extracted from Origanum vulgare L. herb（oregano）on Ureaplasma urealytium（UU）and mycoplasma hominis（MH） ， to discover oregano monomer wider extension against pathogeny microorganism and to find new drug against ureaplasma urealytium and mycoplasma hominis. Methods The MIC range and MIC50of four Oregano monomers against 30 strains of Uu and 30 strains of Mh from patient genitourinary tract were determined using direct liquid culture medium dilution method. Results The MIC50of rosma- rinic acid， caffeic acid， cavacrol and thymol anti MU or Mh was 1. 024 mg/ ml， 0. 512 mg/ ml， 0. 512 mg/ ml and 0. 512 mg/ ml re- spectively. Conclusion The oregano monomers have all stronger anti - mycoplasma effect on arbitrary serotype of MU or Mh. Key words： Ureaplasma urealytium； Mycoplasma Hominis； Oregano Monomers； MIC50 泌尿生殖道支原体感染是非淋菌性尿道炎 （NGU） 的重要病因。近年来， 泌尿生殖道支原体所致 感染受到普遍重视。但随着抗生素和人工合成抗菌药 物的不断开发和使用及其滥用， 致使泌尿生殖道支原 体耐药性也不断变化。与此同时， 中草药受到越来越 重视， 为此， 笔者从中药牛至 （满坡香） 中筛选出四种 单体药物， 采用直接液体培养基倍比稀释法检测其对 支原体的抗菌作用， 为临床上治疗泌尿生殖道支原体 感染筛选新药提供参考。 1 材料和方法 1. 1 培养基 解脲脲原体液体培养基按照文献 1方 法配制。1: 1 牛心消化液、 10% 新鲜酵母液、 20% 新 生小牛血清、 0. 002%酚红、 青霉素 20 000 U/ L。解脲 基金项目 湖南省卫生厅基金资助项目 （204062） 、 湖南省教育厅 重点基金资助项目 （03A040） 、 国家教育部重点基金资助项目 （204095） 、 国家 “十五” 攻关项目 （02EFN214300457） 作者单位 1 南华大学药物药理研究所， 湖南 衡阳 421001； 2 南 华大学病原微生物研究所， 湖南 衡阳 421001； 3 南华大学， 湖南 衡 阳 421001； 4 山东农业大学， 山东 泰安 271018 作者简介 严奉祥 （1952 - ） ， 男， 湖南省岳阳市人， 教授， 研究生 导师， 留美学者， 从事分子药理学和药物开发工作。 通讯作者 吴移谋， E-mail： yimouwu sina. com 脲原体培养基加 0. 1% 尿素， pH 调至 6. 0。人型支原 体培养基加 0. 1%精氨酸， pH 调至 6. 5 2。 1. 2 支原体株 30 株解脲脲原体 （UU） 和 30 株人型 支原体 （MH） 临床株为泌尿生殖道感染患者标本中分 离获得， 经菌落形态、 底物分解、 pH 值、 生长速度初步 鉴定 1， 液体传代3 次后， -70短期保存备用。实验 菌液： 保存的备用菌液， 室温下融化， 用解脲脲原体液 体培养基或人型支原体液体培养基按 1: 100 稀释， 37培养 24 48 h 后达 106颜色变化单位 （Color changing unit， CCU） /0. 1ml 作为接种物 2。 1. 3 抗菌药物 迷迭香酸 （Rosmarinic acid） 、 咖啡酸 （Caffeic acid） 、 香荆芥酚 （Cavacrol） 、 百里香酚 （Thy- mol） 均为本所与中国昆明植物研究所和中科院上海有 机所合作按文献 3， 4提取的四个牛至单体， 其纯度均 达 97%以上。迷迭香酸、 咖啡酸、 百里香酚分别用解 脲脲原体培养基和人型支原体培养基溶解， 配成4 096 µg/ ml 浓度的母液作为应用液； 香荆芥酚用不到 1% 二甲基亚砜溶解（预实验用 1% 二甲基亚砜， 没有发 现有抗解脲脲原体与人型支原体的作用） ， 后用解脲 脲原体培养基和人型支原体培养基稀释， 应用母液浓 度为 4 096 µg/ ml。将应用母液 pH 调至各自培养基 ·86·中国皮肤性病学杂志 2006 年 2 月第 20 卷第 2 期 Chin J Derm Venereol， Feb. 2006， Vol. 20， No. 2 pH 一致。 1. 4 实验方法 采用液体培养基稀释法 5。 1. 4. 1 加培养基 在 96 孔 （8 × 12） 聚苯乙烯板上， 用微量加样器向每一孔内均加入 100 µl 培养基。 1. 4. 2 加药物 往第一孔内加入配制好的应用药液 100 µl， 充分混匀后取 100 µl 加入第二孔， 再吹打混匀 吸出 100 µl 加入第三孔， 依次类推， 直至第十一孔， 充 分混匀后， 弃去 100 µl。由此将药液倍比稀释至2 048 1 µg/ ml。第十二孔不加药物作为对照。 1. 4. 3 加菌液 用支原体培养基按 1: 100 稀释 UU 与 MH 培养物， 混匀取 100 µl 加入每一个孔内。将加 好的 96 孔板盖上板盖， 轻摇混匀， 置于湿盒内， 37培 养箱孵育。 1.4. 4 结果观察 根据培养基颜色变化判断结果： 培 养基由黄色变为红色表明有支原体生长。24 h 内观 察 UU 生长变化， 如加药孔出现与对照孔相同的颜色 变化， 表示所加药物的对应浓度对 UU 无抑制作用， 24 h 仍不出现颜色变化为有效抑制 UU 生长的药物浓 度； 24 48 h 内观察 MH 生长变化， 如加药孔出现与对 照孔相同的颜色变化， 表示所加药物的对应浓度对 MH 无抑制作用， 48 h 仍不出现颜色变化为有效抑制 MH 生长的药物浓度。加药组以不出现颜色变化的最 小浓度为最小有效抑制支原体生长的药物浓度 （MIC） 。实验采用 UU1， UU2， UU3， UU4 和 MH 标准 株作参照。 2 结果 2. 1 四个中药牛至单体的结构 见图 1。迷迭香酸、 咖啡酸、 香荆芥酚、 百里香酚分子量分别为 150. 22， 150. 22， 360. 31 和 180. 20。 迷迭香酸 （Rosmirinic acid） 咖啡酸 （Caffeic acid） 香荆芥酚 （Cavacrol） 百里香酚 （Thymol） 图 1 四个牛至单体的化学结构 2. 2 抗支原体效位 实验结果表明， 迷迭香酸、 咖啡 酸、 香荆芥酚、 百里香酚对解脲脲原体的 MIC50分别为 1. 024 mg/ ml， 0. 512 mg/ ml， 0. 512 mg/ ml， 0. 512 mg/ ml； 对人型支原体的MIC50分别为1 . 024 mg / ml ， 0. 512 mg/ ml， 0. 512 mg/ ml， 0. 512 mg/ ml。四个牛至 单体抗菌药物体外抗 UU 与 MH 作用测定结果见表1。 表 1 四种牛至单体体外抗 UU 与 MH 抗菌作用 支原体抗菌药MIC 范围（mg/ ml） MIC50（mg/ ml） UU （30 strains） 迷迭香酸0. 512 2. 0481. 024 咖啡酸 0. 256 1. 0240. 512 百里香酚0. 512 1. 0240. 512 香荆芥酚0. 256 1. 0240. 512 MH （30 strains） 迷迭香酸1. 024 2. 0481. 024 咖啡酸 0. 512 1. 0240. 512 百里香酚0. 512 2. 0480. 512 香荆芥酚0. 256 1. 0240. 512 3 讨论 随着国内非淋菌性尿道炎 （NGU） 发病率的明显 增高， 其防治已成为临床关注的问题。文献资料表明， 20. 0% 45. 6% NGU 和 20% 30% 的慢性前列腺炎 是由泌尿生殖系统支原体感染所致， 20% 35% 的淋 病合并有泌尿生殖系统支原体感染 6。支原体所致 NGU， 如治疗不彻底， 可导致反复发作， 男性可并发慢 性前列腺炎、 附睾炎、 男性不育； 女性可并发阴道炎、 宫 颈炎与输卵管炎等等生殖道感染 6， 甚至引起许多妇 科疾病， 包括最常见的子宫肌瘤 7， 危害人的身心健 康甚至生命。还能增加不孕症、 异位妊娠、 盆腔炎、 流 产、 早产、 死产的发生率； 影响新生婴儿的素质和下一 代的健康。因此， 合理选用抗支原体的药物， 是控制 NGU， 防治并发症的关键。 中药满坡香， 植物文献多称为牛至 （Origanum vul- gare L. ） ， 与西药抗菌药形成了鲜明的对照。笔者利 用四个牛至单体体外抗支原体实验发现： 四个牛至单 体药物对支原体均有抑菌作用， 对 UU 和 MH 没有差 异。但按 mg/ ml 来计算四个牛至单体的 MIC 和 MIC50 的值来看， 迷迭香酸的抗支原体效应最弱， 而百里香 酚、 香荆芥酚和咖啡酸抗 UU 和 MH 的效应完全相等 并强于迷迭香酸。实际上， 药物的作用是分子间相互 作用， 所以按分子浓度进行比较更为合理。从图 1 可 知， 百里香酚和香荆芥酚是同分异构体， 其分子量相 ·96·中国皮肤性病学杂志 2006 年 2 月第 20 卷第 2 期 Chin J Derm Venereol， Feb. 2006， Vol. 20， No. 2 等； 迷迭香酸是咖啡酸和二羟苯乳酸缩合形成的酯， 其 分子量是咖啡酸的两倍， 是百里香酚和香荆芥酚的 2. 39 倍。因此， 按 mmol/ L 来计算四个牛至单体的 MIC 和 MIC50的值则基本上相等， 而迷迭香酸的作用 稍强。这四种单体和已报道的黄连、 黄柏、 金银花、 柴 胡、 黄芩等 8中草药相比， 其抑菌作用都要强几倍。 这四种单体除广泛报道抗革兰阳性和阴性菌外， 牛至 及其单体均有抗霉菌作用 9， 长期应用不但不会导致 霉菌感染， 并对支原体伴随或并发霉菌感染也有效。 由于牛至是中药，其单体化学结构为多酚， 与大环内 酯类、 四环素类、 氯霉素类和喹诺酮类抗菌药化学结构 完全不同， 其作用机理主要是通过对细菌细胞壁结构 蛋白的变性和凝固来实现的， 目前尚未发现耐药性。 牛至在中国作为中药， 北美一些国家作为食品调味品 长期使用未发现任何毒副反应。在笔者的一些牛至专 利产品的慢性毒性实验中也无任何毒副反应。牛至有 效提取物挥发油和某些单体， 还具有抗疱疹病毒和艾 滋病毒 10、 抗肿瘤11、 抗氧化以及抗炎性反应的作 用 10。这些作用都十分有利于治疗泌尿生殖系支原 体感染及其一系列的并发症， 提高满意终点和远期疗 效， 是西药抗菌药望尘莫及的。 总之， 笔者第一次发现四种牛至单体体外抗支原 体作用， 并且具有一些独特的特点， 对临床用药提供新 的思路和线索。 参 考 文 献 1吴移谋， 余敏君， 宋颖， 等. 泌尿生殖道支原体感染的实验室诊断研 究 J . 中华医学检验杂志， 1991， 14 （3） ： 157 -159. 2吴移谋， 尹卫国， 余敏君， 等. 六种抗菌药物体外抗解脲脲原体与人 型支原体的抗菌作用 J . 中华皮肤科杂志， 1994， 27 （3） ： 134 - 135. 3Kobayashi S， Watanabe J， Fukushi E， et al. Polyphenols from some food- stuffs as inhibitors of ovalbumin permeation through Caco-2 cell mono- layers J . Biosci Biotechnol Biochem， 2003， 67 （6） ： 1250 -1257. 4Exarchou V， Godejohann M， van Beek TA， et al. LC-UV-solid-phase ex- traction-NMR-MS compounds with a cryogenic flow probe and its appli- cation to the identificaion of componnds present in Greek oregano J . Anal Chem， 2003， 75 （22） ： 6288 -6294. 5Waites KB， Duffy L B， Schmid T， et al. In vitro susceptibilities of Myco- plasma pneumoniae， Mycoplasma hominis， and Ureaplasma urealyticum to sparfloxacin and PD 127391 J . Antimicrob Agents Chemother， 1991， 35 （6） ： 1181 -1185. 6Lefevre JC， Lepargneur JP， Bauriaud R， et al. Clinic and microbiologic features of urethritis in men in Toulouse J ， France. Sex Transm Dis， 1991， 18 （2） ： 76 -79. 7Guijon F， Paraskevas M， Rand F， et al. Vaginal microbial flora as a co- factor in the pathogenesis of uterine cervical intraepithelial neoplasia J . 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Carcinogenesis， 2004， 25 （4） ： 549 -557. 收稿日期 2005-09-19 修回日期 2005-11-24 幼女淋菌性阴道炎 3 例 张学杰1， 梁晶1， 陈东梅2 1 临床资料 3 例患儿年龄分别为 8 岁， 6 岁， 5 岁， 病程分别 为 2 月余， 10 天， 10 天。其病史主要由母亲提供， 前两例患儿 均有到公共游泳池游泳史， 后者其父曾患淋菌性尿道炎。检 查： 均有阴道口潮红、 阴道出现脓性分泌物表现， 量逐渐增多、 色黄绿、 有异味， 2 例伴外阴瘙痒， 1 例有尿频、 尿急、 尿痛等尿 路刺激症状， 均无畏寒发热。阴道分泌物均检出革兰阴性双球 菌， 阴道分泌物淋球菌培养， 菌落形态典型， 氧化酶试验阳性， 经革蓝染色确认菌体为革兰阴性双球菌。 2 治疗方法及结果 确诊后均给予头孢三嗪 （1. 0 g/ d） 静滴， 同时第 1 例把头孢三嗪静滴液抽出少许用 12 号尿管小心插入 阴道后进行阴道冲洗， 后 2 例用 0. 9% 生理盐水同法冲洗阴道 后用15 ml 甲硝唑加15 ml 生理盐水冲洗阴道， 1 次/ d。疗程分 别为 14 天， 7 天， 7 天。同时， 注意对患儿衣裤进行隔离消毒， 经治疗后阴道分泌物明显减少， 外阴瘙痒及尿路刺激症均消 失， 用药后 3 天复查阴道分泌物涂片均未检出淋球菌， 1 周后复 查未查出淋球菌， 1 月后复查仍阴性。 3 讨论 淋病在成人大多数由性接触传播， 但幼女主要是通 过间接传染， 如接触淋病患者使用的便盆、 澡盆、 浴巾、 衣裤、 坐 便器等， 也可与患者同床睡眠或到公共游泳池游泳等而被感 染。幼女淋菌性阴道炎如不及时治疗或治疗不当， 可转为慢 性。所以应先对污染的衣裤和日用品单独消毒。同时治疗应 遵循及时、 足量、 规范用药的原则。本组 3 例均以头孢三嗪静 滴， 同时辅以局部冲洗， 均取得满意疗效。 中图分类号 R 759. 23 文献标识码 B 文章编号 1001 -7089 （2006） 02 -0070 -01 收稿日期 2005-09-14 修回日期 2005-11-14 作者单位 1 黑龙江省大庆市二医院泌尿科， 黑龙江 大庆 163461； 2 黑龙江省依兰县医院妇产科， 黑龙江 依兰 154800 ·07·中国皮肤性病学杂志 2006 年 2 月第 20 卷第 2 期 Chin J Derm Venereol， Feb. 2006， Vol. 20， No. 2