二硫化碳对血管内皮细胞的氧化损伤作用.pdf

浙江预防医学2 0 0 6 年第1 8 卷第1 2 期 Z h ej ia n g p re v M e d ， D e c e m b e : 2 0 06， v o l l s ， N 。)1 2 二硫化碳对血管内皮细胞的氧化损伤作用 陈绍兰 简乐 2 王等2 陈筒2 【 摘要】目 的 为了探讨二硫化碳 c 乓)致动脉粥样硬化 ( A S) 的毒作用机理方法体外培养人脐 静脉内 皮细胞 ( E C V304)用浓度。( 溶剂对照) 、 10、 1 00、1 姗 、1 仪 Kx 卜 m ol/L 的C 凡染毒， 共培养2 4h。 应用 倒置显微镜观察内皮细胞 ( E C) 损伤;鲁米诺依赖的化学发光法 ( LC L) 测定培养液过氧亚硝基阴离子 ( 0 N 0 0 一 )水平以观察细胞氧化损伤程度。结果镜下观察染毒 24h 后内皮细胞有不同程度的损伤，其中以 1 1洲 Xx 扣 m ollL C 乓染毒组最为严重， 并有明显细胞脱壁现象; 24 h 染毒培养液化学发光强度有随着c 乓浓度增高 而增强的趋势 ( F 二 34. 60， P 0 . 0 5 ) ， 但1 00 00“ m o F L C 乓组明 显高于其他各组 ( P 0 . 0 5 ) ， 见表 1 。发光峰值有随剂量增加逐渐上升的趋势， c 凡染毒剂量 ( x )与0 N 0 0 一 水平 ( Y )呈正相关 ( Y二 6 . 2 5 2 6 + 0 . 1 8 3 2 X ， r 二 0 . 9 9 8 ) 见图1 。 表1不同c S Z 浓度对培养液o N o O 一 水平 的影响 ( X土 S D ) 分组C SZ 恤m o l l L )份数 C o n t rol 0 l 0 1 oo 1 X X ) 1 仪众 化学发光峰值 ( c P 3s ) 6 3 7 0 2 . 1 7士1 2 1 . 6 2 6 3 9 4 3 . 6 64 上1 02 . 6 9 6 3 9 6 0 . 6 3士2 8 0 . 9 9 6 5 1 5 15 4土7 加 . 24 6 5 645 . 3 3土8 7 4 . 1 5 7 2 2 5 6 . 2 5士2 3 1 9 . 4 9 丢 E C 是单层连续的细胞，内皮损伤后其表面糖尊变薄， E C间隙扩大，内皮对低密度脂蛋白 ( L D L )的通透性增高， 动L 易通过胞浆进人内皮下，并被 E C及平滑肌细胞 ( S M C 夕 释放的超氧阴离子自由基 ( q一 )及其衍生自由基产物如 0 N 0 0 一 氧化，这些均为单核细胞的内膜迁人及脂质的内膜 下沉积提供了病理学基础(61。在粥样斑块发生形成的过程 中，某些局部机制非常活跃，其中就包括致 A S 的脂质和动 脉内皮间不良的相互作用，内皮的功能失调和炎性介质在 内 膜的积聚等 J 。 血管 E C 不仅是覆盖于血管内表面的屏障，而且是重要 的内分泌器官和效应器官，参与多种血管相关的生理和病 理过程。内皮损伤常常会诱发或加重心血管疾病特别是 A S 。E C在血管构建及动脉硬化中起着重要的作用，可通过 释放或激活一些活性物质来调节细胞生长、细胞凋亡，调 整细胞迁移和细胞外基质成分。E C释放内皮依赖性血管舒 张因子一氧化氮 ( N O ) ，与E C 功能密切相关。内皮源性N O 不仅能调节内皮下 S M C的张力而且能抑制多种病理过程， 如S M C的增殖与迁移、血小板聚集、L D L 氧化、单核细胞 和血小板的勃附以及炎症因子的合成等，内皮细胞 N O的合 成和释放过程障碍将会导致多种血管疾病的形成和发生: N O易与体内的0 2 一 相互反应产生o N 0 o 一 ， 反应式如下8: N O十q一 0 N 0 0 - O N O O一+H十 。0 N 0 0 H 目前认为正常情况下 N O以生理性作用为主，病理情况 下O N O O 一 生成过多，主要表现为氧化损伤作用，即N O作 为机体的双向调节因子，它的负面作用主要是通过 O N 0 0 - 来实现的，1。o N o o 一 水平在一定程度上能反映机体某些自 由基如N o 等的水平9; 另一方面，( 下转第12页) l 2浙江预防医学2 006 年第 1 8 卷第 1 2 期z h e i i a n ， 几 e v M e d ，D e c e m b e : 2 0 既，v o l l s ，N 。 1 2 酮检测方面还存在一些难点。临床上一般多采用总皋酮和 游离皋酮测定值，来诊断和评价P A D A M，以竹 作为指标不 够敏感。v er m eul en等提出生物活性辜酮是测定辜酮的最佳 指标， 但其检测方法相对复杂，不属于常规检验。 ( 3) 受 疾病或药物的混杂影响。很多常见的疾病既能影响中老年 男性雄激素水平，促进衰老的作用，同时其临床表现也难 以和P A D A M的症状相区分。 本次调查表明，血清总皋酮水平、游离攀酮水平以及 游离辜酮指数平均值随年龄增高而下降，而性激素结合蛋 白水平和黄体生成素水平随年龄增高而升高，此种变化趋 势与众多资料报道一致3. 。 近年来不少横向和纵向的 研究 都证明了血清辜酮水平随年龄老化而降低的事实f2. 6 。美国 马萨诸塞男子老龄化横向研究2表明， 50岁以上男子平均 每年血清总辜酮 ( 竹)下降 0 . 4 %，游离皋酮 ( 叮)下降 1 . 2 %，白蛋白结合T( Alb 一 T) 下降 1 . 0 %，而 S H B C却以 每年 1 . 2 %的速度增加。著名的巴尔的摩老龄纵向研究 ( B 路A ) 则进一步从纵向变化提供了血清皋酮随年龄老化 下降的证据。上海华东医院对 1 29 名健康中老年男子的研 究显示男性从中年 ( 45 一59 岁)到老年各年龄段血清 T 、 FT 和D H T的平均值都有所下降，各年龄段碑、D H T 的平均 值差别 ( P 0 . 01)比各年龄段 T平均值明显 ( P 0 . 0 5 ) ， 而中老年各年龄段血清 s H B C平均值有所升高 ( P 0 . 01) 。 以D A M的发生是一综合的、长期的过程。 参考文献 1 Wern e r A A . The m a l e 。 l i m a c t e d 。 J . J A M A ，1 9 3 9 ，1 1 2 :1 料1 - 1 中冬 3. 2 H arm a n s M ， M e t t e r E J ， 乳b i n J D ， e t al 肠n g i tu d i n 习e ffe c t s o f a g i n g o n se ru mto t ala n d free t e s t o s t e ro n e 1 e v e l s i n h e al。 h y m e n J . J c l i n E n d ocri n o 1 M e t ab，2 (X)1 ，8 6 :7 24 一7 3 1 . 3 李宏军.老年男性雄激素部分缺乏 【 J.中华老年医学杂志， 2 (X)1 ，20 ( 6 ) :4 6 2 一 464 . 4 冷静，王益鑫，黄旭元，等.上海市 1 5 82 例中老年男子勃起 功能障碍流行病学调查 【 J .中国男科学杂志，2 仪 旧 ，14 ( 1 ) : 2 93 1 . 5 G .L u n gl m a ” .A n dro朗 nd e fi c i e n c yi nt h ea 罗 i n gm 戒 e :p o t e n t i 司 c l i n i c a l i m p o rt a n c ea n dt h e ra p e u t i cc o n s id e r a t io n s J .M e n o p a u s e a n d ro P a u s e ，2 9 3 一 3 0 2 . 6 几 n Rs， Pus J ， I s i t a n d ro p a u s e ?R o o g n i z i n g a n d ro g e n d e 6 c i e n c y i n 昭 i ngm e n J . Pos t g r a d M e d ， 2 (x 抖， J a n :1 1 5( 1 ) : 6 2 一 6 6 ， ( 收稿日 期: 2 005 一 11 一 25) ( 上接第9 页)O N O O 一 通过修饰 LDL 并使 L D L对氧化的敏 感性增加等作用参与A s 的过程 10，因此细胞的自由基氧 化损伤程度也可以用 O N O O 一 水平来衡量。正常情况下，机 体的氧化抗氧化处于一种动态的平衡当中，但由于各种原 因其中包括外来化合物的损伤，均可使机体的自由基水平 增高，机体的氧化与抗氧化失衡，导致机体的氧化应激。 过量的自由基可在产生部位及远离产生部位的其它部位攻 击 D N A分子，产生多种不同的后果。本实验 O N 0 0 一 水平 和c 凡浓度呈正相关， 提示c 凡可使细胞自由基水平增加， 打破了氧化抗氧化平衡向自由基方向倾斜从而导致 E C损 参考文献 K rs t e v S ， P e run i c i c B， o c c u p a t i o n a l e x P o s u ret o c a F a r k l c B. 1 、 e e f fec t s o fl o n g 一 l e rm 朴川 比 o n d i s 己 p h i d e 。 。 s e ru ml i p i d ， J . J D o g M e t abp h ar m a c o k i n e t ，1 9 9 2 ，1 7( 3 ) :2 3 7 一 2 4(). 2 K az u y u k i o ， T a k e b a y a s h i T ，N o m i y a m aT ，e t al .c ro s ， s e c t i o n a l o hs oa 盆 i on of 之 h ee ffec 之 sof c a rb o nd j s 己 户i d eo na r 比 r o s c 】 e ro s i sj 。 ravo n m a n ufac t u n g w o 八 e rs J o c c u p E n v i ro n M e d ，1 9 9 5 . 5 5 : 468、4 7 2 . 3 彭晓霞， 谭晓东，陈冠民，等.长期接触低浓度二硫化碳对工 人血脂影响的研究 仁 J .中国公共卫生， 2 002 ，18 ( 6):6 83 6 8 4. 【 4 王春兰.二硫化碳对人体健康的危害 仁 J.职业卫生，1 9 98， 6 :1 21 3 . 【 5 高艳华， 梁友信， 傅慰祖， 等. C 乓对原代星型胶质细胞的毒 性研究 【 J. 卫生毒理学杂志， 1 9 99，13( 1 ) :1 一 3 6 宋继蔼. 病理学 M . 北京: 科学出版社，1 9 99.1 53一 1 56， 【 7 张宁仔，杜日映.心血管病学理论与实践 M Z .北京:人民 军医出版社，1 9 99 4 82一 4 85. 5 c ro v e s JT. P e ro x y n i t r i t e : re a c t i v e ，in v a s iv e ，e n ig m a t i c J .c urr O P i n C h e mB i o l ，1 9 9 9 ， 3 :2 26一 3 5 . 9 B e c k m a nJ S ，K o p p e n o lW H .N i 币 。 x id e ，s u p e ro x i d e ，a n d p e ro x y n i td t e : t h e g oo d ， t h e b a d ， a n d t h e u gl y J . A mj p h y s i o l ， 1 9 9 6 ，2 7 1 :c l 4 2 4一3 7 ， 1 0 H o 路N ，D a rl e yU s mar v M ，G ra k a n A ，e t al .P e ro x y n i t ri t e 。 n d a t h e ro s c ler o s is J . B i o c h e ms ocT rans ，1 9 9 3 ， 2 1 :3 5 8 一 3 6 2 ( 收稿日 期:2 加5 一 12 一 06) 杯不丫丰中中本类历口 更正: 浙江预防医学2006年第 18卷第9 期第69页，“ 动力髓螺钉治疗股骨转子间骨折38例 分析”一文作者单位:“ 富阳市中医院”应为 “ 富阳市中医骨伤科医院” ，特此更正。 毖主士人士人士人 角科侣州净 R 召召召村 引 汗 钊 佬 什 什什召 书褚 召召召升 刹引 冲 杆 侣干 升 召召 十 汗 枉 召侣子 招 祝雀 烤 褚 褚 召什 什召于 升 考 升召召召 引剐书书祝 十 汗 什 召召咭 什杆 科 召召褚 咭 褚 考 召 升号 褚 嵘 召十 升