分光光度法测定鱼皮中羟脯氨酸含量.pdf

性洲分析 食 品 研 究 与开 发2 口 口 ZV o l . 2 8 .Nd1 口 1 4 5 - 分光光度法测定鱼皮中经脯氨酸含量 郭恒斌 . 曾庆祝2 ( 1 . 广州陆仕水产企业有限公司， 广东 广州 5 1 0 8 2 0 江广州大学食品工程系， 广东 广州 5 1 0 0 0 6 摘 婆: 采用 分光光度法浏定 鱼皮( 鱿鱼皮和 构蛙 鱼皮) 中的在肺 氮酸 ( H y p ) 含1具有 较高 的准确度和精密度。采用 该法浏定两种鱼皮中夯脯氮艘的含黄分别为。 . 8 2 3%和2 .2 4 7'%， 平均回收率分别为9 8 .4 7%和9 8 . 3 9%, 交异系数分 别为 1 .6 5 %和0 .6 4 %.该法重复性好， 可信度高， 可作为判定鱼皮中胶原蛋白含1的一个定童指标。 关键词: 鱼皮; 舟脆氛趁; 分光光度法 S P E C T R O P HO T O ME T R I C D E T E R MI N AT I O N OF H YD RO X YP RO L I N E I N F I S H S KI N S G U O H e n g - b in ', Z E N G Q i n g - z h u ' ( 1 .G u a n g z h o u L u x e S e a f o o d E n te r p r i s e s L td . , G u a n g z h o u 5 1 0 8 2 0 , G u a n g d o n g , C h in a ; 2 .D e p a r n n e n t o f F o o d E n g i n e e r i n g , G u a n g z h o u U n i v e r s i ty , G u a n g z h o u 5 1 0 0 0 6 , G u a n g d o n g , C h i n a ) A b s t r a c t : H y d ro x y p ro l i n e ( H y p ) c o n t e n t in fi s h s k i m w a s d e t e r m i n e d b y th e s p e c t r o p h o t o m e t r ic m e t h o d . S p e c - t r o p h o to m e t r i c m e t h o d h a s h i g h v e r a c i ty a n d p re c i s io n . T h e H y p c o n t e n ts o f s q u i d s k i n a n d c h u m s a l m o n s k in w e re 0 .8 2 3 %a n d 2 . 2 4 7%， res p e c t i v e ly . T h e a v e r a g e re c o v e ry r a t e s a n d t h e C V o f H y p f ro m s q u i d s k i n a n d c h u m s a l m o n s k in w e re 9 8 .4 7 % a n d 9 8 . 3 9 % , a n d 1 .6 5 % a n d 0 .6 4 % , res p e c t i v e ly . T h is m e t h o d c a n b e u s e d a s a r e l i a b l e q u a n t it a t i v e m e t h o d o f t h e c o ll a g e n in fi s h s k i n s . K e y w o r d s : fi s h s k i n ; h y d ro x y p ro l i n e ; a p e c trop h o t o m e t r ic m e th o d 作者简介: 郭恒斌( 1 9 8 1 - ) , 男( 汉) ，硕士， 研究方向: 水产品加工及贮藏工程。 ( 3 . 4 4 % ) , 4 - 曹 烯( 3 . 1 4 %) ， 柠檬 烯( 2 . 4 4 % ) , a - 水 芹烯 ( 2 . 9 5 % ) 等 成分。 李庆 春等 16 1利 用有机 溶剂提 取芒 果的 香味 成分， 利 用G C - M S 分析 后仅检测到异松油烯. Y - 经 基辛酸内 醋, 3 , 7 一 二甲 基一 1 , 3 , 6 一 辛三 烯、 石竹 烯等十 几种 香味 成分， 其原因可能是直接用溶剂提取的效率较低， 而本 文 利用的同 时蒸 馏萃 取仪 对植物中 的 挥发性 成分的 提 取效果较好f7 与文 献 6 报道 相比， 相同 的 组分 是异 松油烯, 3 ,7 - 二甲 基- 1 , 3 , 辛三 烯、 柠檬 烯、 石竹 烯等 成分， 这 是芒 果中的 特征 香气 成分。 不同的 是 本文 分离鉴 定远 远多 于文献鉴定的香气成分， 例如: 许多高级饱和及不饱和 脂肪酸及菇醇类、 掂烯类未见报道。 这些成分应对芒果 香气有较大的贡献，而相对含量较低的一些化合物在 芒果 总体香 气构 成中也 有不 可忽 视的 作用， 例: 叶 醇具 有典型的青草香; 香叶醇具有甜的花香， 由于这类物质 的嗅 觉闭值 一般 都很低， 因 此其 香气 值较高， 加之 具有 愉快持久香味， 这些芳香成分构成了芒果的特有的色、 香、 味和独特的风格， 这还有待于结合嗅觉感官分析进 一步研究。 参考文献: 1 E n g e l K H , T r e e d R .S m d ie a o n 此 v o l a t il e c o m p o n e n t s o f t w o m a n g o v e n e n e s 田. A g r ic F o o d C h e m . 1 9 8 3 , 3 1 ( 4 ) : 7 9 6 - 8 0 1 2 1张斌， 郑桂富， 马龙芒果醋的酿造工艺研究n . 中国酿造, 2 0 0 6 ( 7 ) : 6 8 一0 3 1黄发新， 王圣武， 肖芳洪. 芒果果脯的研制n .食品工业科技， 。 2 0 0 0 , 2 1 ( 3 ) : 4 3 - 4 4 41 王玲 ， 苏伟 明 . 芒 果 酒 的开 发 研 制3 ·中国 酿 造. 1 9 9 8 ( 0 : 2 1 - 2 2 s 王春燕， 蔡志宁， 羞华强. 芒果酒酿造工艺的研制 n . 酿酒, 2 0 0 3 , 3 0 ( 3 ) : 8 8 - 9 0 6 )李庆 春 ， 邱 玫熊 杰 . 云 南 怒江 地 区 芒 果香 味 的 分析n . 色 谱 , 1 9 9 8 , 1 6 ( 3 ) : 2 6 8 - 2 7 0 1 7 P e n g F M , S h e n g L Q , L i u B Z , e t a l . C o m p a r i so n o f d i ff w e n t e x tx a c - li o n m e th o d e :e t e a m d i at il la t ia . A im u lta n e o u e d i e til le b o a a n d e x t- - ti o n a n d h e a d a p e e e e o - d ia t ill a t io n ,u e ed fo r t h e a n a ly s i s o f th e v o la ti le e o m p o n e n ta i n a g e d fl u e c m e d to b a x o l e a v e s 4 C h r o m a t o g r. A ,2 0 0 4 , 1 0 4 8 1 - 1 7 收稿日期: 2 0 0 7 一1 - 2 1 万方数据 2 0 0 7 . V o l. 2 8 . No . 1 0食品 1 7 究 与 并发 检测分析 了 4 6 鱼皮中含有大量的蛋白质，其中含量最多的为 I 型胶原蛋白。最高可超过其蛋白质总量的 50%， 较鱼体的其他部位要高许多，有研究报道真绸鱼皮 中胶原蛋白含量占粗蛋白的 8 0 .5 % a ,鳗鲡则高达 8 7 . 3 VI 。 胶原蛋白 的氨基酸 组成主 要为脯氨酸、 甘 氨酸和丙氨酸。 其中I 型胶 原蛋白 中甘氨酸( G l y ) 占 3 0 % , 脯氨酸( P r o ) 和经脯氨酸( H y p ) 占约2 5 % ， 在一 般动物蛋白质中的轻脯氨酸含量极微to 。目前， 胶原 蛋白的含量是根据经脯氨酸的含量再乘以相应的系 数而得到的洲。 测定经脯氨酸的方法有多种， 包括分 光光度法、 氨基酸分析仪法、 H P L C法和电泳法等， 其 中以分光光度法最为常用， 如测定动物组织、 猪肉、 胶原海绵和鱼鳞中羚脯氨酸的含量 ， 翎 。为了准确地 评价鱼皮中经脯氨酸及胶原蛋白的含量，本文探索 了采用分光光度法测定鱼皮中经脯氨酸含量的可行 性和准确性，以便于鱼皮中胶原蛋白的进一步开发 和利用 。 1 材料与方法 1 . 1 材料 鱿鱼皮由大连金山水产有限公司提供、狗畦鱼皮 由大连新港水产加工厂提供。 将鱼皮残余的鱼肉去除， 用剪刀剪成小片( 1 c m ' x l c m ' ) ， 用自 来水反复清洗后 放人P E 食品保险袋中于一 2 0 下冻藏备用。 1 .2 仪器 电热恒温鼓风干燥箱; B P 2 2 1 S ( 赛多利斯) 电子天 平; 7 2 1 分 光光度 计; H W S 2 6 型电 子恒 温水 浴锅等。 1 .3 原理m 鱼皮通过盐酸水解释放出单体经脯氨酸， 氯胺T 将羚 脯氨酸氧 化形成 结构 类似毗咯的 氧化物 ， 并使这 种氧 化产物与 显色剂 ( 对 二甲 氨基苯甲 醛) 缩合而生 成红 色的 产物进行比 色测 定。 1 一 试剂及配制 6 m o U L 盐酸,0 .0 1 m o l l 盐酸， 0 . 1 m o V L N a O H溶液。 柠檬酸缓冲液: 柠檬酸 钠1 2 0 g , 冰醋酸1 2 m L , 柠 檬酸4 6 g , 氢氧化钠3 4 g 溶解于燕馏水中， 定容至 1 0 0 0 M L , 临用时调整p H = 6 . 0 o 0 .0 5 m o l / L 氯胺T 溶液:称取氯 胺T 7 .0 5 g , 溶解于 1 0 0 m L蒸馏水中，然后加人乙二醇独甲醚 1 5 0 m L ， 再 加人2 5 0 m L 柠檬 酸缓冲 液混 合均 匀。 对二甲 基氨 基苯甲 醛试 剂: 取无水乙 醇2 0 m L 慢 慢加 人浓硫酸2 .7 4 m L 作 为A 液; 取 对二甲 基氨基苯 甲 醛1 2 .0 g ， 缓 慢 加 人 无 水 乙 醇4 0 m L ， 水 浴 加 热 使 其 完全 溶解并 冷却 至室 温，作为B 液。 然后 将A 液 慢慢加 人B ,混合 均匀。 3 .5 m o n高 氯酸溶液: 取2 7 m L 高氯酸 ， 以蒸 馏水 定容到 1 0 0 m L e 经脯氨 酸 标准储 存液: 准确称 取L - 经脯 氨酸 标准 品1 0 0 m g 加人0 .0 1 m o l/ L 盐 酸 中 溶 解 ， 稀 释 并 定 容 到 1 0 0 m L ， 在冰 箱中 保存。 经脯氨 酸标 准工作液 : 吸取轻 脯氨酸 标准储 存液 1 0 m L 到1 0 0 M L 容量 瓶中，蒸馏水定 容( 临 用前 配制) . 质量 浓度为1 0 0 m g / L 口 1 . 5 样品处理 准确 称取 经解冻 晾干的 鱼 皮1 g( 精确 至0 .0 0 1 g ) 于碘量瓶中， 样品不得粘附碘量瓶内壁， 加人 6 m o l / L 的盐酸5 0 m L 。于1 2 0 9 0 - 1 3 0 下水解8 h 。 水解完成 后 将水解物 用蒸 馏水定容 至1 0 0 M L ， 用滤 纸过滤， 收 集滤液于锥形瓶中， 加人活性炭以去除色素， 再过滤， 取滤 液1 M L ， 用0 . 1 m o U L N a O H调 节p H = 6 .5 - 7 .0 ， 定 容到5 0 m L 备用。 1 .6 经脯氨酸标准曲线的绘制 准确吸取翔 甫 氨酸标准工 作液1 .0 m L , 2 .0 m L , 2 .5 m L , 3 .O M L , 3 5 m L , 4 .0 m L , 4 . 5 m L ， 分别用蒸馏水定容到 1 0 0 m L 。取上述标准液 1 m L于试管中， 分别加人 1 m L 柠檬酸缓冲液和1 m L 0 0 5 m o V L 氯吱T 溶液，室温( 2 5 'C ) 氧化 1 0 m i n 后， 加人高氯酸1 M L ， 放置 1 0 m i n ， 最后加 人对二甲基氨基苯甲醛显色试剂 1 M L ，在6 5 水浴 显色1 0 m i n ， 冷却 后在5 6 0 n m 处测吸光度( 蒸馏水为 空白对照) 。以经脯氨酸质量浓度为横坐标， 吸光度为 纵坐标绘制标准曲线， 求出回归方程。 1 .7 回收率的测定 取鱿鱼皮和狗鱿鱼皮， 按 1 .5 的方法处理， 分别测 定其轻脯氨酸含量， 再在各样品中分别加人标准经脯 氨酸， 进行测定， 按下式计算回收率。每一样品做3次 平行试验。 回 收 率 ( % ) 二 攀 x 1 0 0 式中X :加人经脯氨酸后样品中测定出的经脯氨 酸总 量( 9 ) ; Y : 样品 中 轻脯氨 酸测 定量fi g ) . Z : 加 人标准 轻脯 氨酸量( 9 ) 。 2 结果与讨论 2 . 1 经脯氨酸标准曲线的测定 按照1 . 6 的 方法， 测定轻 脯氨酸的 标准曲 线， 经脯 氨酸 标准 样品的 质 量浓 度和吸 光度 值如表1 所示。 根据 测 定的数 值， 以经 脯氨酸 质量 浓度为 横坐 标， 万方数据 位洲分析 食 品 研 究 与 开 发 2 0 0 7 . V 6 1. 2 8 . No . 1 0 1 4 7 - 衰1 释脯氮酸标准样品质.浓度和吸光度对照裹 T a b le 1 l 触 c o m m a t r a d 如 叮 创 .山 川 U 冲 四d t h e d e 妞 n 目 西 的 . b 侧 o r b 助 峨 注 日 即浓勿( p h :标准曲 线上 相对应 的9 脯氨 酸的 含量( 4M L ) . m : 样品的 质量 ( g ) ; v : 稀释至 5 0 M L 时所取滤液的体积( m L ) . 由表2 可知.鱿鱼皮和狗继鱼皮中经脯氨酸的百 衰 2 鱼 皮中经 脯氮酸的含. T a b l e 2 T h e c o n t e n t s o f H y p in 口 由 sk i n 月 期 9 4 3 6 3 4 j 肠 咖Q3380337哪Q3j7 值 平 样 品 S a m p l e 吸光 度 A 鱿鱼皮 S q u i d s k i n 狗蛙鱼 皮 C h u m s a lm o n s k in 0 . 1 2 8 5 3 0.0 0 3 0 3 4 5 0 * 0 .叮 毋 月9 5 川 刀1 2 24 7 1 0 .01 _A r 叫e 1 . 6_ 由 表3 可以 看出， 鱿鱼皮样品回 收率在9 5 .4 8 % - 1 0 1 . 9 4 %之间， 平均回收率为9 8 .4 7 %; 狗继鱼皮样品 回收率在9 3 . 5 5 % - 1 0 3 . 2 2 % 之间， 平均回收率为 9 8 .3 9 % 。 另外， 根据表4 可以 看出， 对鱿鱼皮和狗 蛙 鱼皮 分别 经过4 次 平行测 定， 计算其 标准偏 差分别 为 0 . 0 2 7 和0 .0 2 8 ， 变异系数分别为 1 . 6 5 % 和。 .6 4 %。 可以 看出， 此 方法 测定 鱼皮中 9脯氨 酸含 量具有 较高的 准 确度和精密度。 叫 H y p v ( p w m l .) H y p l ( 砂i o o g tA ) 6 4 6 = 0 . 0 4 R 2 3 3 0 . 0 4 注 : 表 中 均 为平均 值 士 标准偏 差。 分含量分别为0 . 8 2 3 % 和2 . 2 4 7 %。由于轻脯氨酸含量 3 结论 采用 分光光度法 测定鱼皮中 经脯氨酸含 量快速、 简便， 并具 有较高的 准 确度和 精密 度. 可作为 判定鱼 皮 万方数据 2 0 07 . V o l . Z a八lo . 了 口食 品 研 究 与 并 发 检洲分析 -1 4 8 红 提葡萄中有 机酸成分的G C - M S 分析 梁茂雨 . 刘钢湖2 .* ( I .像河市食品工业学校， 河南 深河 4 6 2 0 0 0 ; 2 郑州轻工业学院食品与生物工程学院， 河南 郑州 4 5 0 0 0 2 摘 要: 为研究菊萄中 的有机酸成分， 将萄萄 有机酸提取、 醋化后， 采用G C - M S 分析葡萄中 的有机酸， 研究表明， 菊 萄中 含有1 7 种有机酸， 其中多 元酸7 种， 饱和脂肪 酸5 种， 不饱和脂肪趁4 种， 此外，还包 括1 种载代有机酸。 关健词: 荀萄; 有机酸; 气相色语一质语联用法 D E T E R MI NA T I O N O F T HE C ON T E NT S OF OR G AN I C A C I DS I N G R AP E B Y GC - MS L I A N G M a o - y u ' , L I U G a n g - h u r ' ( 1 . L u o h e F o o d I n d u s t ry S c h o o l , L u o h e 4 6 2 0 0 0 , H e n a n , C h i n a ; 2 . S c h o o l o f F o o d a n d B i o lo g i c a l E n g i n e e r in g , Z h e n g z h o u U n iv e r s i ty o f L i g h t I n d u s t ry , Z h e n g z h o u 4 5 0 0 0 2 , H e n a n , C h i n a ) A b s t r a c t ; T o s t u d y th e c o n t e n t s o f o r g a n ic a c i d in g r a p e . T h e g a p e f r u i ts w e r e e s t e r i z e d a n d d e te r m i n e d b y G C - M S m e t h o d . T h e r e s u l t s s h o w e d th e g a p e h a s s e v e n t e e n k in d s o f o r g a n i c a c i d , i n c l u d i n g s e v e n k i n d s o f p o ly a c i d , fi v e k i n d s o f s a t u r a t i o n fa tty a c id in , fo u r k i n d s o f u n s a t u r a t i o n f a t ty a c i d a n d o n e k in d o f k e t o o r g a n i c a c i d . K e y w o r d s ; g a p e ; o r g a n ic a c i d ; G C - M S 葡萄系蔷薇科苹果亚科葡萄属树种， 其营养丰 富， 果实中 含有大 量的有 机酸、 酚 类、 黄 酮和维生素等 物质 ” 勺 ， 产品广 受人 们喜爱。 葡萄中有机酸的种类、 含量与构成对葡萄加工的 味道有很大影响，是产品品质和生产工艺中一项重要 检测 指标。 对一些品 种葡萄中有 机酸成分的 分析， 目 前已有报道囚 。红提葡萄是我国从美国引进的葡萄新 品种， 目 前已在我国广泛种植， 本文采用硫酸甲醋化方 法处理葡萄样品， 用气相色谱一 质谱联用法分析、 鉴定 了其有机酸成分. 并用面积归一化法测定了各成分的 相对百分含量，以期对红提葡萄开发应用提供一些理 论参考。 作者简介: 梁茂雨( 1 9 77- ) , 男( 汉) ， 学士. 讲师，研究方向: 功能食品 加工技 术。 . 通讯作 者 1 材料和方法 1 . 1 材料和仪器 葡萄为美国红提葡萄: 采自中国农业科学院郑州 果 树研究 所( 2 0 0 5 年9 月 ) ; 二氯甲 烷、 甲 醇、 硫酸、 无水 硫酸钠均为分析纯试剂。 中经脯氨酸及胶原蛋白含量的一个定量指标。 参考文献: 1 1鸿巢章二.桥本周久. 水产利用化学I M l . 北京: 中国农业出版社， 1 9 9 4 : 2 6 9 2 1陈 胜 军.曾 名 勇 . 萤 士 远 . 水 产 胶 原蛋 白 及其 活 性 肚的 研究 进 展【几 水产科学， 2 0 0 4 ,2 3 ( 6 ) :4 4 - 4 6 3 ) K a r e n M F G e b e l 人G oo - la g o m践a a L C o ll a g e n c o n t e n t in fa r m e d A tl a n ti c s a lm o n ( S a lm o s a la r, L ) a n d s u b s e q u e n t c h a n g e s in w lu b il - 衍d u r in g s to ra g e o n i c e f . F o o d C h e m ia tr y , 1 9 9 8 , 6 2 : 1 9 7 - 2 0 0 4 1 K o lo d m e is k a 1, S i k m s k i Z 致N i mik a w e k a GP a ra m e te ts a ff e c t in g th e f e o l a t io n ofc o l la g e n fi o ms q u id ( m e r u r g e 浦m u ) s k i司 刀 . F o o d C h ew- i s try, 1 9 9 9 , 6 6 : 1 5 3 - 1 5 7 t 5 1冯志民， 徐蓄， 马旺扣. 动物组织中轻脯氨酸测定方法的建立及 初步应用阴. 南京铁道医学院 学报， 1 9 9 9 , 1 8 ( 3 ) : 1 6 8 - 1 7 0 6 1曾勇庆， 王蔽. 猪肉中M脯氨酸的分 光光度法侧定田. 山东农业大 学学报. 2 0 0 0 , 3 1 009 - 8 1 闭关静， 叶萍， 武继民. 胶原海绵的轻脯氨酸含盘测定田. 氮基酸和 生物资9, 2 0 0 0 , 2 2 ( l ) :5 2 - 5 4 $ 1张俊杰， 曾庆孝. 比色法测定 鱼绒中9脯氨酸的研究阴.食品科技， 2 0 0 4 ( 4 ) s 3 - 8 5 9 ) B e itrp. - 1 , L m d e y I t . T w o i m p ro v e d e n d s i m p l if ie d m e th o d f t h e s p e c h o p h o to m e n ic d e te n n in a ti o n o f h y d i o x y p iu l in e 7 . Ana ly tic a l d r a m ., 1 9 6 3 , 3 5 : 1 9 6 1 收摘日期: 么 ) 0 7 -0 卜 1 2 万方数据