感染大肠杆菌后家蝇幼虫血淋巴细胞的观察.pdf

万方数据 垫堂医堂苤查2 鲤墨生2 旦箜墨鲞箜2 翅 健康成长对家蝇幼虫免疫机制进行研究也就更有意义。 本实验对大肠杆菌感染后家蝇幼虫的细胞免疫变化进行 研究为其免疫功能及作用机制提供参考资料。 ·6 4 7 · 形态的变化姬氏血涂片置于光镜下观察1 0 0 个血淋巴 细胞并分类计数，观察各种血细胞数量( d i f f e r e n th e m o c y t e s ， D H C ) 及形态的变化，并作显微摄影分析。1 材料与方法2 结果1 1 材料与仪器 1 1 1 家蝇三龄幼虫参照赵慰先主编人体寄生虫学 - 】饲养幼虫至孵化后第4 天备用。幼虫饲料配方为麦麸1 0 0 g ，奶粉1 g ，红糖1g ，水2 0 0 m l 。室温2 5 2 8 。C ，湿度 3 5 一4 0 。 1 1 2 大肠杆菌4 4 1 8 4 遵义医学院微生物学教研室惠 赠。 1 1 3 显微摄影N i k o n 公司N i k o n Y S l 0 0 光学显微镜莱 卡公司Q w i n 细胞图像分析系统。 1 2 方法 1 2 1 针刺感染家蝇三龄幼虫3 号昆虫针蘸取l x l 0 9 m L 大肠杆菌菌液从腹部刺入一针后，置于饲料中饲养。以l O 只幼虫为一组，分别于感染后4 、8 、1 6 、2 4h 观察血细胞的 变化，以同时取出但未感染的家蝇幼虫作为对照组。 1 2 2 大肠杆菌感染后家蝇幼虫血淋巴细胞总数的变化 取感染后不同时间组及对照组幼虫于5 5 水浴中固定 5m i n ，剪去头端，收集血淋巴5 斗l 加昆虫保护液9 5 斗l ， 充分混匀后取7 5 斗l 血淋巴稀释液将血球计数板填满，立 即于倒置显微镜下计数血淋巴细胞总数( t o t a lh e m o e y t e s T H C ) 的变化。 1 2 3 大肠杆菌感染后家蝇幼虫各种血细胞数量及细胞 2 1 感染后不同时间家蝇幼虫T H e 的变化 从表1 可见。大肠杆菌感染后不同时间组血淋巴细胞 总数较对照组均有显著增加( P 0 0 5 ) 。 表2 大肠杆菌感染后不同时间家蝇幼虫各种血细胞的比例 T a b 2T h ep r o p o r t i o no ft h eD H Co ft h eg u s e ad o m e s t i c al a r v aa td i f f e r e n tt i m e sa f t e rE c o i li n f e c t i o n j 蜘 注：与对照组比较，P ( O 0 1 2 3 感染后不同时间家蝇幼虫D H G 的变化 每微升血淋巴细胞总数×各种血细胞比例= 每微升 相应的各种血细胞数结果见表3 。结果显示，感染后各 时间组每微升血淋巴中的浆血胞和粒血胞数均较对照 组有显著升高( P 0 0 5 ) 。 2 4 感染后家蝇幼虫血淋巴细胞形态的变化 2 4 1 正常小核浆血胞多为中小型血胞( 8 0 斗m 一1 3 2 斗m ) ×( 7 6 ¨m 8 5I x m ) 。边缘完整，轮廓清楚。核小而 圆，姬氏染色，胞质深紫色，核紫红色( 图l a ) 。 2 4 2 空泡化 以浆血胞中的小核浆血胞变化最为显著 胞质普遍出现大小不等的空泡( 图1 b ) ，有的小核浆血胞 的细胞核偏向一端出现一个占整个细胞一半左右的大空 泡( 图l c ) 。 2 4 3 细胞变形主要是小核浆血胞，失去其圆滑完整的 轮廓。形成皱褶或扭曲的外缘，细胞质不如正常者均匀质 密，出现稀密不均的现象( 图l d 、e ) 图1 见封三。 2 4 4 颗粒浓集在各类细胞内都出现核内颗粒浓集成 大颗粒或块状的现象。姬氏染色着色浓暗。不如正常者清 晰、明亮。 万方数据 ·6 4 8 · 表3 大肠杆菌感染后不同时间家蝇幼虫血淋巴中的 各种血细胞数 T a b 3T h en u m b e ro fD H Ci nh a e m o l y m p ho ft h eM u s c a d o m e s t i c al a r v aa td i f f e r e n tt i m e sa f t e rE c o l ii n f e c t i o n p 1 j ±s 时间 4h 8h 1 6h 2 4h 原血胞对照组8 5 ±5 91 0 6 士8 61 3 7 ±9 8 1 9 1 ±11 7 原血胞感染组4 8 2 ±1 8 8 7 0 1 ±3 2 6 5 2 1 ±3 1 7 6 5 6 ±4 1 4 浆血胞对照组3 5 7 3 ±1 4 73 7 7 5 ±1 1 94 2 0 2 ±8 64 6 6 7 ±6 8 浆血胞感染组2 2 4 9 8 ±3 9 2 A2 4 9 0 9 ±2 7 5 。1 5 9 8 0 ±3 1 7 A * * 1 3 9 8 8 ±4 8 9 A * * 粒血胞对照组8 0 8 ±8 111 6 3 ±4 11 5 6 1 ±1 6 51 8 4 8 ±1 8 6 粒血胞感染组7 4 3 0 ±7 1 3 “ 1 0 l1 9 ±7 2 8 “ * 6 7 7 5 ±7 2 7 A * *5 9 0 1 ：1 ：4 1 4 A 珠血胞对照组2 5 6 6 ±1 5 42 4 3 1 ±2 1 02 6 3 2 ±1 8 32 6 4 8 ±1 4 1 珠血胞感染组 3 5 7 8 ±5 2 2 2 6 4 7 ±8 4 45 2 1l ±5 4 l + 6 1 7 4 ±9 7 7 类绛血胞对照组5 7 ±5 97 6 - + - 5 31 0 3 ±7 21 7 1 ±1 0 4 类绛血胞感染组4 1 3 ±2 8 85 4 5 ±2 1 34 6 3 ±1 5 96 0 l ±2 2 9 注：与对照组比较。P O 0 1 ；与感染4h 组比较，·P 0 0 1 ； 与感染8h 组比较，”P O O l ；与感染1 6h 组比较，。P 0 0 l ； 与感染8h 组比较”·P 0 0 5 3 讨论 本实验的研究结果显示大肠杆菌感染后不同时间家 蝇三龄幼虫血淋巴细胞总数较对照组均有显著增加。这与 傅贻玲【2 的观点一致。即昆虫血细胞数量变动可受变态、 创伤和病原体感染等因素影响。通常数量均有明显升高。 此外，A n d r e a d i s 等报道埃及伊蚊幼虫感染病原体后。附 着在蚊幼虫身体后部的大部分血淋巴细胞开始循环使血 细胞计数增加。由此我们推测当外源微生物入侵家蝇幼虫 体内后。自身内在防御体系即作出相应反应，使平时静息 于各器官表面的血细胞在异物的刺激下开始游离于血淋 巴中，以抵抗外源物的入侵。结果导致血淋巴细胞总数高 于正常数量并在感染后8h 出现一个高峰值，但随着时间 的延长部分细菌会被血细胞吞噬使体内细菌数量处于 低水平，此时细菌对机体的免疫诱导作用较前降低。另外 部分血细胞在毒素的作用下也会发生变形、转化、崩解等 变化。从而使血细胞数量逐渐减少。莫非等研究发现致 倦库蚊感染大链壶菌后血淋巴细胞总数出现增加、急剧 增加、然后逐渐减少的变化特点。本实验的变化趋势与之 J o u r n a lo fT r o p i c a l M e d i c i n e V 0 1 8N o 7J u l 2 0 0 8 相似。 本研究发现正常家蝇三龄幼虫体内的浆血胞约占所 有类型血细胞数量的5 0 左右，可被视为主干血细胞。并 且针刺大肠杆菌后，在感染的早、中期浆血胞和粒血胞所 占的比例和数量均较对照组明显增加。说明这两类细胞是 免疫反应的主要参与者。其在抵御微生物感染过程中发挥 了重要作用。这与王荫长 5 的观点一致该学者认为浆血 胞在各种昆虫体内通常都是优势血细胞。它的主要功能是 吞噬异物，同时也参与包被和成瘤作用。而粒血胞在昆虫 免疫中也发挥了重要的监视和防卫作用。关于珠血胞功能 方面的研究目前较少。有学者认为该类细胞具有贮存和分 泌作用，没有吞噬功能 5 】。实验中虽然发现感染后4 、8 、1 6 、 2 4h 珠血胞的比例较对照组显著减少，但计算出感染后不 同时间家蝇幼虫血淋巴中的各种血细胞数后却发现，感染 后1 6 、2 4h 珠血细胞数明显升高。我们推测珠血胞也参与 了细胞免疫反应，只是发生免疫反应的时间较浆血胞和粒 血胞晚。 有文献报道在多数情况下毒物可导致血细胞的退 化、变态及死亡 2 。本实验用大肠杆菌感染家蝇三龄幼虫 后，镜下见浆血胞发生了空泡、细胞变形、核偏位等变化。 其原因可能是：血淋巴细胞被大肠杆菌的毒素作用而发 生变化；大肠杆菌作为一种异物入侵后，刺激浆血胞伸 出伪足去包裹异物而导致细胞变形。具体机制有待进一步 研究。 参考文献 1 赵慰先人体寄生虫学 M 第1 版北京：人民卫生出版 社，1 9 8 3 ：1 0 5 5 1 0 5 6 2 傅贻玲昆虫的血细胞( 二) J 昆虫知识，1 9 8 2 ，1 9 ( 4 ) ：3 7 - 3 8 ，4 1 3 A n d r e a d i sT G ，H a l lD W N e o a p l e c t a n ac m ' I x m a p s a ee n c a p s u l a t i o ni nA e d e sa e g y p t ia n dc h a n g e si n h o s th e m o c y t e sa n d h e m o l y m p hp r o t e i n s J E x pP a r a s i t o l ，1 9 7 6 ，3 9 ：2 5 2 - 2 6 1 4 莫非，包怀恩感染大链壶菌后致倦库蚊幼虫血淋巴细胞 的观察 J 中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2 0 0 1 ，1 9 ( 6 ) ： 3 3 0 3 3 2 5 王萌长昆虫生理生化学 M 第1 版北京：中国农业出 版社。1 9 9 4 ：5 8 6 0 ( 收稿日期：2 0 0 8 0 1 0 3 ；修回日期：2 0 0 8 0 3 1 7 ) 零牙她孓零鹕祭零祭笞电器祭零牙嘲莽昌黜零哈黾牙毡摹笞砚凇a 爵笞嗡莽笞的沿苕q 零高譬莽岛班零甥鱼努弛器努迎摹笞啦莽若氧雾弛萍笞她薄 ( 上接第6 3 8 页) As m a l ls p l i c e o s o m a l t y p ei n t r o no c c u r si nar i b o s o m a lp r o t e i n g e n eo ft h em i c r o s p o r i d i a nE n c e p h a l i t o z o o nc u n w 以i J M o l B i o c h e mP a r a s i t o l ，1 9 9 8 。9 4 ( 2 ) ：2 8 3 - 2 8 6 2 0 H a w k i n sJ D As u r v e yo ni n t r o na n de x o nl e n g t h s J N u c l e i c A c i d sR e s ，1 9 8 8 ，1 6 ( 2 1 ) ：9 8 9 3 - 9 9 0 8 2 1 D a v i sC A ，B r o w nM P ，S i n g hU F u n c t i o n a lc h a r a c t e r i z a t i o n o fs p l i e e o s o m a li n t r o n sa n di d e n t i f i c a t i o n o fU 2 ，U 4 ，a n dU 5 s n R N A si nt h ed e e p 。b r a n c h i n ge u k a r y o t eE n t a m o e b ah i s t o l y t i c a J E u k a r y o tC e l l ，2 0 0 7 ，6 ( 6 ) ：9 4 0 - 9 4 8 2 2 R u s s e l lA G ，S h u aT E ，W a t k i n sR F ，e ta 1 A na n c i e n t s p l i e e o s o m a li n t r o ni nt h er i b o s o m a lp r o t e i nL 7 ag e n e ( R p l 7 a ) o fG i a r d i al a m b l i a J B M CE v o lB i d ，2 0 0 5 ，5 ：4 5 ( 收稿日期：2 0 0 8 0 3 2 1 ；修回E t 期：2 0 0 8 0 5 一l O ) 万方数据 下图2 一图5 ：汪波，曹开源徐向东，等壮W 疫茁p e D N A 30 - P S M A 肿4 留细胞模型的建立( f F 文见第6 3 9 - 6 4 1 页 目2S P 2 0 细胞间接免疫荧光分析 F i g2I n d i c ti m m l ta l y s i so fS P 2 Oc e ¨s 目3S P 2 0 - F D N A 30 细胞间接免疫荧光分析 F i g3l 耐i R ni m m u n o f l u o n ta n a l y s i so fS P 2 0 - p c D N A 30 I I s 目4s e 2 o - f f S M A 细胞间接免疫荧光分析 F i g 4 I n d i r e c ti m m u o f l u o n ta n a l y s i so fS P 2 0 ·P S M A c ¨s 目5L N C a p 细胞厨接免癌黄光分析 F i g5I n d i c t n ma ¨l y s l so fL N C a pc e l l s 下图I ：晏容刘晖贺莉芳等感染大肠杆菌后家蝇幼虫血淋巴细胞的观察( 正文见第6 4 6 6 4 8 贞 目l 脑杆菌嚣染后寡蝇三龄幼虫血琳B 棚跑的观察 F i g 1 O b s e r v a t i o no nb 哪o c v I 嚣i n t h e m h f 衄d o m e s t i c ah mo r t h e3 t h i n s t a r i n f e c t e db yE ：M | t ip l “y t eo f t h e m ，a 】附。d o m e s t w a l a m ( G i e m ss a i n i n g ，1 ( x 日x ) ；bV a c u o I m 啪i nm i c m n u c l e id w 1 e m e ri n f e c t i o n ( G i e ) M + ss l a i n i n g ，1 0 0 0 x ) ；rN e u sd ”y e t i nm i u m n u ( I dd a f t e ri n f e c l l o ) l ( t ：a ss t a i n i n g ( 】0 0 x ) ；d ：R u e k H lI m 汕l n ¨E l e u 8p l I “- y ¨血n h ¨¨n ( G i e m ss t a i n i n g 1 0 0 0 x ) 。：C o n l e da n dh e t e ”g e n e i t ya p p e 口e di n t h em i c m n u e l e in 】m Hi n f e c t i o n ( ( ；i e m B a4 ss t a i n i n g ，1 0 0 0 x ) 万方数据