微生物能力验证实验结果分析.pdf

2 0 2职业卫生与病伤2 0 0 5 年第2 0 卷第3 期 J o u r n a l o f O c c u p a t io n a l H e a l t h a n d D a m a g e 2 0 0 5 . V o l . 2 0 N o . 3 2 . 2 经皮急性毒性试验家兔经皮给予低、高剂量 蜂窝纸板专用粘合剂连续观察 7d ，家兔体重增长、 食量正常， 未观察到全身不良 反应，动物一般情况 良 好。局部皮肤未见红斑、水肿、糜烂等刺激反应， 破损皮肤于7 d 后愈合较好， 皮肤光滑。 2 . 3 皮肤刺激试验家兔经皮给予低、高剂量蜂窝 纸板专用粘合剂连续观察 1 4 d ，各组完好皮肤和破 损皮肤均未发现有红斑、水肿、出血点、色素沉着 等刺激反应， 破损皮肤愈合完好。病理组织学检查 可见皮肤表皮层次清楚，真皮内有毛囊， 汗腺， 未 见异常病理组织学改变。 2 . 4 豚鼠皮肤过敏试验蜂窝纸板专用粘合剂低、 高剂量组对豚鼠 皮肤进行致敏和激发接触后2 4 , 4 8 , 7 2 h 未观察到豚鼠皮肤出现红斑、 水肿、破溃等皮 肤过敏反应。也未观察到哮喘、休克等全身过敏反 应。而2 , 4 一 二硝基氯苯组动物出现明显的皮肤红 斑、 水肿等过敏反应， 过敏反应率为8 0 %， 过敏反 应平均分值在3 . 3 一 5 . 0 之间， 属高度致敏性。 3 讨论 外源物是否对生物体造成有害影响， 不仅取决 于这些物体本身的理化特性和机体的敏感性， 还与 接触途径和方式有直接关系。职业性接触外源物， 主要以呼吸道吸人和皮肤接触 2 种途径多见，表现 为局部毒性和全身毒性。蜂窝纸板专用粘合剂作为 一种新材料，目 前尚未见到有关毒性作用的研究报 道。因此首先需要以急性毒性试验作为毒性测量指 标， 以 发现 死亡原因、 靶器官和可能的 作用机制 3 l 0 本试验小鼠经口和家兔经皮急性毒性试验均未观察 到动物出现中毒反应和死亡，小鼠经 口急性毒性 L D S a 4 4 . 0 g / k g ， 属微毒物质， 家兔经皮急性毒性 高剂量已达到常规用蜂窝纸板专用粘合剂的3 倍浓 缩量，动物仍全部存活， 说明该受试物毒性较小。 在生产过程中工人使用蜂窝纸板专用粘合剂主要与 皮肤接触为主， 故我们进行了家兔皮肤刺激性试验 和豚鼠皮肤致敏性试验，旨在观察该受试物对皮肤 的刺激作用和过敏反应， 从而提供毒理学参考信息， 以便工人使用时采取合适的防护措施。实验结果显 示蜂窝纸板专用粘合剂无刺激性、过敏性和全身毒 性作用， 可进一步开发研究并用于工业生产。 4 参考文献 1 李寿棋 . 卫生毒理学基本原理和方法 M .成都:四川 科学技术出版社， 1 9 8 7 . 2 刘毓谷 . 卫生毒理学基础 【 M .北京:人民卫生出版 社，1 9 8 7 . 3 中药新药研究指南 . 药学药理学毒理学 M .北 京:中华人民共和国卫生部药政管理局 . 4 陈奇 . 中药药理学研究方法 M . 北京: 人民卫生出版 社，2 0 0 0 . 5 袁伯俊， 王治乔 . 新药临床前安全性评价与实践 M . 北京: 军事医学科学出版社， 1 9 9 7 . 6 付立杰 . 现代毒理学及其应用 M . 上海: 上海科学技 术出版社， 2 0 0 1 . ( 收稿日 期: 2 0 0 5 - 0 3 一 1 5 ) 实验研究检测技术 微生物能力验证实验结果分析 杨瑾瑞 关键词 微生物; 能力验证; 菌株分离鉴定 中图 分类号R - 3 3【 文献标识码 B 文章编号1 0 0 6 一 1 7 2 X ( 2 0 0 5 ) 0 3 - 2 0 2 - 0 2 能力验证实验是多家实验室分析同一样本并由 质控管理机构( 上级检测机构或参考实验室) 收集和 反馈实验室上报结果并评价实验室能力的过程，可 成都市金牛区 疾病预防控制中 心( 四川 成都 6 1 0 0 3 6 ) 作为一个外部监控指标提示室内质控难以发现的偏 差或系统误差，促进实验室进一步改进工作，提高 质量，是判断和监控实验室能力的有效手段。为确 保 金牛区 疾控中 心微生物检测结果的准确、 可靠、 每年均要参加上级业务部门组织的能力验证工作。 职业卫生与病伤2 0 0 5 年第2 0 卷第3 期 J o u rn a l o f O c c u p a t io n a l H e a l t h a n d D a m a g e 2 0 0 5 . V o l . 2 0 N o . 32 0 3 现 将该中心微生物检测本年度能力验证实验结果报 告如下。 1 材料与方法 1 . 1 标本半固体盲样菌株，自 编号为第0 1 号。 1 . 2 分离、鉴定培养基G N 、营养肉汤、蛋白豚、 S S , M A C , T C B S 、 血平板等购自 北京陆桥技术有限 责任公司， 按照使用说明配制; A P 1 2 0 E生化试剂条 为法国生物一 默里埃公司生产。 2 结果 2 . 1 分离培养 2 . 1 . 1 标本处理涂片染色和增菌同时进行。标本 直接涂片: 取半固 体盲样作革兰染色， 结果为G 一 杆 菌， 初步印象为肠杆菌科细菌。增菌培养: 选择肠 杆菌科的常用增菌液，同时考虑碱性条件下生长的 细菌， 选择碱脉水增菌p H 9 . 2 , p H 8 . 6 。培养情况 见表 t o 表 1 各种增菌培养基中细菌生长情况 增 菌 培 养 基温 度 与 时 间 GN 营养肉汤 碱脉水 一 次增菌p H 9 . 2 二次增菌州 8 . 6 3 6 . 5 1C 2 2 h 3 6 . 5 2 2 h 生 长 情 况 浑浊生长 浑浊生长 3 6 . 5 6 h 3 6 . 5 '- 8 h 不生长 不生长 2 . 1 . 2 分离培养G N增菌液划线接种。将营养肉 汤转种于上述各培养基，经3 6 . 5， 2 2 h 培养后， 其菌落特征见表2 0 表 2 培 养 基 G N增菌液转种各种培养基的菌落特征 3 6 . 5 ， 2 2 h 培养后菌落特征 1 一 3 mm ， 圆形， 凸起， 边缘整齐， 无色半透明，中心 黑色 1 一1 . 5 mm ， 圆 形， 凸起， 边缘整齐， 浅紫色 同S S 1 - - 3 二 ， 圆形， 凸起， 边缘整齐，白色， 迁徙生长， 不溶血 ，板 纸B平 SSM找血 2 . 1 . 3 增菌后形态学检查挑取各平板上的不同菌 落特征的单个菌落，分别涂片作革兰染色，镜检， 均见G 一 杆菌。 2 . 1 . 4 初步生化反应选取可疑菌落接种双糖铁 ( K I A ) ， 结果斜面( K ) 、 底层( A ) , 姚S ( + ) 、 气体 ( + ) 、动力( +) ( 穿刺线同围同浑浊生长) 、叫噪 ( 一 ) 、 脉酶( 十) 。初步考虑为沙门菌属、变形杆菌 属、爱德华菌属、构椽酸菌属。 2 . 1 . 4 确定菌属纯化分离培养 分别接种于普通琼 脂平板、血平板、S S平板上进行纯化培养，经 3 6 . 5 ， 2 0 一2 4 h 培养。结果在普通琼脂和血平板 上呈迁徙生长，薄膜布满整个培养基表面，考虑可 能为变形杆菌。 2 . 2 鉴别实验 2 . 2 . 1 氧化酶实验O X ( 一 ) 。由于该菌有蔓延生 长， 初步显示为变形杆菌，因此选取特征实验、尿 素、苯丙胺酸脱梭酶、鸟氨酸脱梭酶、p i l 噪等实验。 结果尿素( +) ，苯丙胺酸脱梭酶( +) ，鸟氨酸脱竣 酶( + ) ，盯 引 噪( 一 ) 。 2 . 2 . 2 系统生化反应选择A P I 做系统生化反应。 结果O N P G ( 一) , A D H ( 一) , L D C ( 一) 、 O D C ( +) 、 C I T ( + ) , H 2 S ( +) 、 U R E ( +) 、 T D A ( 一) 、 I N D ( 一) 、 V P ( 一) , G E L ( +) G L U( +) , MA N( 一) 、 I N O( 一) 、 S O R ( 一) , R H A( 一) , S A C( 一) 、 ME L( 一) , A MY( 一) 、 A R A ( 一 ) , O X ( 一 ) 。 按照生化图谱数码的编码法， 获 得该菌的数码: 0 7 1 6 0 0 0 ，然后查 A P 1 2 0 E生化图谱 索引手册， 结果菌名为奇异变形杆菌， %i d=9 9 . 9 , T = 0 . 7 5 0 2 . 3 检验结果该能力验证菌株为奇异变形杆菌。 3 讨论 变形杆菌( 奇异变形杆菌、普通变形杆菌) ，属 肠道的正常菌群， 广泛存在于泥土、水和被粪便污 染的物质中，最初只认为是条件致病致病菌。近些 年，由于此菌直接或间接污染的食品而引起的食物 中毒的报道越来越多，因此应引起卫生检验工作者 的高度重视。 变形杆菌引起的食物中毒，除在粪便分离出外， 还应做食物中细菌的数量测定、菌株同一性实验， 在条件允许时做动物实验和特异性抗体的测定。有 利于流行病学医师和卫生医师对食物中毒的判断。 4 参考文献 1 孟昭赫主编 . 食品卫生微生物学检验方法注解 M . 北 京: 人民 卫生出版社， 1 9 8 8 . 2 俞 树 荣主 编. 微生物学和 微生物 学检验 M . 第2 版. 北京:人民卫生出版社. ( 收稿日 期: 2 0 0 5 - 0 8 - 2 5 )