淫羊藿总黄酮对皮质酮诱导免疫功能低下大鼠的保护作用及配伍研究.pdf

中国药理学通报Chi ne s e 例 ia rmac o l ogic a l B u l l e t i n Z O 0 7A u g ; 2 3 ( 8 ) : 1 0 6 1 一 3 ·1 0 6 1· 淫羊蕾总黄酮对皮质酮诱导免疫 功能低下大鼠的保护作用及配伍研究 沈自 尹 ， 吴志军2 ， 于立华2 ， 傅大煦2 ， 黄建华 ( 1复旦大学上海医学院中西医结合研究所， 上海 200 0 4 0 ;2. 上海新药研究开发中心， 上海 201203) 中国图书分类号: R 一 3 3 2 ; R2 8 2 . 7 1 ; R2 8 4 . 1 ; R3 2 2 . 6 1 ; R3 9 2 . 1 2 ; R9 7 7 . 1 1 文献标识码: A 文章编号: 1 001 一 1 9 7 5 ( 2 (X)7 ) 0 5 一 1 0 6 1 一 0 3 摘要: 目的 探讨淫羊霍总黄酮、 知母总皂昔和甘草次酸及 其组合物对皮质酮所致的肾阳虚大鼠肾脏和免疫功能的保 护作用。方法采用皮质酮所致的大鼠肾阳虚模型， 测定不 同配伍方式的淫羊蕾总黄酮、 知母总皂昔、 甘草次酸及其组 合物对其肾脏和免疫功能的保护作用。结果淫羊蕾总黄 酮、 知母总皂昔和甘草次酸配伍使用， 对皮质酮所致大鼠激 素副作用的拮抗效应最佳。结论具有滋阴、 温补肾阳作用 的中药组合物能够有效保护外源性皮质激素作用下的肾脏 和免疫功能， 具有开发为新药的潜力和应用价值。 关键询: 淫羊蕾总黄酮; 知母总皂昔; 甘草次酸; 肾上腺皮质 激素; 副作用 肾上腺皮质类激素的副作用一直制约着该类激 素在临床上的广泛应用， 寻找拮抗该类激素副作用 的化学物质成为新药研发的重要发展方向之一。淫 羊蕾总黄酮( t o t a l fl av o n e s o f e p i m e d i u m ， T F E ) 是中 药材淫羊蕾中 提取的总黄酮成分， 临床显示具有广 泛的药理功能川; 知母总皂昔( t o t a l s a p o n i n ， o f an e m a rr han a ) 是知母中提取的总皂昔成分， 已知该 类成份具有种类多、 活性广的特点川; 甘草次酸 ( G ly c y rr h e t in i c a c id ) 是 从豆 科植物甘草( 勺 叨 了 r h is a u ra le o isFi sc h)中提取的有效成分， 具有抗菌、 抗肿 瘤 及肾 上 腺 皮质激素样作用 ， 结构上与氢化可的 松具有相似性。这3 种提取物本身都具有极大的研 究价值和开发潜力， 本文则研究了由以上3 种提取 物所组成的组合物对皮质酮所致肾阳虚大鼠肾脏和 收稿日 期: 2 0 07一 01 一 30， 修回日 期: 2 007 一 04一 30 基金项目: 国家高技术研究发展计划( 8 63 计划) 资助项目( N 。 2 0 0 2 A A2z32 4 3 ) ; 国家重点基础研究发展规划( 9 73规划) 资助项目( N o 2 0 07C B 5 0 7400) ; 上海市科学技术发展基金 资 助项目 ( N o 0 2 ml g l l o ) 作者简介: 沈自尹( 1 9 28 一 ) ， 男， 教授， 中国科学院院士， Tel : 0 2 1 - 6 2 4 9 0 9 3 4 ; 吴志军( 1 9 66一 ) ， 男， 副研究员， 研究方向: 新药开发， 通 讯作者， T e l : 0 2 1 一 0 8 003 00， E 一 m al l : 。z h ij u n99 9 s i n a . 免疫功能的影响。 1 材料与方法 1 . 1 材料 1 . 1 . 1 动物 Z m o n 健康己 性S D大鼠， 体重2 0 0 - 23 0 9 ， 由 复旦大学实验动物科学部提供， 合格证号 S C X X 一 ( 沪) 2 0 0 2 刃 0 0 2 。 1 . 1 . 2 药品淫羊蕾总黄酮提取物( 总黄酮含量 为62%) ， 知母总皂昔提取物( 总皂昔含量为 60%) ， 甘草次酸( 甘草次酸含量为98%) ， 均由上海 新药研究开发中心提供; 皮质酮对照品， 购自si grna 公司， 批号1 7 7 21; 橄榄油， 购自 上海医药集团化学 试剂公司。 1 . 1 . 3 仪器与试剂B S22 4S 型电子天平， 购自 S arto u s 公司; C orti s o l 测定试剂盒， 购自R o c h e 公 司; P H A ， 购自si gma 公司; H 一 TdR ， 购自 中国 科学院 上海核技术开发公司。 1 . 2 方法 1 . 2 . 1 组合物配伍的药效筛选实验 1 . 2 . 1 . 1 造模药物的配制 将皮质酮( 造模药物) 溶于 灭菌 橄 榄油中， 配 制 成5 9 · L 一 的 工 作浓度。 1 . 2 . 1 . 2 动物分组及处理 将大鼠随机分成5 组， 每组ro只， 分别为正常对照组( N C ) 、 皮质酮模型组 ( M C ) 、 淫羊蕾总黄酮组( A ) 、 淫羊蕾总黄酮+ 知母 总皂普组( A+ B 组， A: B= 3: 4 . 5 ) 、 淫羊蕾总黄酮 + 知母总皂昔 + 甘草次酸组( A+ B+ C组， A: B : C = 3 : 4 . 5: 0 . 0 0 1 4 ) 。 试验时， 分别以1 5 0m g · k g 一 的 剂量灌胃 给 药， 正常对照 组、 皮质酮模型组以 同体积蒸馏水灌胃， 每日1 次， 连续36d 。其中 在第 6 天， 除正常对照组大鼠每天注射同体积橄榄油外， 其它 各 组皮下注 射皮质酮s m g · k g 一 连续30d 造 模。 第36天称重， 氯胺酮麻醉， 股动脉采血， 脱臼处 死， 无菌取出 脾脏及肾 上腺， 进行各项功能测定。 1 . 2 . 1 . 3 测定指标与方法 分离肾 上腺， 称重并计 算肾 上腺指数( 肾上腺重量/100 9 体重) ; 采用同位 素 参 人 法 测 定 淋巴 细 胞 转 化 率( LPR ) ; 采 用C ort i - 50 1 测 定 试 剂 盒 检 测 血 浆中 皮 质 醇的 水 平 ， 具 体 操 作方法参见该试剂盒说明书。 1 ， 2 . 2 3 味药不同剂量配比的药效学研究在明 万方数据 ·1 0 6 2· 中国药 理学通报 Chi nese Pha nnac o l o g l乙 a l 刀 u llet i n 2 0()7 A u g ; 2 3 ( 5 ) 确淫羊霍总黄酮、 知母总皂昔、 甘草次酸3 味药配伍 药效更佳的基础上， 探讨了3 味药配伍不同剂量配 比的量效关系。 1 . 2 . 2 . 1 造模药物的配制同1 . 2 . 1 . 1 。 1 . 2 . 2 . 2 动物分组及处理 将大鼠随机分成5 组， 每组ro只， 分别为正常对照组( N C) 、 皮质酮模型组 ( M c ) 、 高 剂 量组( 给 药剂 量为3 0 0 m g · k g 一 ) 、 中 剂 量组( 给 药剂量为1 50m g · k g 一 ) 和 低剂量组( 给药 剂量为50m g · k g 一 ) 。 造模实验过程同1 . 2 . 1 . 2 。 1 . 2 . 2 . 3 测定指标与方法分离胸腺， 称重并计算 胸腺指数( 胸腺指数二 胸腺重量/100 9 体重) ; 其它 指标与测定方法同1 . 2 . 1 . 3 。 1 . 3 统计学处理采用S PSS10. 0 软件进行统计 学处理。数据以见 士 ， 表示， 统计学分析采用单因素 方差分析， 进行 F检验， 组间有差异再进一步采用 LSD检验。 2 结果 2 . 1 组合物配伍的药效筛选实验组合物配伍的 药效筛选实验结果见T a b l 。结果表明， 淫羊蕾总黄 酮、 知母总皂昔和甘草次酸3 味药配伍可提高皮质 酮大鼠的血浆皮质醇含量， 同时增加皮质酮大鼠的 肾上腺指数， 体现出减轻激素负反馈引起的肾上腺 皮质功能受抑制的良 好作用， 对应用激素后的下丘 脑垂体一 肾上腺一 胸腺轴具有一定的保护作用， 同 时不干预激素免疫抑制的正作用; 而一味药淫羊蕾 总黄酮可提高皮质酮大鼠血浆皮质醇含量水平， 并 增加皮质酮大鼠肾上腺指数， 但对激素抑制淋巴细 胞的免疫抑制有对抗作用。故比较一味淫羊蕾总黄 酮、 二味淫羊蕾总黄酮和知母总皂昔配伍及3 味淫 军 蕾总 黄 酮、 知 母总 皂昔和甘 草次酸3 种配 伍方 式 的实验结果， 显示出3 味配伍方式更为合理， 既不干 预激素免疫抑制作用， 又对激素造成的肾上腺皮质 内抑制具有良 好的保护作用。 2 . 2 3 味药不同 剂量配比的药效学研究 3 味药不 同剂量配比的药效学研究结果见T a b Z 。结果表明， 高、 中、 低3 个剂量配比均可提高大鼠体重和肾上腺 指数; 中、 低剂量配比可提高大鼠胸腺指数; 中剂量 配比可增加血浆皮质醇含量; 由此可见， 中剂量配比 具有较为全面的保护激素作用下的肾脏功能的效 应。同时， 3 个剂量配比均对皮质酮大鼠的淋巴细 胞转化率无影响， 表明3 个剂量配比均不干预激素 免疫抑制的正作用。因此， 通过本实验， 明确了有效 的剂量配比， 即中剂量的3 味药配比 具有更为合理、 全面的拮抗激素副作用的效应。 T a b1 C o mp a rati v e s t u d i eso nP han ， a c o d yna mi c vari a b l e c o m p a ti b l l ity ofcom p o u n ds( 无 士 、 ， n = G ro u P NC MC A A+B A +B+C k Z 一 1 A d ren al i n d e x . 8 5土4. 6 8 . 6 0士6 . 6 7 . 0 8士4 . 7 1 . 1 3士4 . 6 9 . 2 0士3 . 9 5 a c t i o nof 1 0 ) Pla s ma c o rti s o l * 中2 . 5 5士1 . 7 5二1 . 6 7士 0 . 2 2申 1 . 0 3士0 . 2 70 . 9 8士 0 . 2 2 2 . 4 5士0 . 6 6二1 . 6 4士 0 . 1 1 巾 0 . 5 0士 0 . 1 41 . 4 1士 0 . 44 * .0 . 4 2士 0 . 1 51 . 6 5士0 . 1 5. 2416232225 000 气3lf 勺111月1 . P 0 . 0 5 ， 甲 . P 0 . 0 1 哪m o d e l 脚u p . A : t o t alfl avo n e s o f e P i m e - d i u m脚u p ; B : to t als 叩o n i n s ofa n e m a rr ll e n a 脚u p ; C : gl y c y r r l l e t i n i c a c i d O U P 3 讨论 肾上腺皮质激素介导着机体多种重要生理功 能， 如抗炎、 抑制体液免疫等， 因而在临床上被广泛 应用。 但是， 肾上腺皮质类激素具有多种副作用， 包 括引起皮质醇增多症( 肥胖、 满月脸、 多毛、 紫纹、 兴 奋不寐、 易饥多食等) 、 代谢紊乱( 如骨质疏松、 高血 糖、 高血脂、 高血压、 免疫功能低下、 易感染等) ， 从 而严重限制了其自身的长期应用。因此， 开发具有 拮抗这类激素副作用的新药一直是临床和新药研发 领域迫切需要解决的难题。 本文作者一直从事肾阳虚的临床实验研究， 了 解到皮质激素的副作用是由于该类激素对糖、 蛋白 质、 脂肪、 骨的代谢以 及下丘脑垂体一 肾上腺一 胸腺 ( H P A T ) 轴具有抑制效应所致， 并在长期研究中发 现了具有滋阴、 温补肾阳的中药( 淫羊蕾温补肾阳， 知母则滋阴泻火) 拥有对抗外源性皮质类激素副作 用的 功能 一 。 本文针对这种拮抗效应， 通过建立 皮质酮所致肾阳虚大鼠 模型， 进一步探讨淫羊蕾总 T a b Z C 0 m P a r a 廿 ver es ul tso f th e ex Peri m e n tsof山 ffere n t d ose g r o u p rats ( 无 士 5 ， n 二 1 0 ) G r o u P NC MC H i g h d o s e 脚u p M i d d l e d o s e g r l u P 肠wd o s e gr o u P D o s 以雌 · k g 一 1A v o i rd u P o i 以 gThy m u s i n d exA d re n ali n d e x 3 0 8 . 3 6士1 1 . 9 3申 晰 2 6 6 . 5 5士1 4 . 9 4 2 8 2 . 3 6土1 1 . 4 1 . 2 8 8 . 5 5士1 3 . 3 9巾 . 2 9 80 0士1 8 . 1 3二 巧1 . 0 1 士2 6 . 3 3巾 . 9 1 . 5 1士2 8 . 2 3 1 (X) . 7 0士1 4 . 44 1 2 7 . 3 9士1 8 . 4 1 二 1 4 4 . 3 8士 2 5 . 4 2申 . 1 6 . 4 5土 6 . (X) 申 . 7 . 5 2土0 . 4 2 1 8 . 0 7士3 . 8 3 幽 巾 1 7 . 6 1 士 44 6二 1 3 . 9 9士3 . 4 0巾 申 1 . 30 士0 . 2 3. 0 . 9 6士0 . 1 2 0 . 9 1 士0 . 0 9 0 9 7士0 . 1 2 1 . 1 4士0 . 1 0 P l asm ac o rt i s o l 36 8士2 . 3 0， 1 . 9 4士1 . 2 7 2 . 9 8士1 . 7 5 4 . 4 8士 2 . 6 7. * 2 . 9 9士1 . 9 0 30015050 * P 0 . 0 5 ， 二P 0 . 0 1 仍m o d e l 脚u p 万方数据 中国药理学通报Chi nese Pha r7na c o logi c a l B o l le t i n Z (XJ7 A u g ; 2 3 ( 8 ) ·1 0 6 3· 黄酮、 知母总皂昔和甘草次酸3 种组合物的配伍情 况及剂量关系对该模型大鼠肾脏和免疫功能的影 响。 研究结果表明， 淫羊蕾总黄酮、 知母总皂昔和甘 草次酸3 味药配伍体现出具有拮抗激素负反馈引起 肾上腺皮质功能受抑制现象的效应， 对应用激素后 的H P A T 轴也具有一定的保护作用， 同时又不干预 激素免疫抑制的正作用。实验结果还显示出， 3 味 药组合物的中剂量配比 就综合角度而言， 具有更为 全面拮抗激素副作用的效应。因而， 通过本研究， 明 确了有效的3 味药组合物剂量配比， 为与肾上腺皮 质类激素联合用药、 消除其副作用奠定了新药研究 药效学筛选的数据基础。淫羊蕾总黄酮、 知母总皂 昔和甘草次酸组合物对激素副作用的拮抗机理仍有 待进一步深人研究。 参考文献: 沈自 尹. 淫羊霍总黄酮对应一个药靶的探索过程【 J . 中药新 药与临床药理， 2 003 ， 1 4 ( 5 ) : 2 93 一 5 . S h e n Z Y . 反d esofs tu d i e s o n c orre s p ond i n g ac t i o n t a r g e t OfE p i - m e d i u mfl av on o id s J J . 乃 叼 ChinD 而 呵双 占曰 几Pha 0 1 ， 2 (X)3 ， 1 4 ( 5 ) : 2 9 3 一 5 . 孟志云， 徐绥绪， 李 文， 等. 知母的皂昔成分 J . 药学学 报， 1 9 9 9 ， 34( 6 ) : 4 5 1 一 3 . 4 汪谦.现代医学实验方法【 M .北京: 人民卫生出版社， 1 9 9 7 : 6 9 0一 2 . 4 W an g Q E 生 尹 e ri men t t echn 垮 ues ofn “ 洲 众 ” i medici ne M . Pek i n g : P eo P l e M e d ic alPub l i s h i n g H o u s e ， 1 9 9 7 : 6 9 0 一 2 【 5 朱辟疆. 肾病综合征血浆A C T H 、 皮质醇与中医证型关系的研 究 J j · 浙江中 西医 结 合杂 志， 1 9 9 7 ，7 ( 4 ) : 1 9 3 一 4 . 5 Z h uPJ C orre la t i o nb e 重加 e e nt h eA C T Ha n dc orti sol le ve l si n p l as mofP at i e n t s w i t hn e P h 以i c s y n d ro m e a n dt ra d i t i o n alC h i n e s e m e d i c i n e 叮 n d ro m e s ty p e s J . Zheji a 咭 J ln 比 g r TradChi n林 7e 3 t Med ， 1 9 9 7 ， 7 ( 4 ) : 1 9 3 一 4 . 【 6 沈自 尹 肾的研究 M 上海: 上海科学技术出版社， 1 9 90: 1 2 9一9 0 . 6 s h e n z y . s t ud)归 O n th e k 记 哪 M . s h an g h ai : s h an gha i s c i e ni i fi c and t e c h n i c alp u b l i s h e rs ， 1 9 9 0 : 1 2 9 一 9 0 【 7 沈自 尹， 陈瑜， 淫羊蕾总黄酮与补肾复方对皮质酮大鼠T 细胞凋亡相关基因群调控的对比研究【 J .中国免痰学杂志， 2 (X)2 ， 1 8 ( 3 ) : 2 0 . 7 s h e n z y ， C h e n Y . C o n l p arat i v e s t u dyofE F an d k i d n e y 一 t o n i尔n g re c ip e s on re 即l a t o rye 旋c t ofTl y m p hoc yt e s 叩叩t o s i s 罗 n e si n C o rt i c o s t e ro n e 一 t re at e d ra t s J . Chi n J Imm u no l ， 2 002 ， 1 5 ( 3 ) : 2 0 . 仁 8 王文健， 沈自尹， 张新民， 等， 补肾法对老年男性下丘脑一 垂 体一 性 腺 轴 作用的临 床和 实验研究 J ， 中医 杂志， 1 9 86， 27 ( 4 ) : 3 2 . 8 W a n g WJ ， s he n z y ， z h an g X M ， e t al ， C l i ni c al a n d ex p e “ m e n t al stu巾onthe e ffec tsofki d n e y 一 toni fy i ng加th e fu nc ti onofh yP ot ha - l amic 一 Pi tu i t a 叮 · go n a d 面。 ofse n il e men J . J矛 叨 dchin人 介 d ， 1 9 8 6 ， 27( 4 ) : 3 2 . 【 9沈自 尹， 王文健， 张新民， 等. 补肾法改善老年肾上腺皮质功 能的 临 床 与 实 验 研 究 J . 中 国中 西 医 结 合杂志， 1 9 89， ， ( 9 ) : 8 . 9 She n z Y ， W an g WJ ， z h an g XM ， etal .毛 l i n i c alan d e x p e ri men t a l s tu d y oni m p ro v e ment s ofk i d n e y 一 t oni fy i n g met b odtoadre n oc orti c al fo n c t io n s oft h e el d e rlv J 了 . chinJ 知 渡 喻 Trad 环 乞 3 乙 j协 J ， 1 9 5 9 ， ， ( 9 ) : 8 . M e n g ZY， X uSX ， UW， ane m a rr h ena as p h ode lo i d e s ( 6 ) : 4 5 1 一 3 . e t al . S a pon in s 加mt h e 而zo m e o Of b 罗 J . A c taP h a 而 S in ， 1 9 9 9 ， 34 ，Jes仁J，J ，门乙 户胜胜.rJ 【 3 谢世荣， 赵 洁， 刘 琳， 等. 甘草次酸的研究与展望 J j . 大 连大学学 报， 2 0(5 ， 2 6 ( 4 ) : 85一 8 3 x i e S R ， Z h a o J ， U u L ， etal . S t u 街a n d ex p e c t at i o n ofG ly c y rr h et - i c acid J . J Dal 她 nUn动 ， 2 0 0 5 ， 2 ( 4 ) : 8 5 一 8 . S tud y the P r o t e c ti o na nd c o m b i n a ti o no nthe t o t alfi a v o nes o f e P i m e di um t othe i m mu n o d e fi c i e n c yr a t s i n d u c e db yc o r ti c o s t e r o n e s H E N Z i 一 y i n ， W U Zhi 一 u n Z ， Y UU 一 h u a Z ， 刊 n a 一 x u Z ， H u A N c j i a n 一 h u a ， ( 1 . 五 “ e a rc h 加t i t ute ofIn t e g r a t i o n ofTr a di t i o nal Chi nese a nd 怀 7e 3 t e rnMedici ne声 丙 心 几 g h a i Med i c a l COl l e g e ， 尸 记。 nUn动 e rs i ty ， 2 0( 刃 4 0 ， Chi n a ; 2 ， Sha n g 几 a i Ce心 e r ofR e 3 e a rc h t o t als 即o n i n s ofa n ema rrhe n a ; g l y c y rrhe t i n i c a c i d ; c o rt i n ; s i d e e ffec t 万方数据