淋巴细胞缺乏状态对白血病特异性细胞毒性T淋巴细胞体内抗白血病效应的影响.pdf
中华血液学杂志2 0 0 5 年8 月第2 6 卷第8 期C h in J H e m a t o l , A u g u s t 2 0 0 5 , V o l 2 6 , N o . 8 ·论 著· 淋巴细胞缺乏状态对白血病特异性细胞毒性 T 淋巴细胞体内抗白血病效应的影响 楼敬伟杨建民 陈莉贾 新颜章卫平王健民 【 摘要】 目 的 探讨淋巴细胞缺乏状态对白 血病特异性细胞毒性T 淋巴细胞( C T L ) 体内增殖和 抗白 血病作用的影响。方法 采用6 街 照射C 5 7 B L J 6 小鼠 诱导淋巴细胞缺乏状态， 分别经尾静脉注 射E G F P ' C 5 7 B L / 6 小鼠 脾T 淋巴 细胞和白 血病特异性C T L ， 随后皮下接种1 x 1 护F B L 3 白 血病细胞。 用流式细胞仪分析小鼠外周血E G F P + 细胞及T 淋巴细胞亚群比例， 同时观察脾T 淋巴细胞和自血病 特异性C T L 对随后接种的F B L 3 白 血病细胞的杀伤作用。结果在淋巴细胞缺乏状态下输人的脾T 淋巴细胞和自 血病特异性C T L 均可得到有效扩增( 第1 8 天输注脾T 淋巴 细胞组和输注C T L 组外周血 中E G F P 十 细胞比 例分别为2 8 . 8 1 %和4 2 . 2 4 %) ， 但脾T 淋巴细胞对随后接种的白血病细胞生长无抑 制作用， 而白血病特异性C T L 在淋巴细胞缺乏受体小鼠体内扩增速度更快， 扩增的倍数更高， 并具有 显著增强的抗白血病作用。结论诱导受体淋巴细胞缺乏可显著增强外源性 C T L 输注的疗效。 【 关键词I 树突细胞; 免疫疗法: 淋巴细胞缺失; T 淋巴细胞， 细胞毒性 R e c i p i e n t l y m p h o p e n i a s t a t e e n h a n c e s t h e e x p a n s i o n a n d a n t i - l e u k e m i a e f f e c t o f l e u k e mi a s p e c i f i c c y t o - t o x i c T l y m p h o c y t e s L O U J i n g - w e i , Y A N G P a n - m i n , C H E N L i , J I A X i n - y a n , Z H A N G W e i - p i n g , W A N G J i a n - m i n . D e p a r t m e n t o f H e m a t o l o g y ， C h a n g h a i H o s p i t a l o f S e c o n d M i l i t a r y M e d i c a l C o l l e g e , S h a n g h a i 2 0 0 4 3 3 , C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r ; W A N G J i a n - m i n A b s t r a c t O b j e c t i v e T o d e t e r m i n e t h e r o l e o f r e c i p i e n t l y m p h o p e n i a s t a t e i n t h e e x p a n s i o n a n d f u n c t i o n o f l e u k e m i a s p e c i fi c c y t o t o x i c T l y m p h o c y t e s( C T L s ) . Me t h o d s C 5 7 B L / 6 m i c e w e r e i n d u c e d t o l y m p h o p e n i a w i t h 6 G y t o t a l b o d y i r r a d i a t i o n . S p l e e n T c e l l s o r l e u k e m i a s p e c ifi c T c e l l s f r o m E G F P ' t r a n s - g e n i c C 5 7 B L / 6 - E G F P m i c e w e r e a d o p t i v e l y t r a n s f e r r e d b y i n t r a v e n o u s i n j e c t i o n . T h e m i c e w e r e c h a l l e n g e d s u b c u t a n e o u s l y w i t h 1 x 1 0 6 F B L 3 l e u k e m i c c e l l s a t d a y 2 a f t e r i r r a d i a t io n . T h e p e r i p h e r a l W B C c o u n t , p e r - c e n t a g e o f E G F P ' c e l l s , s u b s e t s o f T c e l l s a n d t u m o r s i z e s w e r e m o n i t o r e d . R e s u l t B o t h o f t h e s p l e e n T c e l l a n d l e u k e m i a s p e c i f i c C T L p r o l i f e r a t e d e f f i c i e n t l y w i t h t h e p e n c e n t a g e o f E G F P ' c e l l s o f 2 8 . 8 1 % a n d 4 2 . 2 4 %， r e s p e c t i v e l y , a f t e r i n f u s e d i n t o l y m p h o p e n i c r e c i p i e n t s . H o w e v e r , s p l e e n T c e l l s h a d n o a n t i - l e u k e - m i a e f f e c t r e g a r d l e s s o f i t s e x p a n s i o n . I n c o n t r a s t , l e u k e m i a s p e c i f i c C T L s s h o w e d a m o r e r a p i d a n d e x t e n s i v e e x p a n s i o n u n d e r t h e c o n d i t i o n o f l y m p h o p e n i a a n d a e n h a n c e d a n t i - l e u k e m i a i m m u n i t y . C o n c l u s i o n T r a n s f u - s i o n o f l e u k e m i a s p e c i fi c C T L s u n d e r l y m p h o p e n i a s t a t e c o u l d b e a f e a s i b l e s t r a t e g y t o e x p a n d l e u k e m i a s p e c i f - i c C T L s a n d g e n e r a t e f a v o r a b l e a n t i - l e u k e m i a e f f e c t i n v i v o . K e y w o r d s I D e n d r i t i c c e l l ; I m m u n o t h e r a p y ; L y m p h o c y t e d e p l e t i o n ; T - l y m p h o c y t e s , c y t o t o x i c 目 前对肿瘤的细胞免疫治疗的研究多集中在对 肿瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞( C T L ) 的诱导 和体外扩增方面， 包括细胞因子和共刺激分子基因 与抗原基因联合转导的免疫基因治疗、 采用不同细 胞因子和免疫分子的单克隆抗体提高 C T L体外扩 增效率以及次要组织相容性抗原特异性C T L T 细胞 受体( T C R ) 的 克隆 等 ， 而对肿瘤细胞特异性C T L 在体内增殖的动力学参数、 发挥细胞毒作用的条件 及其优化方法等影响细胞免疫治疗疗效的关键因 素 则 较少涉及。 我们采用诱导宿主淋巴细胞缺 乏状态联合白血病特异性 C T L 输注， 显著改善了白 血病特异性C T L 的抗白 血病作用， 为改善细胞免疫 治疗的临床疗效提供了新的思路。 材料和方法 基金项目: 国家“ 8 6 3 ” 计划资助项目 ( 2 0 0 2 A A 2 0 5 0 5 1 0 ) 作者单位: 2 0 0 4 3 3 上海， 第二军医大学长海医院血液科 通信作者: 王健民， E - m a i l ; j m w a n g m e d m a i l . c o m . c n 1 主要材料小鼠红白血病 F B L 3细胞株由第二 军医大学免疫教研室惠赠。C 5 7 B L / 6 小鼠购自中国 中华血液学杂志2 0 0 5 年8 月第2 6 8 期C h i n J H e m a t o l , A u g u s t 2 0 0 5 . V o l 2 6 , N o . 8 科学院上海实验动物中心; C 5 7 B L / 6 - E G F P 小鼠为 转增强型绿色荧光蛋白( E G F P ) 基因的C 5 7 B L / 6 小 鼠， 其所有细胞均表达增强的绿色荧光， 由 第二军医 大学细胞生物学教研室提供。R P M I 1 6 4 0 培养基为 美国G i b c o 公司产品， 新生牛血清为杭州四季青生 物工程材料有限公司产品( 5 6灭活3 0 m i n ) 。完 全培养液用 R P M 1 1 6 4 0 十 1 0 %新生牛血清配制。细 胞因子G M - C S F 购自 美国R & D 公司， I L - 4 购自P e p - r o t e c h公司。P E或 F I X 标记的抗 鼠 C D 3 , C D 4 , C D 8 抗体购自S c i e n c e t e c h 公司。 2 研究方法 2 . 1 骨髓单个核细胞来源树突细胞( D C ) 的培养: 取4 - 6 周龄雌性 C 5 7 B L / 6小鼠， 颈椎脱臼法处死 后常规分离股骨和胫骨， 用完全培养液制备密度为 1 x 1 0 6 / m l 骨髓单个核细胞悬液， 分别加人5 n 留 m l 和2 n g / m l 的重组鼠G M - C S F 和I L 1 1 ， 充分混匀后按 每孔3 m l 加至6 孔板中， 置3 7 - C , 5 %C O : 培养箱中 在饱和湿度条件下培养， 隔日 半量换液， 第7 天换液 时将G M - C S F 因子浓度减至2 n 留m l ， 第9 天收获培 养板中的悬浮D C 备用。 2 . 2 肿瘤细胞冻融产物的制备: 取处于对数生长 期的F B L 3细胞悬液4 0 m l ， 调整细胞密度至 1 x 1 0 ' / m l ， 置4 2 水浴热休克处理I h 后将细胞悬液 移至多个2 m l 冻存管中， 液氮、 3 7 水浴各1 5 m i n , 经6 个循环反复冻融， 用孔径为0 . 2 2 R m滤器滤过 后备用。 2 . 3 白血病抗原的负载: 收集培养第8 天的D C ， 按 肿瘤细胞冻融产物与 D C比例为5 : 1 加人经热休 克处理的F B ”冻融产物( F B L 3 - H S ) ， 置3 7, 5 % C O : 培养箱中培养8 h 后收集D C , 1 5 0 0 r / m i n 离心 1 0 m i n 后弃去上清， 用无菌P B S 冲洗2 次备用。 2 . 4 E G F P + 脾T淋巴细胞的制备: 颈椎脱臼法处 死C 5 7 B L / 6 小鼠， 常规灭菌后无菌分离脾脏、 制备 脾 单 个 核细 胞， 在 完 全 培 养 液中 置3 7 9C , 5 % C 0 2 培 养箱中培养9 0 m i n ， 轻柔地吸取非贴壁细胞， 调至4 x 1 0 ' / m l 。 取0 . 5 m l 加至经5 m l 3 7 预热的完全 培养液预先冲洗的尼龙毛柱中， 随后加人0 . 2 m l 的 完全培养液， 置3 7 C , 5 % C 0 2 、 饱和湿度培养箱中 孵育1 h 后， 用3 7预热的完全培养液缓慢洗脱， 收集洗脱的细胞， 1 5 0 0 r / m i n 离心1 0 m i n 后弃去上 清， 用完全培养液洗涤1 次后作为脾T 淋巴细胞备 用， 用锥虫蓝染色后计数并测定细胞的活性， 用流式 细胞仪检测其C D 3 ' , C D 8 + 和C D 4 + 细胞比例。 2 . 5 F B L 3 特异性 C T L 的体外扩增: 取上述经尼龙 毛柱纯化的E G F P 十 脾T 淋巴细胞， 配成1 x 1 0 6 / m l 的细胞悬液， 按D C与T 细胞的比例1 : 1 0 加人经 F B L 3 - H S 冲击的D C ( 3 0 份 照射后) ， 以每孔3 m l 接 种于6 孔板中， 每日 观察细胞形态的变化， 至培养液 变为橙红色时半量换液， 第 7天用相同数量的 F B L 3 - H S 重复冲击 1 次， 在第 1 0天加人 1 0 0 U / m l 的I L - 2 ， 在培养第 1 4天用流式细胞仪检测 T细胞 C D 3 , C D 8 + 和C D 4 十 细胞比 率， 并用乳酸脱氢酶释 放法检测其对白 血病细胞的细胞毒性作用。 2 . 6 小鼠淋巴细胞缺乏状态的诱导: 取6 一 8 周龄 雌性 C 5 7 B L / 6小鼠1 2只， 按每组4只随机分成3 组。在1 8恒温清洁级动物饲养室中适应5d 后 用 60 c 。 进行全身照射， 照射剂量分别为2 , 4 , 6 G y ( 照射距离1 2 3 c m ， 剂量率1 8 . 6 5 c G y / m i n ， 照射时 间分别为6 4 3 , 1 2 8 7 和1 9 3 0 s ) ， 从照射前1 d 开始 隔日 监测小鼠血常规变化。 2 . 7 白血病特异性 C T L的体内杀伤效应: 取6一 8 周龄的雌性 C 5 7 B L / 6 小鼠2 0只， 按每组5只随机 分成4 组， 对其进行6 脚 全身照射并在照射后第1 天和第3 天分别经尾静脉注射1 x 1 0 7 ( 0 . 3 m l ) C 5 7 B L / 6 - E G F P白血病特异性C T L 或小鼠脾T 淋巴 细胞， 设单次注射C T L 和不注射C T L 空白对照。于 照射后第2 天在小鼠右背中部近腹侧经皮下注射处 于对数生长期的F B ”细胞1 x 1 0 6 ( 0 . 3 m l ) 。 每2 d 用游标卡尺测量并记录瘤块大小， 按长径 x 短径 x 厚径计算瘤块体积， 每6d观察小鼠的体重和血 常规变化， 如小鼠在实验过程中死亡， 记录其具体的 死亡时间( d ) 和死亡时瘤块大小。 2 . 8 E G F P 十 细胞监测: 在第2次经尾静脉注射脾 单个核细胞后2 h ( 第3 天) 和第9 , 1 5 , 2 1 天分别经 球后静脉取血1 2 0闪， 其中2 0国置血细胞稀释液 0 . 5 m l 中 送检血常规， 另1 0 0闪置肝素抗凝管中， 加人抗C D 3 和C D 8 单抗各5 闪， 充分混匀避光结合 2 0 m i n 后转移至流式细胞仪专用检测管中， 加人5 m l 红细胞裂解液， 混匀后避光静置8 m i n , 1 0 0 0 r / m i n 离心6 m i n 后弃去上清， P B S 冲洗 1 遍后用0 . 3 m l P B S 重悬细胞， 上流式细胞仪检测。 3 统计学处理采用 S P S S 1 1 . 0 统计软件进行统 计分析。两组间计量资料的比较采用 t 检验， 计数 资 料的 比 较 采用扩检验。 多 组 数据间 采 用单因 素 方差分析。 结果 F B L 3 特异性 C T L的体外扩增每只小鼠通常 中华血液学杂志2 0 0 5 年8 月第2 6 卷第8 期C h i n J H e m a t o l , A u g u s t 2 0 0 5 , V o l 2 6 , N o . 8 两次C T L 输注组 礴一脾T细胞输注组 一单次C T L 输往组 60402000 1土月111一es 闷、卜OTX 攀 8 0卜/ 1/二 下1/1 g -, 6 0r/毛 / / 注 产4 0 卜/一 J 公 tl，一碑沪吧二户代班 日 叫。八1， 二 护 卜 沪 气 奋 尹 产1 W 2 0 f “一 口乍右=钾=千一-气里 W八 - - - - J ， V_ L 4 6吕1 0 1 1 1 4 1 6 1 8 细胞输注时间 ( d) 图1 T淋巴细胞输注后不同时间小鼠外周血 E G F P + 细胞计数的动态变化 体积显著小于其它各组， 而脾 T淋巴细胞输注组与 空白 对照组比较差异无统计学意义。但单次 C T L 输注组肿瘤体积显著小于空白对照组。观察至接种 第2 3 天， 两次C T L 输注组小鼠均存活， 而脾T 淋巴 细胞输注组、 空白对照组小鼠均已死亡， 单次 C T L 输注组尚有2 只小鼠存活， 且其肿瘤已逐步缩小。 一 . 卜两次C r L 输注组 - 任 卜脾T细胞输注组 ，单次C T L 输往组 - e r 空白对照组 0a05050 3221上10 。弓礴琴僳孟 可获得1 X 1 0 $ 左右的脾单个核细胞， 经流式细胞仪 检测其E G F P + 细胞比例达9 8 %以上， 经尼龙毛柱富 集后C D 3 十 细胞比例可达( 9 6 . 0 1 1 1 . 4 2 ) % ， 其中 C D 8 十 细胞比例为( 4 3 . 2 2士1 . 4 9 ) %。在体外经 F B L 3 冻融产物负载的D C 联合I L 一扩增后， 用流式 细胞仪检测F B L 3 特异性 C T L中C D 3 + 细胞比例为 ( 9 8 . 1 3 1 0 . 4 5 ) %， 其中 C D 8 + 细胞比例上升到 ( 7 6 . 5 7士 5 . 1 1 ) %( P 0 . 0 1 ) 。 2 淋巴细胞缺乏状态小鼠模型的建立小鼠经2 , 4 和6 G y 全身照射后对外周血常规的连续观察发 现， 4 G y 全身照射即可使小鼠处于淋巴细胞缺乏状 态( 淋巴细胞计数 0 . 5 x 1 0 9 / m l ) 达1 2 d 以上， 6 G y 组照射后第3 天即可达到淋巴细胞缺乏状态， 其 淋巴细胞缺乏程度重于4 G y 组， 且可持续2 周以 上， 同时所有小鼠均可存活。因而在实验中我们用 6 G y 全身照射诱导受体小鼠淋巴细胞缺乏状态。 3 E G F P + 细胞在小鼠体内的增殖各组 E G F P ' 细 胞绝对值( 白细胞数x 淋巴细胞比例x E G F P 十 细胞 比 例) 的变化见图1 。在输注后2 h ， 各组E G F P + 细 胞基础值均较低， 组间差异无统计学意义。随后 E G F P + 脾T 淋巴细胞和C T L 在淋巴细胞缺乏小鼠 体内均可得到有效扩增。输注 C T L细胞的两组 E G F P 十 细胞增殖的速度和幅度均大于输注脾 T淋 巴细胞组。输注后第 1 8天，两次 C T L输注组 E G F P + 细胞比例、 绝对值， C D 3 十 和C D 8 + 细胞绝对 值均高于输注脾T 淋巴细胞组( P值均 0 . 0 5 ) ， 而 单次输注C T L 组小鼠E G F P + 细胞比例和绝对值在 接种后第 1 8 天达到各组小鼠的最高水平( 见表1 ) 0 4 E G F P + 细胞的体内杀伤效应所有小鼠于第5 天开始可在接种部位触及肿瘤结节， 第6 天开始记 录肿瘤体积， 不同时间点各组小鼠的平均肿瘤体积 见图2 。可见在接种前 1 2 天， 各组小鼠肿瘤体积差 异无统计学意义， 两次C T L输注组小鼠肿瘤体积在 接种第 1 4 天后开始逐渐缩小， 而接受单次 C T L 输 注组、 接受脾T 淋巴细胞输注组和空白对照组小鼠 的肿瘤体积都呈单向上升趋势， 并在第1 4 天后显著 加速。 在接种第1 8 天， 两次C T L 输注组小鼠肿瘤 6 8 1 0 1 2 1 4 1 6 1 8 2 0 接种时间(d) 图2 接受6 G y 照射的各组小鼠 肿瘤生长的情况 讨论 具有肿瘤杀伤作用的T细胞在患者体内的生 存和有效扩增已经成为限制细胞免疫治疗疗效的关 键因 素之一。 Y e e 等 在研究中 发现正常状态下输 人的肿瘤特异性 C T L在体内的半衰期只有 1 周左 右， 即便同时给予 I L - 2 促进其增殖， 仍只能延长至 2 . 5 周， 提示输人的T 淋巴细胞需要其他因素的辅 表 1 T 淋巴细胞输注后第 1 8 天小鼠外周血中E G F P 十 细胞分布( x 士 、 ) 组别样本数 E G F P + 细胞比例 ( %) E G F P + 细胞绝对值 ( x 1 0 7 / L ) E G F P 十 C D 3 十 细胞E G F P C D 8 十 细胞E G F P 十 C D 4 + 细胞 ( %)( %)( %) 两次 C T L 输注组 脾 T 淋巴细胞输注组 单次 C T L 输注组 4 2 . 2 4 1 1 . 9 5 2 8 . 8 1 11 3 . 2 0 5 7 . 0 2+6 . 9 4 1 0 7 . 9 4士 2 5 . 1 3 6 0 . 5 7 1 2 7 . 3 3 1 1 4. 2 7士4 5 . 4 3 中 3 . 5 3 1 1 4 . 7 3 2 9 . 8 9 +1 0 . 6 4 3 2 . 6 9士1 6. 5 8 2 2 . 4 3 1 9 . 7 0 1 1 . 0 9 13 . 6 4 1 0 . 1 4士9 . 4 6 2 2 . 1 0士6 . 7 4 1 8 . 8 0士9 . 1 3 2 2. 5 5 1 7. 21 中华血液学杂志2 0 0 5 年8 月第2 6 卷第8 期C h i n J H e m a t o l , A u g u s t 2 0 0 5 , V o l 2 6 , N o . 8 助才能在受体体内增殖以发挥治疗效果。在预实验 中， 我们发现对未经照射的小鼠注射同等数量的脾 T 淋巴细胞， 1 0 d 后其外周血E G F P + 细胞比例已降 至0 . 5 %以下， 与文献报道的较为相近。 为便于对输注的T淋巴细胞在体内的增殖和 分布状态进行准确的监测， 我们建立了以转E G F P 基 因的C 5 7 B L / 6 小鼠为供体， 以普通C 5 7 B L / 6 小鼠为 受体的实验体系。通过这一系统， 只要对受体小鼠 的标本， 如骨髓、 脾脏、 外周血等进行流式细胞仪检 测， 即可通过E G F P + 细胞的比例明确供体来源细胞 的比例和分布。 在本研究中， 我们通过诱导供体淋巴细胞缺乏 状态， 使输注的脾T 淋巴细胞和C T L 得到了有效的 扩增。在输注后第 1 8 天输注脾T淋巴细胞组和输 注C T L组外周血中E G F P + 细胞比例仍分别高达 2 8 . 8 1 %和4 2 . 2 4 %， 对E G F P + C D 3 + 和E G F P + C D 4 + 细胞检测表明， 各细胞亚群都得到了有效扩增， 提示 该增殖为多克隆性， 进一步证实了淋巴细胞缺乏状 态 是 诱导 输注的 脾细 胞增 殖的 主 要 原因 之 一。 研究中我们发现在相同的淋巴细胞缺乏状态 下， 输入F B L 3 特异性 C T L和小鼠脾T细胞扩增的 效率存在显著差异， 前者 E G F P 十 细胞的绝对值和其 中的C D 8 + 细胞数均显著高于后者， 提示在淋巴细 胞缺乏的 诱因外， 对于致敏的脾T 淋巴细胞尚存在 另外的增殖驱动因素。对肿瘤体积的观察结果表 明， 所有接受脾T淋巴细胞输注和空白对照的小鼠 肿瘤体积均呈直线上升趋势， 并且在接种后的2 3 d 内全部死亡， 提示同基因脾 T细胞的自我平衡性扩 增并不能诱导有效的抗白血病效应。而两次输注 C T L 组小鼠肿瘤体积在第1 4 天前后开始迅速减小， C T L 在体内的增殖高峰与肿瘤开始消退的时间相吻 合， 最终所有小鼠均无瘤存活， 提示这一增殖同时具 有白 血病特异性。因此白血病特异性 C T L可能是 在淋巴细胞缺乏状态和肿瘤抗原的双重驱动下， 获 得增殖优势， 并且后者可被自 我平衡性扩增驱动而 进一步放大， 从而表现出显著增强的抗白血病作用。 两次输注 C T L 组小鼠的C D 8 + 细胞增殖的速度显著 快于其它实验组小鼠， 同时产生显著的抗白血病作 用， 间接证实了这一可能， 并可认为是其抗白血病效 应强于脾 T 淋巴细胞的主要原因。 在研究中我们发现单次经尾静脉注射1 x 1 0 7 C T L的小鼠， 尽管其肿瘤体积在前 2 0 d呈直线上 升， 但仍明显小于普通脾细胞治疗组和空白对照组， 且与后者相比差异有统计学意义， 并且其C D 8 + 细 胞数和E G F P + 细胞数仍在持续上升中。接种后第 2 3 天， 接受脾T 淋巴细胞输注和空白对照的小鼠均 已死亡， 而该组仍有2 只小鼠存活， 且其肿瘤体积已 明显缩小， 说明其抗白血病作用出现较为缓慢， 主要 为输注的脾细胞数量不足所致， 说明一定数量的白 血病特异性 C T L是获得显著的抗白血病作用的保 证。 目 前， 应用 D C或肿瘤特异性 C T L的免疫治疗 已经在临床逐步开展， 但在临床试验中其结果往往 不够理想t 。 我们希望通过这一模型， 验证采用诱 导宿主淋巴细胞缺乏状态， 在体内进一步扩增输注 的白血病细胞特异性 C T L ， 从而增强其抗白血病效 应这一设想的可行性。而在实际的应用中， 可采用 T I L 培养产物、 体外诱导的白血病特异性 C T L 等多 种效应细胞， 采用全身照射和( 或) 联合化疗， 以及 应用T细胞特异性单抗， 如抗胸腺细胞球蛋白、 抗 C D 5 2 单克隆抗体( C a m p t h - 1 H ) 等诱导淋巴细胞缺 乏状态， 同时降低肿瘤负荷， 随后通过不同来源效应 细胞的输注， 在体内有效扩增肿瘤特异性C T L ， 增强 其 抗肿瘤效应同。 这一方法的成功， 将为改善以 D C为基础的免疫治疗和以供体淋巴细胞输注为基 础的过继性细胞免疫治疗的疗效提供行之有效的解 决方案， 从而为肿瘤的免疫治疗提供有益的借鉴。 参 考 文 献 M o r o n G , D a d a g l i o G , L e c l e r c C . N e w t o o l s f o r a n t i g e n d e l i v e ry t o t h e M H C c l a s s I p a t h w a y . T r e n d s I m m u n o l , 2 0 0 4 , 2 5 : 9 2 - 9 7 . Z h o u Y , B o s c h M L , S a l g a l l e r M L , e t a l . C u r r e n t m e t h o d s f o r l o a d i n g d e n d r i t i c c e l l s w i t h t u m o r a n t i g e n f o r t h e i n d u c t i o n o f a n t i t u m o r i m m u - n i t y . J I m m u n o t h e r , 2 0 0 2 , 2 5 : 2 8 9 - 3 0 3 . Y e e C , T h o m p s o n J A , B y r d D , e t a l . A d o p t i v e T c e l l t h e r a p y u s i n g a n t i g e n - s p e c i f i c C D 8 +T c e l l c l o n e s f o r t h e t r e a t m e n t o f p a t i e n t s w i t h m e t a s t a t i c m e l a n o m a : i n v i v o p e r s i s t e n c e , m i g r a t i o n , a n d a n t i t u m o r e f f e c t o f t r a n s f e r r e d T c e l l s . P r o c N a t l A c a d S c i U S A , 2 0 0 2 ， 9 9 : 1 6 1 6 8 - 1 6 1 7 3 . Wu Z , B e n s i n g e r S J , Z h a n g J , e t a l . H o m e o s t a t i c p ro l i f e r a t i o n i s a b a r r i e r t o t r a n s p l a n t a t i o n t o l e r a n c e . N a t M e d , 2 0 0 4 , 1 0 : 8 7 - 9 2 . K a w a k a m i Y . D e v e l o p m e n t o f i m m u n o t h e r a p y f o r c a n c e r : l e s s o n s 丘o m 2 ( 1 ( 1 4 me l a n o ma r e s e a r c h . N i h o n R i n s h o Me n e k i G a k k a i K a i s h i 8 7 一8 . ， W u n d e r l i c h J R , R o b b in s P F , e t a l . C a n c e r r e g r e s s i o n a n d a u t o i m m u n i t y i n p a t i e n t s a f t e r c l o n a l r e p o p u l a t i o n w i t h ant it u m o r l y m p h o c y t e s . S c i e n c e , 2 0 0 2 , 2 9 8 : 8 5 0 - 8 5 4 . ( 收稿日 期: 2 0 0 4 - 1 0 - 1 2 )
