类胰蛋白酶对微血管内皮细胞中IL6和TNFα表达的影响.pdf

!复旦学报 ! 医学版“ ! “ # $ % % 0 3 a +!# H !# F GL! + % 0 3 # !# J I =H $ % 3 A “ $ ! ! %! “ # $ % “ % 4 . 1 $ 2 % 02 ; 2 $ 14 =#. + ( + . 9 +2 . $ % 9 - . E 2 ; %E ; 1 O 3 1 + ( + 1; N I H 3 #$ % #5 = ! 3 . %- + 1 1 9 / * + $ % B A 1 +#2 . O E 2 $ 9 + 3 % # “ - + #- O 2 ; K % +9 + - . + 2 ; % %2 A +- “ 1 2 “ . + #9 “ E + . % $ 2 $ % 2 9B $ 9 4 3 !; % 2 A + + M E . + 9 9 ; %; N I H 3 #$ % #5 = ! 3 . %: ? % # / $B $ 9 $ 1 9 ;+ M E 1 ; . + # / ! : %; N 2 A + M E . + 9 9 ; %; N I H 3 #5 = ! 3 .$ % #E . ; 2 + % %- ; % - + % 2 . $ 3 2 ; % 3 # + E + % # + % 2 $ % # 2 4 3 !“/ !; ) * / . 3 1 ( ) * !* $ 9 2 - + 1 1 2 . O E 2 $ 9 + ) % 5 (!2 . O E 2 $ 9 +$!E . ; 2 + % $ 9 +$ - 2 ( $ 2 + #. + - + E 2 ; . 3 !$! % 2 + . 1 + “ K % 3 #$!2 “ 4 3 !“ # 上调白细胞介素3 % #! I H 3 % # “ 和白细胞介素3 *! I H 3 *“ 的表达 )!*# 促使炎症发 生%还可以激发星形细胞瘤和外周血单核细胞释放 白细胞介素3 #! I H 3 #“ + 肿瘤坏死因子 3 . !5= ! 3 .“ 和 I H 3 % # )$#(*# 增加血管通透性# 诱导炎性细胞浸润# 刺 激上皮细胞增生# 从而参与了炎症性疾病的发生和 发展过程%近年的研究发现动脉硬化过程中也有炎 症反应) *# 因此在小鼠脑微血管内皮细胞系: ? % # / $ dUi 复旦学报! 医学版“! “ “ #年$月# $ $!“! 上研究2 . O E 2 $ 9 +和它的受体诱发炎症介质I H 3 #和 5= ! 3 .的释放及其作用机制可为血管硬化疾病提 供实验依据$ 材 料 和 方 法 材料!: ? % # / $来自复旦大学遗传学研究所# 并 经复旦大学上海医学院生理与病理生理学系实验室 鉴定为微血管内皮细胞% # 公司产品 2 . O E 2 $ 9 +购自, 0 4 3 !抗体购自 , $ % 2 $7 . “ 公司# 其他试剂均为市售产品$ 细胞培养与处理!将: ? % # / $细胞制备成%) % “ #个( 并定量 另一组细胞每孔加入2 . O E 2 $ 9 + 终浓度为“ “ “% 0( 第三组用6 4 3 !抗体 !$0($ : ? 1 8 ; :!取各组细胞总4 =!$0逆转录合 成- C =# 再取逆转录产物%$H进行6 7 4循环$ 引物序列如下5= ! 3 .上游 X 3 D 5 D 7 D 7 7 5 3 D 5D 7 7 7 3 $ X#下 游 X 3 D 5D 7 7 5 D 7 3 7 7 D D 7 3 $ X#6 7 4扩增产物长度为( ! *: E$反应 条件# 首次变性+ (YD 5 7 7 DD DD 5 D 3 D 7 5D 3 $ X#下 游 X 3 5 7 5 D 7 7 7 D 5 DD 3 D5 D 5 7 7 7 3 $ X6 7 4扩增产物长度为% : E$ 反应条件首次变性+ (Y 定量内参照D 6 CG上游 X 3 7 D 7 3 7 D 7 5 7 5 5 7 5 5 D 5 D 7 D 5 D 3 $ X#下 游 X 3 D D 7 3 7 5 5 D 7 5 D 5 D 7 7 D 5 5 D5 5 5 3 $ X#6 7 4扩增产 物长度为! ! #: E$反应条件同5= ! 3 .$取6 7 4产 物% “$H进行琼脂糖! %/ Z“ 凝胶电泳分析# 在凝胶 成像仪上成像并分析各组目的基因及D 6 CG基 因灰度值# 以两者的比值代表目的基因的表达$ 放射免疫检测I K 1 M和? B D 1 #的分泌!细胞的 培养以及处理同前# 加入2 . O E 2 $ 9 +终浓度为“ “ “ % 0 (# 但加 入2 . O E 2 $ 9 +后其表达量明显增加# 呈现出浓度的依 赖性$I H 3 #和5= ! 3 .的都是在加入“ “ “ % 0 (的表达最初随着时间逐渐升高“ 在 *A达到最高峰“ 以后又有所下降“ 呈现一定的时间 依赖性$ 图!% 4- ; % 2 . ; 1 !8 6 : 1 E以及8 4 3 !的抗体 , * % %!$0#4 3 !抗 体预处理可明显抑制I H 3 #和5= ! 3 .表达的 增加“ 而H J ! + (“ “ !对I H 3 #和5= ! 3 .表达 的抑制效果并不明显 # OE . + 2 . + $ 2 + #%A“2 A + %“ “ “% 0#的结果相一致$ 表%“ !% 表 达 水 平# 同 时 使I H 3 *释 放 增 加 % 3 G “ %W ; ;等 报道, * % %可以作为有效的6 4 3 !抑制剂 %; N“G ; 1 0 $ 2 +, 5“ 1 +; NN ; . I H 3 %: + 2 $ % #I H 3 *$ % #9 2 9 ( ) /“% + + *“% # %( % 9 2 9; N E . ; 2 + % $ 9 + 3 $ - 2 ( $ 3 2 + #. + - + E 2 ; .! % # “ - +5= ! 3 .9 + - . + 2 ; %N . ; “ : . $ 9 ( ) /“! “ “ $“% %; N A “ 9 ( ) /“% + + *“% # “%+ # $4“* % $ “ %; N 2 A + % N 1 $ 4 3 ! ;P G“7 A “ % 0WG“GB $ % 0W 7“ .b $ % # “ - + 9 4 3 !#)$/8 + H 6& “ 而刺激7 f5U则无7* 6出现*7“d7* 6的潜伏 期为# %c/ S ieU/ h& 9“O ,P 4“ 下同$ + %c/ UeU/ S c& 9和%c/ g geU/ S S& 9“ 波幅为%i/ f UeS/ U d&Q+ %S/ h UeS/ i h&Q和%U/ TeU/ g g&Q*其中以7c的波幅最大“ 提示7c支配肱肌的纤维数可能最多“ 但经统计学处理“ 各神经根间的差异无统计学 意义%B#h/ h & *U例患者术后第i天检查屈肘功能正常“ 电生理检测肱二头肌为单纯相*术后U年半随访“ 术侧拇示指出现 屈曲动作*结论!肱肌同时接受来自7 “d神经纤维的支配“ 该肌支移位至7f5U为主支配的正中神经是可行及有效的* # 全文刊登于中华手外科杂志#i h h “i U%T& U g d$ Uii