1、交叉配血试验交叉配血试验交叉配血试验交叉配血试验一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理三、实验步骤三、实验步骤四四、方法学局限性、方法学局限性五、临床意义五、临床意义六六、临床新进展、临床新进展实验目的实验目的n掌握凝聚胺交叉配血试验的原理、方法、掌握凝聚胺交叉配血试验的原理、方法、结果判读结果判读n熟悉交叉配血试验的临床意义熟悉交叉配血试验的临床意义实验原理实验原理 交叉配血试验分两管：交叉配血试验分两管：主侧：受血者血清主侧：受血者血清+供血者红细胞供血者红细胞 次侧：供血者血清次侧：供血者血清+受血者红细胞受血者红细胞 实验原理实验原理 红细胞表面带有大量的负电荷，悬浮在电解红
2、细胞表面带有大量的负电荷，悬浮在电解质溶液中，会吸引大量阳离子，红细胞则被扩散质溶液中，会吸引大量阳离子，红细胞则被扩散的双层离子云所围绕，形成的双层离子云所围绕，形成zeta电位。电位。实验原理实验原理n凝聚胺技术首先利用低离子溶液（凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM）降低）降低介质的离子强度，减少红细胞周围的电子云，介质的离子强度，减少红细胞周围的电子云，如有红细胞抗原相应的血清抗体存在，则可促如有红细胞抗原相应的血清抗体存在，则可促进红细胞抗原与血清抗体的特异结合。进红细胞抗原与血清抗体的特异结合。实验原理实验原理n再加入凝聚胺溶液，再加入凝聚胺溶液，溶解后产生很多正电溶解后产生很多正
3、电荷，中和红细胞表面荷，中和红细胞表面带有的负电荷，红细带有的负电荷，红细胞胞zeta电位降低，缩电位降低，缩短红细胞距离，无论短红细胞距离，无论是否有红细胞抗原相是否有红细胞抗原相应的血清抗体存在，应的血清抗体存在，主、次侧管均可产生主、次侧管均可产生非特异性聚集。非特异性聚集。实验原理实验原理n最后加入悬浮液，具有中和凝聚胺阳离子的作最后加入悬浮液，具有中和凝聚胺阳离子的作用，使正常红细胞的非特异性凝集散开，红细用，使正常红细胞的非特异性凝集散开，红细胞抗原与相应血清抗体的特异性凝集仍然存在。胞抗原与相应血清抗体的特异性凝集仍然存在。实验步骤实验步骤一、取出供血者血浆及红细胞，并将冰冻血一
4、取出供血者血浆及红细胞，并将冰冻血浆放入浆放入37温箱解冻温箱解冻15分钟。分钟。实验步骤实验步骤二二、受血者抗凝全血标本离心备用、受血者抗凝全血标本离心备用 3000r/min，5min实验步骤实验步骤三、将受血者血浆三、将受血者血浆2滴加入主侧管，红细胞滴加入主侧管，红细胞1滴加入次侧管滴加入次侧管 实验步骤实验步骤四、剪下供血者血袋上的血辫，将供血者红四、剪下供血者血袋上的血辫，将供血者红细胞细胞1滴加入主侧管，血浆滴加入主侧管，血浆2滴加入次侧管滴加入次侧管 实验步骤实验步骤五、在主次侧各加入低离子溶液各五、在主次侧各加入低离子溶液各0.65毫毫升，混合均匀。升，混合均匀。实验步骤实
5、验步骤六、在主、次侧管分别加入六、在主、次侧管分别加入2滴凝聚胺溶液，滴凝聚胺溶液，混匀后混匀后3400r/min离心离心10秒，弃去上清，秒，弃去上清，观察红细胞的非特异凝集现象。观察红细胞的非特异凝集现象。弃上清实验步骤实验步骤七、最后各加入悬浮液七、最后各加入悬浮液2滴，轻轻转动试管滴，轻轻转动试管混匀并观察结果。混匀并观察结果。实验步骤实验步骤八、如果在八、如果在60秒内，主、侧管凝集均散开，秒内，主、侧管凝集均散开，说明是由凝聚胺溶液引起的非特异性凝集，说明是由凝聚胺溶液引起的非特异性凝集，配血相合。配血相合。实验步骤实验步骤九、如果凝集不散开，则为红细胞抗原抗体九、如果凝集不散开，
6、则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合，如有结合的特异性反应，配血结果不相合，如有疑问，可进一步镜检确认。疑问，可进一步镜检确认。实验步骤实验步骤十、同时对受血者十、同时对受血者ABO和和RH血型使用血型使用玻片法进行复查。玻片法进行复查。实验步骤实验步骤十一、对受血者十一、对受血者ABO和和RH血型使用玻血型使用玻片法进行复查。片法进行复查。临床意义临床意义一、保证输血安全一、保证输血安全二、发现亚型和不规则抗体二、发现亚型和不规则抗体 方法学局限性方法学局限性对罕见不规则抗体抗对罕见不规则抗体抗K敏感性低！敏感性低！临床新进展临床新进展n流式细胞术流式细胞术n基因分型技术基因分型技术n卡式微柱凝胶法卡式微柱凝胶法卡式微柱凝胶法卡式微柱凝胶法卡式微柱凝胶法卡式微柱凝胶法戴安娜全自动配血系统戴安娜全自动配血系统n卡式微柱凝胶法可实现自动检测卡式微柱凝胶法可实现自动检测二 实验原理n 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。见下表谢谢！
