1、输血科盐水介质试验技术操作规程1、目的：规范实验室工作人员的操作程序，确保实验过程及结果的准确性与可靠性。2、范围：本规程适用于本实验室盐水介质试验操作。3、职责3.1输血科实验室工作人员对盐水介质试验技术操作要熟悉掌握。4、程序4.1基本原理盐水介质试验技术是输血技术的基础，其实验本质是凝集反应，具有凝集反应的特点。在盐水介质中，红细胞表面抗原和抗体会出现肉眼可见的凝集，属于直接凝集试验。盐水介质试验技术用于检测红细胞抗原和（或）抗体。红细胞悬浮于盐水介质中，可直接与试剂血清或患者血清反应,主要检测IgM类抗体,通常不能检出IgG类抗体。盐水介质试验技术常用于血型鉴定，血清中IgM类抗体的筛
2、查和鉴定、盐水介质的交叉配血等。4.2方法根据试验载体的不同，主要有三种方法：平板法（玻片法）；试管法；微孔板法（U型微板法）。根据实据所用耗材不同，分玻片、陶瓷板或专用白纸板等多种质地的平板可供选用，操作方便。为定性实验。应用范围：常规ABO血型和RhD抗原定型。以玻片为例。操作时在玻片上做好标记，加1滴（50ul）,待检血清或试剂血清，再加上红细胞盐水悬液1滴，混匀后室温下放置，并不时转动反应板，以加速反应的发生。反应快的在混匀后数秒钟即出现凝集，最迟在2分钟内可肉眼观察结果，亦可用低倍镜（100倍）观察，室温较高时应防止水分蒸发，以免干扰试验结果。如果玻片法结果可疑时，应采用试管法重新做
3、实验。此方法易于掌握，操作简便，快速，但工作环境和工作人员易被污染。此方法不建议输血科使用，所以不做过多详细解释。4.2.2试管法为定性试验方法，也可用于半定量试验，如测定抗体效价。试管法是输血前检查最常用的试验方法。可以根据试验设计加入不同的试剂量或被检标本量，也可以根据温度设置，将试管放在不同的温度环境中进行抗原抗体反应，也可以将试验过程中的标本进行洗涤操作等。其特点是操作简便、快速，方法易于掌握、结果准确、可靠。4.2.2.1操作步骤1）取标记好的洁净试管。2）在标记的洁净试管中滴加1滴或2滴被检血清/血浆（或血清试剂），然后加1滴2%-5%受检者的红细胞悬液（或商品化红细胞）。3）轻轻
4、摇动试管充分混匀，立即离心（可根据具体情况将试管在离心前放入4或37C进行孵育后离心，孵育时间推荐不超过5分钟），离心条件：100Og,离心15秒（3400转/分）。4）离心结束后，取出试管轻轻重悬细胞扣，检查有无凝集或溶血，判读结果。凝集或溶血为阳性结果。细胞扣重悬呈均匀的悬液为阴性结果。4.2.2.2注意事项：滴加血清或试剂与红细胞悬液比值推荐剂量为2：Io不同离心机由于离心转子半径不一，10OOg在不同型号的离心机的转速不同。本工作手册血型血清学试管法结果观察离心机转速均以KUBATA（久保田离心机）KA-2200离心机为例。rmp与RCF之间的换算公式为：RCF=I.118X10-5（
5、rpm）2RoRCF代表相对离心力（离心力），以重力加速度g的倍数表示；rpm代表离心速度，以离心机每分钟的转数r/min表示；R代表离心机半径，表示离心机转轴中心与离心管中心的距离，单位为cm。4.2.3微孔板法为定性试验方法，加样与观察结果参考试管法。4.3结果分析和判定4.3.3溶血:为阳性结果,与血液凝集具有同样重要的临床意义。有些血型抗体与红细胞表面相应抗原反应后，能够激活补体，引起红细胞溶解。具有这种性质的抗体称为溶血素。当补体不存在时，这些抗体往往凝集或致敏具有特异性抗原的红细胞。血型抗体中具有溶血作用的有抗一A、抗一B、抗一AB、抗一I、抗一i等。4.3.4凝集强度的判定：见下
6、表（大致判定标准）凝集反应判定标准反应强度现象4+一个大凝块，无游离红细胞，背景清晰3+数个大凝块，无游离红细胞，背景清晰2+许多小凝集块，肉眼可见，大小均匀，背景稍浑浊，有游离红细胞。1+很小的凝集块，肉眼可见，背景浑浊，游离红细较多W+微小凝集块，肉眼很难看清，背景混浊，需要显微镜观察0无凝集，无溶血，肉眼或显微镜下红细胞呈游离细胞H完全溶血，无红细胞残留4.4注意事项：4.4.1观察结果后应立即做好试验记录。4.4.2如果做ABO血型鉴定，试验温度不要高于室温，如果做交叉配血试验，应注意室温控制在（222）以上，防止冷抗体引起凝集反应。4.4.3观察结果要在光线良好的背景下观察凝集反应。
7、4.4.4因溶血和血液凝集都是阳性结果，所以观察结果首先看有无溶血，再看红细胞是否凝集，进行配血试验时试管中发生溶血现象是配血不合，表明有抗原抗体反应，同时还有补体参与，必须高度重视。4.4.5严格按照试剂说明书进行试验操作。4.4.6在盐水介质的凝集试验中，常碰到缗钱状凝集，也称串钱状凝集。这是一种假凝集，红细胞形成的的这种假凝集像许多钱币堆积在一起。红细胞在自身血浆中沉降时可以看到缗钱状的形成，缗钱状严重时红细胞的沉淀速度快。在血浆球蛋白异常时，如高球蛋白血症、巨球蛋白血症时会出现缗钱状。患者在使用大分子右旋糖酎和羟乙基淀粉溶液作为血容量扩张剂时也可以产生缗钱状凝集。实验中遇到了缗钱状凝集时，可将血清适当稀释后进行实验。在显微镜下观察到缗钱状凝集时加1滴生理盐水通常也可以消除。在试管实验时发现缗钱状凝集，可将试管离心，倾去上清液，沥干，再加2滴生理盐水，重悬，假凝集会消失，真凝集不会消失。缗钱状形成一般不影响间接抗球蛋白试验，严重的可在37孵育前加1-2滴生理盐水，孵育过程中轻轻摇动数次。
