1、输血科其他辅助试验操作规程1、目的：规范实验室工作人员的操作程序，确保实验过程及结果的准确性与可靠性。2、范围：本规程适用于本实验室其他辅助试验操作。3、职责3.1工作人员应对进行的其他辅助试验技术操作熟悉掌握。4、程序4.1筑基试剂区分IgG与IgM抗体4.1.1基本原理IgM抗体是由5个免疫球蛋白单体通过二硫键连接起来的分子。单体分子的重链与轻链通过链内二硫键连接起来。IgM分子为五聚体结构由亚单位间二硫键及J链连接起来。J链是连接两个亚单位间二硫键的环链。筑基试剂裂解二硫键。J链和亚单位链间的二硫键最易裂解，而单体亚单位的链内二硫键不易被航基试剂裂解。用疏基试剂处理IgM抗体不仅可以破坏
2、凝集，而且破坏补体结合活性。观察抗体用筑基试剂处理前与处理后的活性，对确定免疫球蛋白类型是非常重要的。筑基试剂处理方法也可以用来破坏IgM抗体活性以检测共存的IgG抗体。4.1.2试剂与器材1）筑基试剂（DTT、2-Me）。2）待检血清或血浆。4.L3操作步骤1）在两个试管中加入ImL的血清。2）1管标记对照管。3）另一试管标记检测管，加入ImL筑基试剂。4）混匀37C孵育30-60分钟。5）通过效价测定方法采用相适表型的红细胞检测每一样本中的抗体活性。4.L4注意事项D筑基试剂在低浓度下会减弱Ken系统的抗原性。2）当用疏基试剂处理血清或血浆样本时，血清或血浆样本可能成凝胶状，如果筑基试剂准
3、备的不正确，这种情况就有可能发生。如果血清和疏基试剂孵育时间过长也可能形成凝胶状。分装的已经处理过的样本可在30分钟孵育后检测。如果认为由IgM引起的活性已消失，就没有必要继续孵育下去，因为过分地用疏基试剂处理会引起所有的血清蛋白变性，所以凝胶状的样本不能用来检测抗体活性。4.2水浴45热放散红细胞膜IgG抗体4.2.1基本原理当红细胞被IgG严重包被时，很难用抗球蛋白血清或高蛋白凝集试剂检测红细胞上的抗原。为正确地血型定型，要在不破坏红细胞膜的完整性或不改变抗原表达方式的情况下，用放散法将抗体从细胞上分离下来。获得无抗体包被红细胞的过程不同于重新获得反应性抗体的过程。为了证明放散过程不破坏待测红细胞的抗原反应性，必须设对照，即：平行处理相同量的未包被的正常红细胞，已知这种红细胞具有与待测红细胞将要检测的相同抗原。4.2.2试剂与器材1）血型试剂。2）IgG包被的红细胞。3）具有相关抗原的正常红细胞。4.2.3操作步骤1）在适宜型号的试管中，在1支试管中加入1体积洗涤后的已被抗体包被的压积红细胞和3体积生理盐水，在另一管中，加入相同体积的盐水和洗涤后的正常的具有相关抗原的红细胞，这样可以检查出放散过程是否破坏了抗原反应性。2）45孵育10-30分钟，频频振荡。3）离心，弃去上清液。4）根据相关检测进行相应检测。
