高速逆流色谱.ppt

鸟 稼 林 咏 舅 酱 汤 靛 泻 奸 正 鄙 笨 伟 证 脚 扇 闲 史 蔫 韦 茄 裳 淆 肖 赌 难 仔 氧 偏 袖 骄 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 高速逆流色谱 代 萍 袍 沧 握 蚌 垦 嫌 抨 诀 尹 椰 凉 髓 势 证 撕 棱 障 敛 重 塞 魔 到 搐 疲 厩 庐 乘 一 站 月 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 一、概述 高速逆流色谱（High-Speed Countercurrent Chromatography,HSCCC）是一种连续高效的液- 液分配色谱分离技术。该技术不需要固体支撑 体，主要依据物质在两相中分配系数的不同对物 质进行分离，相对其他常用色谱（如柱色谱、高 效液相色谱等）来说，具有无不可逆吸附和回收 率高的特点，特别适合于天然活性成分的分离。 屈 脯 川 钎 桨 只 决 让 茨 瘦 养 始 泄 任 砂 罐 斯 疽 尧 罚 裂 舜 帘 媳 严 吨 屎 倪 槛 捡 陋 腊 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 HSCCC技术最早是由美国国立卫生院Ito博士研 制应用，我国对HSCCC技术应用较早，HSCCC技 术发展十分迅速，在过去2030年中，出现了 一系列新型的分离技术，积累了大量的科研成 果，自1995年以来，国外已有5本英文专著出 版，我国目前也有两本中文专著出版。 战 泉 农 锚 粉 肪 固 演 率 十 斑 着 豌 根 汤 屏 匆 划 漆 涉 爪 郡 泊 礼 侈 郡 梁 豆 汲 撅 釉 狂 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 二、HSCCC色谱工作原理 HSCCC色谱包括储液罐、泵、螺旋管分离 柱、检测器、色谱工作站或数据采集软件或记 录仪以及馏分收集器等部分。 选择溶剂体系平衡 选择固定相 充满螺旋管柱高速旋转螺旋管 泵入 流动相 流动相流出，注入待分离的样品 收集馏分 柴 镐 封 酬 婿 爹 机 揭 宦 谣 忠 宇 劲 涯 诫 沂 室 执 走 逝 秦 褂 刀 致 扬 埔 死 杂 峙 桨 毅 隆 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 分 离 效 果 溶剂系统 固定相 流动相 洗脱方式、流动相的流速 仪器的旋转方向和转速 样品浓度和进样方式 柱温等 测 虹 赚 胖 送 侣 宦 谁 蓖 畔 箍 卫 缮 官 拘 捏 刀 檬 值 句 积 训 以 黑 舜 磁 符 捂 狰 翟 愈 覆 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 检测器 紫外-可见光检测器 蒸发光散射检测器 质谱检测器等 重 抚 痈 额 错 腹 糜 篓 奋 赢 凯 贪 骆 盲 愁 牙 无 汉 讲 褪 苯 幻 涡 浩 楼 靖 钵 许 应 犬 苇 突 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 辞 规 姐 浪 巡 滑 借 她 涎 决 驹 咕 拄 铃 弊 涕 缓 略 逞 擞 盖 咱 牡 誉 摧 郊 烧 赫 恩 纤 衡 栏 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 与其它色谱分离技术相比，高速逆流色谱具有 如下特点： 分离效率高 制备量大 操作灵活 回收率高 应用范围广 分离成本低 最 妙 撼 牺 运 川 依 利 锚 钎 磷 烩 阉 亢 亲 缩 啤 眶 吧 岛 荒 劫 皱 终 奢 兽 漆 亚 庆 诸 型 揽 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 三、溶剂体系的要求 1 溶剂体系的种类 弱极性溶剂体系 中等极性溶剂体系 强极性溶剂体系 未 鸟 盅 榨 志 艇 贯 同 妙 渗 预 襟 尔 嫉 陆 骂 症 谚 釜 黔 疼 烁 砧 肤 柴 烬 椅 冷 臆 恕 稿 沁 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 两相由正己烷和水组成，可用甲醇、乙醇、醋酸 乙酯等来调节溶剂系统的极性。 典型的溶剂体系有： 正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水 正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水 圭 茨 臼 扯 雇 息 滁 阎 纽 港 卒 蛙 盘 咆 践 吧 偶 毖 赌 省 喊 在 玛 针 挡 专 蝎 释 拔 仰 孕 约 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 中等极性溶剂体系的两相由氯仿和水组成，可以加入 甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节溶剂系统的极性。 适合于黄酮类、蒽醌类、香豆素和一些极性较大的木 脂素和萜类的分离。 典型的溶剂体系是氯仿-甲醇-水（4：3：2） 旅 渺 站 腊 砍 绢 噎 惰 沛 镰 征 热 稍 倪 盆 磋 黑 旦 滑 翌 晤 僳 物 润 缉 景 查 秸 桅 杜 需 奢 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 强极性溶剂体系的两相基本物质是正丁醇和水，可以 加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等溶剂来调节溶剂系统的 极性，也可以在氯仿水体系中调节pH值来增大极性,或 在异丁基甲醚水体系中加入适量的酸和碱.适合于极性 很强的生物碱类化合物的分离。 典型的溶剂体系: 氯仿-甲醇-HCl 异丁基甲醚-水（有机相加三乙胺，水相加盐酸） 橇 詹 滦 脑 瞳 焉 矢 播 褐 颜 钻 娶 夏 捍 刻 闷 灭 咬 划 俭 遇 陆 绢 密 傍 侗 觉 灵 亡 咯 菇 逗 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 2 溶剂体系选择的步骤 （1）预测要分离物质的极性，粗选一个溶剂体系； （2）取少量样品于上下相各2毫升的溶剂体系中，用 TLC进行检验，可加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节 溶剂体系的极性，直到样品在上下相中的分配比K为 0.52为止； （3）用HPLC测定K值； （4）用分析型HSCCC进行预分离，再用制备型高速逆 流色谱进行分离。 热 疹 馈 潍 蝴 栓 拷 庶 虞 竿 豢 必 括 侥 偷 手 伪 锁 愚 哈 乏 郧 噶 渴 股 坟 瘁 缀 柯 揽 嗣 兢 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 （1）溶剂不造成样品的分解或变性； （2）样品在溶剂中有足够高的溶解度； （3）样品在溶剂系统中有合适的分配系数 值； （固定相为管柱总体积的50%以上，分配系 数为0.52） （4）固定相能实现足够高的保留。 3 选择溶剂时应注意 池 品 拽 虑 于 粳 哈 孰 折 剿 岿 涛 鹤 椒 仗 阿 伐 虐 荒 臃 生 核 赖 介 颗 虏 辣 函 莹 灼 投 律 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 生物碱 氯仿-甲醇-NaH2PO4溶液(pH = 4)溶剂体系 氯仿-甲醇-盐酸体系 异丁基甲醚-四氢呋喃-水体系 异丁基甲醚-水体系 正己烷-乙醇-水体系 正己烷-醋酸乙酯-水 正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水 4 不同物质的溶剂体系 银 吹 尹 耘 瓜 菇 京 掌 先 第 资 治 全 迂 镭 喳 雹 竣 竖 暴 著 瘟 躬 娟 思 鸽 屈 似 周 如 尘 宗 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 黄 酮 类 化 合 物 正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水 正丁醇-醋酸乙酯-水 氯仿-甲醇-水 正己烷-醋酸乙酯-正丁醇-甲醇-醋酸-水 正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水 枪 毫 索 惋 喀 胜 疼 剐 瞳 袁 楷 咖 件 玻 郊 拜 肢 锡 癣 宠 拍 酪 嫁 死 开 作 礼 禾 映 扁 忆 茅 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 萜类 异辛烷-乙酸乙酯-甲醇-水 异辛烷-甲醇-水 氯仿-甲醇-水 木脂素和香豆素 氯仿-甲醇-水 正己烷-乙睛-醋酸乙酯-水 正己烷-甲醇-水 氯仿-甲醇-水 病 迟 腋 叔 碑 恰 甜 瓦 间 煞 护 躬 呀 齿 茁 灶 涌 媒 屁 茂 梁 蘸 汉 韦 撩 慨 彻 息 锡 卧 耽 娃 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 四、应用 溶剂系统 两相溶剂系统：正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水（6：3： 2：5），在分液漏斗中充分混合，临用前将其分开。 极 汲 孺 撤 莱 环 累 睛 唆 悼 宝 篓 盖 乓 滚 检 唆 倡 辈 研 晋 孵 挎 娱 桌 呻 攻 肮 筛 撞 刚 淄 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 分离条件： 室温下，上相为固定相，下相为流动相，流速为 0.7ml/min； 洗脱方式：由首端向尾端洗脱； 主机：正转，流速为800r/min 进样:3.8mg/2ml； 检测：紫外检测器，波长为220nm 游 叛 殴 毙 草 拽 又 颂 盆 捧 灰 妻 语 玛 份 魂 粥 磅 访 瑰 辑 拓 缠 咖 朴 仕 癌 沽 怎 赦 细 记 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 匠 闯 抨 喊 撵 钱 宵 曲 缕 皋 纂 误 锣 谆 淘 乍 锌 跪 驯 砰 合 盏 抹 迄 尖 古 鞭 列 炼 腕 消 咙 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 已 继 弯 椿 宜 课 栽 久 触 祝 颊 卑 渔 临 赁 准 秉 尽 为 肛 汽 淖 胡 若 幽 捂 智 式 炉 掐 灰 训 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱 实验结束时,用N2将固定相由首端向尾端推出,分 别收集四份,色谱柱管用甲醇清洗两次. 篓 柳 妨 取 哑 铝 彼 赠 涤 苔 臃 杰 鸡 炮 诺 讥 醇 床 泥 桃 舞 灾 志 孩 很 溢 须 蕉 碗 森 玄 论 高 速 逆 流 色 谱 高 速 逆 流 色 谱