1、非无菌产品微生物限度检查用培养基适用性验证 文件编号：XXXX起草人职位签名日期审核人职位签名日期批准人职位签名日期文件分发部门目 录1.验证目的12.参照标准13.验证项目14.验证工作小组及职责15.试验材料26.试验过程37.验证周期48.附件41、验证目的：需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数用培养基应进行培养基的适应性检查，本次验证的目的是为了确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数的测定。2、参照标准：中国药典2015年版四部3、验证项目：胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适用性验证4.验证小组及职责4.1 验证小组组 长 姓 名职
2、务/职称部门QA部部长质量部组 员 姓 名职务/职称部门质量控制实验室主任质量部微生物化验员质量部微生物化验员质量部4.2 验证职责人员职责验证组长负责组织审核验证项目的验证方案、组织项目的具体验证实施、督促验证小组成员按照方案的要求做好验证记录、起草验证报告、整理验证档案；当漏项或偏差发生时，负责对其评估并报验证委员会批准；组织相关的培训。验证组员质量控制实验室主任：负责制定确认方案及报告的起草微生物化验员：负责确认过程的相关检测，确保检验结论正确可靠5.试验材料5.1验证所用培养基：名 称来 源批 号胰酪大豆胨琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基胰酪大豆胨琼脂对照培养基沙氏葡萄糖琼脂对照培养基5
3、2验证用菌株培养验证菌株代次培养基培养温度培养时间金黄色葡萄球菌 CMCC（B）26003胰酪大豆胨琼脂培养基30351824小时铜绿假单胞菌CMCC（B）10104胰酪大豆胨琼脂培养基30351824小时枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501胰酪大豆胨琼脂培养基30351824小时白色念珠菌CMCC（F）98001沙氏葡萄糖琼脂培养基202523天黑曲霉CMCC（F）98003沙氏葡萄糖琼脂培养基20255-7天5.2. 仪器设备：5.2.1. XXXXX立式压力蒸汽灭菌器5.2.2.XXXX水平流净化工作台5.2.3.XXXXXX干燥箱5.2.4.XXXXX型霉菌培养箱 (2025)5.2
4、5. XXXXX电热恒温培养箱(3035)5.3. 稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液6.试验过程6.1菌液制备取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物，加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在28，可在24小时内使用。6.2、适用性检查培养基适用性检查取金黄色葡萄球菌
5、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的菌悬液与黑曲霉的孢子悬液（均不大于100cfu），分别注入无菌平皿中，立即倾注适用性检查的胰酪大豆胨琼脂培养基，用于检查胰酪大豆胨琼脂培养基的需氧菌总数计数适用性。其中，接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养皿于30-35培养，时间不超过3天。接种白色念珠菌与黑曲霉的孢子的培养皿于30-35培养，时间不超过5天。取白色念珠菌的菌悬液与黑曲霉的孢子悬液（均不大于100cfu），分别注入无菌平皿中，立即倾注适用性检查的沙氏葡萄糖琼脂培养基，用于检查沙氏葡萄糖琼脂培养基的霉菌和酵母菌总数计数适用性。培养温度为20-25，培养时间不超过5天。上述
6、每一试验菌株平行制备两个平皿，同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述实验。阴性对照为确认试验条件符合要求，同时进行培养基阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。6.3、结果判定：若被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，则判该培养基适用性检查符合规定。7 验证周期同种培养基的不同批号，不同生产厂家均应进行适用性验证8 附件 8.1 需氧菌总数计数培养基适用性试验记录8.2霉菌和酵母菌总数计数培养基适用性试验记录8.3微生物检查用培养基适用性验证报告书需氧菌总数计数培养基适用性试验记录试验菌种供试培养基对照培养基结
7、果皿号菌落数平均值皿号菌落数平均值菌落数比值形态金黄色葡萄球菌1122铜绿假单胞菌1122枯草芽孢杆菌1122白色念珠菌1122黑曲霉1122被检培养基阴性对照结果结 论检验人日期复核人日期霉菌和酵母菌总数计数培养基适用性试验记录试验菌种供试培养基对照培养基结果皿号菌落数平均值皿号菌落数平均值菌落数比值形态白色念珠菌1122黑曲霉112222被检培养基阴性对照结果结 论检验人日期复核人日期非无菌产品微生物限度检查用培养基适用性验证报告书验证项目非无菌产品微生物检查用培养基适用性验证验证目的验证培养基适用于需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数 20 年 月 日至20 年 月 日，验证小组根据批准的编号为“ XXXXX”的“非无菌产品微生物检查用培养基适用性验证方案”对检查用培养基进行需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数适用性验证工作，验证方案在实施过程中未做修改；根据中华人民共和国药典2015年版四部计数培养基的适用性检查实施验证，结果_。验证小组人员会签部门职务小组职责人员会签质量部QA部部长组长质量部质量控制实验室主任组员质量部微生物化验员组员质量部微生物化验员组员 批 准 人： 批准日期：
