1、第五单元第五单元 微生物分离纯化及鉴定技术微生物分离纯化及鉴定技术模块一模块一 微生物纯培养的分离方法微生物纯培养的分离方法微生物纯种分离微生物纯种分离v将多种混杂微生物，经某种技术或方法将多种混杂微生物，经某种技术或方法分离成纯种的过程分离成纯种的过程纯培养（纯培养（pure culture）v将在实验室条件下从一个细胞或一种将在实验室条件下从一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代称为纯培养。细胞群繁殖得到的后代称为纯培养。微生物样品微生物样品多种混杂多种混杂某种方法某种方法分散成单个微生物分散成单个微生物平板平板培养培养单菌落单菌落每个菌落为纯种（纯培养）每个菌落为纯种（纯培养）单菌落转接培养
2、单菌落转接培养纯种（纯培养）纯种（纯培养）微生物纯种分离的原理和方法微生物纯种分离的原理和方法l单个微生物在适宜的固体培养基表面或内单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，见的、有一定形态结构的子细胞群体，称称为菌落。为菌落。菌落菌落一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养；一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养；单个微生物只在固体培养基上形成菌落；单个微生物只在固体培养基上形成菌落；在液体培养基中不会形成菌落在液体培养基中不会形成菌落同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落同一细菌在不同的培养平板
3、上形成不同的特征菌落 分区划线法（蛇形线法）操作图分区划线法（蛇形线法）操作图第一区划线第一区划线第二区划线第二区划线第三区划线第三区划线一、划线法一、划线法分区划线法适用范围：分区划线法适用范围：适用于浓度较大的样品适用于浓度较大的样品连续划线法操作图连续划线法操作图连续划线法适用范围：连续划线法适用范围：适用于浓度较小的样品适用于浓度较小的样品二、稀释平板法二、稀释平板法从土壤中分离纯微生物从土壤中分离纯微生物104/ml103/ml102/ml101/ml1、稀释倾注分离法、稀释倾注分离法涂布平板法涂布平板法稀释倒平板法稀释倒平板法2、稀释涂布分离法、稀释涂布分离法采用显微分离法从混杂群
4、体中直接分离单个采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养，细胞或单个个体进行培养以得到纯培养，称为单细胞（单孢子）分离法。称为单细胞（单孢子）分离法。l个体较小的微生物需采用显微操作仪个体较小的微生物需采用显微操作仪v分离难度与细胞或个体的大小成反比分离难度与细胞或个体的大小成反比v营养琼脂平板上不能形成菌落营养琼脂平板上不能形成菌落l较大的微生物可使用毛细管提取较大的微生物可使用毛细管提取三、单细胞三、单细胞挑取法挑取法五五、小滴分离法小滴分离法Each colony was examined microscopically四、选择培养四、选择培养基基分离分离
5、法法v创造适于目的微生物生长条件创造适于目的微生物生长条件原理原理v促使目的微生物快速生长呈优势菌促使目的微生物快速生长呈优势菌v抑制非目的微生物生长抑制非目的微生物生长v从混杂微生物中分离目的微生物从混杂微生物中分离目的微生物1 1、利用选择培养基进行直接分离、利用选择培养基进行直接分离选择培养基选择培养基 只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基他微生物生长的培养基土壤土壤目的菌优势目的菌优势非目的菌非目的菌选择培养基选择培养基直接分离直接分离单细胞单细胞选择培养基平板选择培养基平板（含牛奶或酪蛋（含牛奶或酪蛋白唯一白唯一C、N源
6、源）37培养培养目的菌落目的菌落菌落周围有透明菌落周围有透明蛋白水解圈蛋白水解圈1 1、利用选择培养基进行直接分离、利用选择培养基进行直接分离例一：分离筛选蛋白酶产生细菌例一：分离筛选蛋白酶产生细菌含牛奶选择培养基目的菌生长平板含牛奶选择培养基目的菌生长平板营养选择因子：牛奶或酪蛋白营养选择因子：牛奶或酪蛋白只允许分解利用蛋白质的目的菌生长，淘汰非目的菌只允许分解利用蛋白质的目的菌生长，淘汰非目的菌长出的目的菌并不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶长出的目的菌并不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶例一：分离例一：分离筛选蛋白酶筛选蛋白酶产生细菌产生细菌例二：分离筛选产高温淀粉酶（例二：分离筛选产高温淀粉
7、酶（65）细菌）细菌单细胞单细胞选择培养基平板选择培养基平板（淀粉为唯一（淀粉为唯一C源）源）65培养培养淀粉水解透明圈淀粉水解透明圈目的菌菌落目的菌菌落选择因子：营养选择因子淀粉选择因子：营养选择因子淀粉 环境选择因子环境选择因子65高温高温人为创造一些条件人为创造一些条件只让所需的微生物生长只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。超过其他微生物。2 2、富集培养法、富集培养法富集培养是分离微生物菌种最强有力的技术之一富集培养是分离微生物菌种最
8、强有力的技术之一营养选择因子和生理条件选择因子可无穷尽组营养选择因子和生理条件选择因子可无穷尽组合，可从自然界选择分离各类特异微生物合，可从自然界选择分离各类特异微生物例：从土壤中分离能产生例：从土壤中分离能产生 半乳糖苷酶的微生物半乳糖苷酶的微生物富集培养富集培养选择培养基分离选择培养基分离目的菌验证目的菌验证1.1.接种针接种针 2.2.接种环接种环 3.3.接种钩接种钩 4.4.接种锄接种锄 5.5.接种铲接种铲6.6.接种匙接种匙 7.7.接种刀接种刀 8.8.接种刀接种刀9.9.剪刀剪刀10.10.钢钩钢钩 11.11.镊子镊子 12.12.弹簧接种枪弹簧接种枪13.13.接种、枪（日本式）接种、枪（日本式）涂布棒涂布棒弹簧接种枪弹簧接种枪接种环的灭菌接种环的灭菌接种环烧红接种环烧红接种环稍冷却接种环稍冷却接种工具接种工具挑选单个菌落挑选单个菌落划线划线1 1、实验台、实验台2 2、空气、空气环境条件环境条件
