Hb的醋酸纤维薄膜电泳.ppt
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1、血红蛋白醋酸纤维薄膜碱性电泳,实验四,电泳: 指带电胶体粒子或分子在电场的作用下,作定向移动。 由于各种物质分子的等电点不同在同一P环境中所带的电荷各不相同,再由于分子量、分子结构、形状大小各有差异,因此在同一电场中泳动速度也就不一样。一般来说,所带的电荷多而分子量小、形状越接近球形者,泳动速度快,反之则慢。,电泳技术的分类:主要归纳为;,1)显微电泳即在显微镜下观察胶体粒子或细胞的移动度,也称细胞电泳。 2)自由电泳即悬浮在介质中的细胞和生物大分子,在电场作用下自由定向移动。,3)区域电泳(区带电泳):即在不同电力条件、支持物上进行直接分离,鉴定生物物质,促使获得各自电荷差异的生物粒子或分子
2、形成各自区域以帯形停留在载体上。如:滤纸、淀粉、琼脂、纤维素、聚丙烯酰胺凝胶等,此类 电泳技术分离技巧简便,运用十分广泛。 4)免疫电泳:即抗原与抗体在比例合适的琼脂糖载体中相结合的一种电免疫技术,亲和电泳即属此类。 。,根据缓冲液的性质不同可分为:,1.连续系统:电泳缓冲液的离子成分、PH、电位梯度与制胶(或浸膜)缓冲液相同,带电颗粒电泳时仅具有电荷效应、分子筛效应。 2.不连续系统:电泳缓冲液离子成分、pH、电位梯度与制胶(或浸膜)缓冲液不尽相同,带电颗粒电泳时具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。,血红蛋白(Hb) 的组成及分类: 血红蛋白(Hb):由亚铁血红素、珠蛋白 组成 。每个珠蛋白
3、分子由4条多肽链构成 ,根据其一级结构的不同可分为、四种类型。,正常成人Hb种类: 组成 百分含量 pI HbA 22 9598% 6.95 HbA2 22 23% 7.38 HbF 22 6.95,实验原理(Experimental Principles),在pH8.6的环境中,Hb是一种带负电荷的蛋白质(Hb的pI 8.6),在电场中向正极泳动。电泳时,由于各种Hb等电点不同,所带电荷量不同;分子量大小、形状不同,导致各自的泳动速度不同,因而被分离。这种分离可初步鉴定不同的Hb。,醋酸纤维素薄膜是由纤维素的羧基进行乙酰化后而制成的,浸湿后有巨大的张力和柔韧性,几乎对所有生物活性物质均能通过
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