二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸与小鼠攻击行为的相关性.doc
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1、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸与小鼠攻击行为的相关性?120?JournalofForensicMedicine,April2011,Vo1.27,No.2二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸与小鼠攻击行为的相关性刘超.一,蔡伟雄(1.复旦大学上海医学院法医系,上海200032;2.司法部司法鉴定科学技术研究所上海市法医学重点实验室.上海200063)摘要:目的研究小鼠脑内二十碳五烯酸(eicosapentaenoieacid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoicacid.DHA)含量对小鼠攻击行为的影响.方法将雄性昆明小鼠72只随机分为对照组,鱼油组,辛伐他汀组和攻击参照组.每组1
2、8只前3组严格隔离饲养.分别灌服生理盐水,深海鱼油和辛伐他汀3个月.在干预前及干预后对小鼠的攻击潜伏期,摇尾次数,攻击次数,攻击时间进行观测.在干预结束后利用气相色谱一质谱联用法定量检测小鼠脑组织中EPA和DHA的含量.攻击参照组仅作攻击性评估.结果(1)干预前.各组小鼠的4项指标组间差异没有统计学意义,而干预后,各观测指标组间差异具有统计学意义(P<0.05)(2)干预后,EPA和DHA的含量在鱼油组小鼠脑中均最高,在辛伐他汀组均最低.(3)小鼠EPA的含量与干预前,后4项指标的改变均呈负相关(P<0.05),DHA含量与干预前,后摇尾次数和攻击次数的改变呈负相关(P<0.
3、05)结论EPA和DHA含量与小鼠由应激所产生的攻击行为具有一定的因果关系.关键词:司法精神病学:攻击;二十碳五烯酸;二十二碳六烯酸类;小鼠中图分类号:DF795.3文献标志码:Adoi:10.3969.issn.10045619.2011.02.010文章编号:10045619(2011)02012005CorrelationbetweentheEicOsapentaen0icAcid,D0cOsahexaen0icAcidandtheAg-gressiveBehaviorinMiceLIUChaoCAIWei-xiongz(J.DepartmentofForensicMedicine,Sh
4、anghaiMedicalCollege,FudanUniversity,Shanghai200032,Chino,2.ShanghaiKeyLaboratoryofForensicMedicine,InstituteofForensicScience,MinistryofJustice,P.R.Chino,Shanghai200063,China)Abstract:ObjectiveToexplorethecorrelationbetweentheeicosapentaenoicacid(EPA),docosahexaenoicacid(DHA)andtheaggressivebehavio
5、rinmice.MethodsSeventytwomaleKunmingmiceweredividedintocontrolgroup,fishoilgroup,simvastatingroupandaggressivereferencegrouprandomly.Thecontrolgroup,fishoilgroupandsimvastatingroupweregivennormalsaline,fishoilandsimvastatinbyirrigationrespectivelyfor3monthsconsecutively,eachmousewasraisedisolatedly.
6、Thelatentperiodofassault,thefrequenciesoftailswingandassault,andthecumulativetimeofassaultwererecordedatthebeginningandtheendoftheintervention.Finally,theEPAandDHAinbrainwereanalyzedbygaschromatographymassspectromehy(GCMS).Theaggressivereferencegroupwasraisedwithoutinterventionandwasevaluatedasaggre
7、ssivereferenceonly.Results(1)Beforeintervention,thelatentperiodofassault,thefrequenciesoftailswing,thefrequenciesofassault,andthecumulativetimeofassaultwerenotsignificantlydifierentfromeachothergroup.Afterintmwention,thedifferencesweresignificant(P<0.05).(2)Aftertheintervention,thecontentofEPAand
8、DHAinmicebrainwasthemostinthefishoilgroup,andtheleastinthesimvastatingroup.(3)ThecontentofEPAwasnegativelyrelatedwiththefourindexes(P<0.05)beforeandaftertheintervention.ThecontentofDHAwasnegativelyrelatedwiththefrequenciesoftailswingandassault(P<0.05).ConclusionThereisacorrelationbetweentheEPA
9、,DHAandaggressivebehaviorinmiceunderstress.Keywords:forensicpsychiatry;aggression;eicosapentaenoicacid;docosahexaenoicacids;mice近年来.大量研究发现补充033多不饱和脂肪酸(polyunsaturatedfattyacids.PUFAs)能够改善正常人作者简介:刘超(1984一),男,山东东营人,硕士研究生.主要从事司法精神病学研究;E-mail:通信作者:蔡伟雄,男,博士,主任法医师,硕士研究生导师,主要从事司法精神病学鉴定与研究:E-mail:群及精神障碍者的暴力
10、攻击行为1,部分干预实验也证实一3PUFAs对暴力攻击行为有改善作用【6_91.但是.补充(1)一3PUFAs与暴力攻击行为的改变之间是否存在因果关系尚不明确由于二十碳五烯酸(eicos.apentaenoicacid.EPA)和二十二碳六烯酸(docosahex.aenoicacid,DHA)是(o3PUFAs的两种主要成分.法医学杂志2011年4月第27卷第2期因此.本研究通过干预小鼠EPA和DHA的摄取量来观察小鼠脑内EPA和DHA含量的改变对小鼠攻击行为的影响.初步探讨(I)一3PUFAs(主要是EPA和DHA)与小鼠攻击行为的因果关系1材料与方法1.1仪器和试剂6890N气相色谱仪(
11、美国Agilent公司),QuattroMicro气相色谱串联质谱联用仪(美国Waters公司).深海鱼油(美国Sigma公司),辛伐他汀(德国默沙东公司).其余试剂均为国产分析纯1.2方法1.2.1动物分组4周龄雄性昆明小鼠72只,随机分为对照组,鱼油组,辛伐他汀组和攻击参照组,每组18只,并编号.对照组,鱼油组和辛伐他汀组在整个实验过程中均单笼隔离饲养.在干预前先进行4周适应性隔离饲养攻击参照组小鼠群居正常饲养.该部分小鼠不予任何干预措施.仅作攻击性评估时使用1.2.2干预方法对照组,鱼油组,辛伐他汀组小鼠均通过灌胃给药.鱼油组每日给予深海鱼油0.72g/kg,以增加小鼠中枢EPA和DHA
12、含量:辛伐他汀组每日给予辛伐他汀0.02g/kg,以降低小鼠中枢EPA和DHA含量;对照组每日给予生理盐水0-5mL干预时间均为12周.整个实验过程.小鼠均自由摄食和饮水1.2.3攻击行为观测采用梁建辉等2J介绍的攻击行为评估方法在干预前及干预后xCd,鼠进行攻击行为评估:在安静环境中将干预组小鼠按照编号依次置于23cmx30cm(直径高)的透明圆筒中.并将相同编号的攻击参照组小鼠置于其中.录像观察10min回放录像,记录干预组小鼠的攻击潜伏期(自互相接触至主动发起躯体攻击的时间间隔,单位:min),摇尾次数,攻击次数(观测期间内主动躯体攻击次数的累加值)和攻击时间f观测期间内主动躯体攻击时间
13、的累加值.单位:S),如果干预小鼠的攻击潜伏期10min,则记为10rain.在攻击行为评估前.将攻击参照组小鼠随机两两配对置于透明圆筒中.按照相同的方法对攻击参照组小鼠进行攻击行为评估.并对攻击参照组小鼠个体间的差异进行统计学分析1_2_4标本的获取与保存干预结束且攻击行为观测完成后.将小鼠断颈处死,取全脑,一80c【=冻存备用.?121?1.2.5小鼠脑内EPA和DHA定量检测1.2.5.1样品处理取冻存备用的小鼠脑组织并匀浆.准确称取脑组织匀浆25Illg置于离心管中,加入2mLV(正己烷):(异丙醇)=3:2溶液提取脂质,混匀后以1500x离t2,3min,转移上清液至一具塞容量管中,
14、加入内标(正十七烷酸,10mg/mL)溶液10LLL,吹干后用2mL正己烷定容,添加2mol/L氢氧化钾一甲醇溶液0.2mL.涡旋混合后60cI=静置20min.取上清液并加入2mL10%硫酸一甲醇溶液,涡旋混合后密封.60qC静置90min.取上清液吹干,100L正己烷定容,取1L进样.1.2.5.2仪器分析气相色谱采用HP一1MS毛细管柱(30mx0.25mm.0.1Ixm).升温程序:初温150保持1min,以50C/min程序升温至200oC.保持1min.再以8oC/min程序升温至250oC保持3min进样口温度为250oC.分流比为10:1,载气为氦气.流速为1mL/min质谱离
15、子源(EI源)温度为260,接口温度220.碰撞气为氩气,碰撞能量为70eV,扫描时间为0.1S,离子选择检测模式(SIM)1.2.6统计分析采用SPSS15.0软件包进行统计分析对攻击参照组小鼠攻击性指标进行单样本KS分析攻击性的组内比较采用配对符号秩检验.组间比较采用K一检验.组间多重比较采用秩转换技术结合随机区组设计方差分析并进行LSD法两两比较EPA和DHA含量用s表示.EPA和DHA含量的组间比较采用单因素方差分析.组间多重比较采用LSD法对EPA和DHA含量与攻击行为的相关性进行Spearman相关分析检验水准O/=0.052结果2.1攻击行为评估2.1.1攻击参照组小鼠攻击行为评
16、估按照1.2.3项中的方法对攻击参照组小鼠的攻击行为进行评估.并对前后两次评估结果进行配对符号秩检验.结果显示攻击参照组小鼠的攻击性在前后两次评估间的差异无统计学意义(P>0.05).单样本K一5检验显示攻击参照组小鼠的摇尾次数,攻击次数及攻击时间均服从Poisson分布.表明攻击参照组小鼠在为期10min的评估期间内发起主动攻击的概率是一致的2.1.2对照组小鼠攻击行为评估对照组小鼠攻击行为观测结果详见表1由于对照组小鼠攻击行为观测结果呈非正态分?122?布,因此宜用四分位数间距(一)来表示各观测指标的离散程度由表1可知.对照组小鼠攻击潜伏期的四分位数间距在干预前为0min.干预后则为
17、1.37min:摇尾次数的四分位数间距在干预前为0次,干预后则为3次:攻击次数的四分位数间距在干预前为0次.干预后则为2次.攻击时间的四分位数间距在干预前为0S.在干预后则为2.25S为比较对照组小鼠在干预前后的攻击性是否存在差异.采用配对符号秩检验的方法对对照组小鼠干预前后的攻击性进行统计学分析.结果表明干预后的攻击潜伏期较干预前缩短.摇尾次数及攻击时间则高于干预前,差异具有统计学意义(P<0.05),而攻击次数在干预前后差异无统计学意义(P>0.05)2.1.3鱼油组小鼠攻击行为评估鱼油组小鼠的攻击行为观测结果详见表2由表2可知.鱼油组小鼠4个攻击性指标的观测值的,P75在干预
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