64380船舶污水处理排放水水质检验方法大肠菌群数检验法 标准 CB 3328.1-1988.pdf
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1、日 全国船舶标准化技术委员会专业标准 C B * 3 3 2 8 . 1 -3 3 2 8 . 6 - 8 8 船舶污水处理排放水水质检验方法 1 9 8 8 一 0 2 一 1 2发 布1 9 8 9 一 0 3 一 0 1实施 全国船舶标准化技术委员会发 布 全国船舶标准化技术委员会专业标准 船舶污水处理排放水水质检验方法 大肠菌群 数检验法 C a “ 3 3 2 8 . 1 一8 8 分类号 U 4 7 适用范围 本标准适用于船舶生活污水处理排 放水水质的大肠菌群数检验方法, 也可用于 其他废水、 河、 海水 等的大肠菌群数的检验。 原理 大肠菌群( c o l i f o r m g
2、 r o u p ) 是一群在 3 5 - - 3 7 培养 2 4 - 4 8 h 能发酵乳糖, 产酸产气的需氧和兼性厌 氧的、 革兰氏染色阴性反应的不形成袍子的杆状细菌, 其中 包括提高温度至4 4 . 5 士 。 . 2 培养2 4 h 之 内, 能产酸产气的粪性大肠杆菌。 采用多管发酵法, 以最可能数( m o s t p r o b a b l e n u m b e r ) 为指数, 即为大肠杆菌类细菌数目的指数。以 M P N表示大肠菌群数。 培养垂种 类及配制 3 . 1 月桂酞胰膘液态培养基( l a u r y l t r y p t o s e b r o t h ) (
3、 假定试验培养基) 胰膘生物试剂2 0 . 0 g 乳糖分沂纯5 . 0 9 磷酸氢二钾 K , H P O 。分析纯2 . 7 5 g 磷酸二氢钾 K H , P O .分析纯2 . 7 5 g 氯化钠N a C I分析纯5 . 0 g 月桂酞硫酸钠分析纯0 . 1 g 蒸馏水IL 灭菌前, 将上述配好的培养溶液分装入发酵管中, 所加入培养液的量。 必须使培养液在灭菌后还能 淹没发酵管内倒立的小管瓶。所加的培养基配制按表 1 规定。 表 1 月桂酞胰膘液态培养基的配制 接种水样 mL 试管 内 培 养 基 的 量 mL 培养荃+接种的总量 m L 所需脱水的月桂酥胰膘 液态培养基的浓度 mg
4、 / L 1 1 0 1 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 I 0 或 稍 多 1 0 2 0 5 0 3 5 2 0 1 1或稍 多 2 0 3 0 1 5 0 1 3 5 1 2 0 3 5 . 6 71 . 2 5 3 . 4 1 0 6 . 8 1 3 7 .1 2 1 3 . 0 全国船舶标准化 技术委员会1 8 8 8 - 0 2 一 1 2 批准 198 9一 0 3一 0 1实施 C BS 3 3 2 8 . 1 一8 8 灭菌后 p H值应为 6 . 8 e 3 . 2 亮绿乳糖胆汁液态培养基( b r i l l ia n t g r e e n la c t o s
5、 e b i l e b y o t h ) ( 确信试验培养基) 陈生物试剂1 0 . 0 g 乳糖分析纯1 0 . 0 g 牛胆生物试剂2 0 . 0 g 亮 绿分析纯。 . 0 1 3 3 g 蒸馏 水1L 分装按3 . 1 条规定。 灭菌后p H值应为 7 . 2 , 3 . 3 E C培养基( 确信试验及粪性大肠杆菌培养基) 胰膘或胰酪生物试剂2 0 . 0 g 乳糖分析纯5 . 0 g 胆盐混合物或 3 号胆盐分析纯1 . 5 g K ,H P O分析纯4 . 0 g KH, P O分析纯1 . 5g N a C l分析纯5 . 0 g 蒸馏 水IL 灭菌后p H值应为 6 . 9
6、 分装按3 . 规定。 3 . 4 A - 1 液态培养基( A - 1 b r o t h ) ( 粪性大肠杆菌培养基) 乳糖分析纯5 . 0 g 胰陈生物试剂2 0 . 0 g Na C l分析纯5 . 0g 水杨贰生物试剂0 . 5 g 聚乙烯乙二醇对异辛基苯乙醚分析纯1 . 0 m l , 蒸馏 水IL 先将固态配料溶解, 再加入聚乙烯乙二醇对异辛基苯乙醚。调节p H值为6 . 9 士0 . 1 , 分装入发酵管 中, 所加入培养液的量, 必须使培养液在灭菌后还能淹没发酵管内倒立的小管瓶。所加的培养基配制按 表 1规定。 3 . 5 乳糖胆盐培养基( 假定试验培养基) 直接采用市售成品
7、, 配制根据产品说明书。 3 . 6 稀释液的配制 a . 所用蒸馏水应不含有痕量的溶解金属, 灭菌或抑菌物质; 去离子水也可; b . 缓冲液; 配制磷酸盐缓冲储备液, 将 3 4 . 0 g 磷酸二氢钾( K H , P O , ) 溶解在5 0 0 m l , 蒸馏水中, 用 1 N的氢氧 化钠溶液调节p H值到 7 . 2 士0 . 5 , 然后再加燕馏水稀释到 1 L e 把 1 . 2 5 m L的磷酸盐缓冲储备液和 5 0 m L的氯化镁溶液 ( 3 8 g 的Mg c l , 加 1 L蒸馏水) 加到 1 L蒸 馏水中, 分装到瓶子内, 分装的量以蒸汽压灭菌 1 5 m i n
8、 后能维持 9 9 士2 . 0 mL 或 9 士0 . 2 m L为度。 c 陈溶液; d . 稀释液; 将以上配好的陈溶液, 用缓冲液 ( 见 3 . 6 b 条) 稀释至一定量, 以得 0 . 1 %的脉的水溶液, p H值最后 应为6 . 8 , 在蒸馏水中配制 1 0 %的陈溶液。 分装的量, 以蒸汽压灭菌 1 5 m i n 之后能维持 9 9 士2 . 0 mL或9 士0 . 2 m L为度。 C B “ 3 3 2 8 . 1 一8 8 注意: 在任何稀释水中制备细菌悬浮液, 不准在室温下停留3 0 m i n以上。 3 . 7培养基 的灭菌 配制好的培养基, 应立即分装到发酵
9、管中, 并在2 h 之内进行灭菌。灭菌温度为 1 2 1 C, 并在这一温 度下保持 1 5 m i n 。当灭菌气压降草零后, 应立即将培养基从蒸汽压灭菌器中取出, 冷却, 存放备用。 3 . 8 培养基的存放 3 . 8 . 1 成品粉状培养基必须放在干燥、 温度低于 3 0 的暗处, 一旦粉末结块状应弃去。 3 . 8 . 2 每次配制培养基量以一周内用完为度。存放在避光、 温度 2 -4 的条件下。存放的发酵管, 使用前应预先培养过夜, 弃去有气泡的管子, 经存放若管内液体损失超过 1 m L时, 也应弃去。 仪器 4 . 1 隔水式恒温培养箱( 温度在 2 0 -5 0 C ) 4
10、. 2 热空气灭菌烘箱1 7 0 士t o 0C 4 . 3 高压蒸汽灭菌器温度在 1 2 1 C 4 . 4 恒温水浴锅 4 . 5 电冰箱 4 . 6 药物天平精确至 0 . 1 g 4 . 7 发酵试管5支1 5 5 m m 4 . 8酒精灯 4 . 9 酸度计( p H计)精度 士0 . 1 个单位 4 . 1 0 接种器 4 . 1 1 采样瓶5 0 0 m L小口玻璃瓶 4 . 1 2 其他细菌培养所用的材料: 脱脂棉、 牛皮纸、 绳等。 采样 5 . 1 采样前处理。 5 . 1 . 1 含游离氯水样的采取。 对于含游离 氯的水样, 应在水样瓶消毒前就把脱氯剂加入瓶内, 硫代硫酸
11、钠( N a , S , O , ) 或亚硫酸 钠( N a , S O) 。 加 入 量 根 据 水 样中 所 含 游 离 氯 量 确 定, 测 定 分 析 按C B * 3 3 2 8 . 6 - 8 8 船 舶 污 水 处 理排 放水水质检验方法游离氯和总氯检验法 进行 5 . 1 . 2 无氯水样的采取不须加人脱氯剂。 5 . 1 . 3 水样瓶洗涤与消毒 水样瓶洗涤干净后, 应以蒸馏水或去离子水冲洗三次。洗涤完毕, 消毒前, 需加脱氯剂的, 加入脱氯 剂, 不需加脱氯剂的直接以牛皮纸包封好瓶塞外部。放在高压蒸汽灭菌器中在 1 2 1 下消毒 1 5 m i n ; 或 在 7 0 干
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