Ⅰ型登革病毒NS1基因克隆及其表达产物的免疫原性研究.pdf
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1、文章编号: ! “ “ # $ # % - 9 + ! # $ !经. , * ?诱导, 重组蛋白# $ !高效表达并纯化成功, 经0 1 2 3 1 4 56 7 8 3及9 : . $ )证实 重组蛋白# $ !可以被免疫血清和病人血清特异识别。结论 !型登革病毒非结构蛋白# $ !表达载体在大肠杆菌 ! A中高 效表达。纯化产物具有较强的免疫原性, 为进一步研究# $ !的生物学特性和血清学检测奠定了基础。 关键词: 登革病毒; 非结构蛋白; 克隆; 原核表达; 免疫原性 中图分类号: ) * + * 文献标识码: , $ % % 2 “ , 0A ! ?A = 9 #) 属黄病毒属成员
2、, 分V个 血清型, 均可引起登革热、 登革出血热和登革热休克 综合征。登革病毒广泛流行于全世界! 公司。其他 试剂均为进口分装或国产分析纯。 ! “ $ 血清标本临床确诊!型登革病毒首次感染 病人急性期血清( ,份由广州市! $ !提供, 并经澳 大利亚6 8 ? = . / 0试剂盒检测抗登革 病毒的/ A 抗体。 ! “ % 病毒培养 ! “ # “细胞在含( , B胎牛血清 + 细胞培养液中于C 2 D、 8 8 ? L ( Y% 3 + ; 8 ? L C Y- ( O 8 A 3 F L ? N # “ # 重组质粒的构建及鉴定 6 ! 5回收产物直接 克隆到) $ ( 2 3 4
3、载体中, 转化后挑选阳性菌落, 经 8 = () ;3 4 5 6K:) / 0 + %- . $8 D E 6 ? 7 6 8 F D 7 G! “ #H! 4 5 8$ % = 7 8 D E 6 ? 7; 3 4 5 6M:) / 0 + %8 D E 6 ? 7 6 8 F D 7 G! “ # $! 4 5 8$ % 8 = () ; ! “ # 重组质粒在大肠杆菌中表达与纯化 ) / 0 % - . $重组质粒转化的阳性克隆菌, 通过表达条件的 比较, 确 立 了 于N O培 养 体 系, 在$ I % : : ; 3N P ! * Q、 % R诱导条件下, 表达于K G达高峰。表
4、达蛋 白经. A . + ! , Q 0电泳示相对分子质量约为K $% % %, 与推测蛋白分子质量大小相符, 所表达的蛋白约占 总菌体蛋白的 % S。经分离证实表达产物以包涵 体形式存在, 经C B尿素裂解后, 用- D亲和层析树 脂进行纯化后获得较高纯度的重组蛋白, 见图。 ! “ $ 间接0 N P . ,检测兔血清中特异P E Q抗体用 - . $重组蛋白和全病毒建立的间接0 N P . ,检测兔 免疫血清, 结果表明在第一次免疫后兔血清即产生 特异的- . $ + P E Q和A T $ + P E Q抗体, 加强免疫数次 后, 该两种抗体滴度均逐步升高, 图K显示加强免疫 次后采血
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