冬凌草甲素增强U937细胞吞噬凋亡小体过程中ERK途径的调节作用.pdf
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1、冬凌草甲素增强 !“#$ 细胞吞噬凋亡小体 过程中 %;C= $“,+ 染色及 L0C=0M8 N1;C= $“,+, 吖啶橙染料, 佛波酯 (HTF) 购于美国 U5O34 公司; 蛋白质酪氨酸激酶(BM011614M*C5O841 M0O614=0R BM;03 (JF, GUF) ; HIJ 活力检测试剂盒 (H0B/4O) 4CC47 W=5A0 R0=0=5;848 /7B0 J61=6M0 J=57= 活力# 5$ % !/“8 9-的冬凌草甲 素作用于 ?#% 细胞 , :, -5, 5A 2, 应用 *= 活力检 测试剂盒, 测定 *= 酶活力, 按照产品说明书操作。 即收集细
2、胞, 加入 - !“ 细胞裂解液, 冰浴 : !(), 取 !“ 加入到 - !“ 的反应液中, 再加入 6 !“ 荧光 底物, #; 反应 # !() 后, 6;, - !() 终止反应。 每个样品中加入 - !“ 7孵育过夜, 辣根 过氧化物酶标记的羊抗兔二抗室温下孵育 5 2,充 分洗膜后用 HI+ 显色。 /# 结果 /$ !# 012 抑制剂 3+4()4+ 对 .*45.+4+ 诱导的吞噬 增强效果的影响# *N= 激酶在吞噬过程中发挥重要 作用 #。O(G - 是 /P(F/)() 作用于 ?#% 细胞的吞噬 曲线, 从图中可见, 5$ % !/“ 8 9- /P(F/)() 作
3、用 ?#%细胞-52后, 与对照相比, 吞噬作用明显增 643 !# 7889) .8 012 4+:4;4).* 3+4()4+ .+ +:)49 .8 .*45.+4+(“! Q “, # R#) SE1P/M2EG0C“(T0 ?#% 10“3 U0P0 MP0()1VWE40F U(42 G0)(340() X/P - 2,E)F 420) ()1VWE40F U(42 (*)/P U(42/V4 (+)5$ % !/“8 9- /P(F/C )() X/P -5 2 抑制剂 34EVP/C M/P()0 对 /P(F/)() 的吞噬刺激效果的影响。由图可 见, 不同浓度的 34EVP
4、/M/P()0 预先作用细胞 - 2 后, 34EVP/M/P()0 在适宜的浓度下 (- )!/“8 9-) 逆转 了 /P(F/)() 的吞噬增强作用。此结果提示 /P(F/)() 增强对凋亡小体的吞噬需要 *= 激酶的活化。 643 /# 7889) .8 02 4+:4;4).* .+ .*45.+4+B4+5A95 =:)49 ()4CA- 检测试剂盒检测 *= 激酶的活力。*= 激酶可使特异性荧光底物发生磷酸化, 从底物磷酸 化程度可反映 *= 激酶活力。结果表明 *= 活力 时间依赖性地增加,而 34EVP/M/P()0 抑制了 *= 的 活力 (O(G #) , 进一步说明 /
5、P(F/)() 增强对凋亡小体 的吞噬激活了 *= 途径。 /$ E# 7F2 抑制剂 0GHIJ“H 对冬凌草甲素诱导的 吞噬增强效果的影响#KD= 激酶存在于 *N= 和 *= 下游在调节吞噬方面发挥重要的作用 A。O(G A 显示 KD= 磷酸化抑制剂 *H76 对 /P(F/)() 诱导 的吞噬增强起到了抑制作用。 另外, 凋亡小体用吖啶橙染色, ?#% 细胞用 ./01234 #567 染色, 荧光显微镜下观察形态, 可见 -中国药理学通报 ( )(:+ 678 98%: ;838 =84 ;.=7 :=?3$44.5/ $3.4$5.5D E=83 .59?B=.$5 $3 4.8
6、385= =.#8 : .54.9=84, (2F 9=.G.=C ;: 8H#.584 !“# ?% (. ,-“.,/“/9“/.F)(. 783#,)5*“) +*“6F:3*“,/ (“! I “, # JK) L*KM 98%: ;838 =84 ;.=7 ()*+“,* $3 ! 7,54 =785 .59?N B=84 ;.=7 OP M !#$%.5/ .59?B=.$5,=78 98%: ;838 9$N9?%=?384 ;.=7 = KMQ $3 5$=783 *“ #.5D (7/$9C=$:.: ;: =785 48=83#.584 ?:.5/ %./7= #.93$:
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