实时荧光定量PCR技术详解和总结.ppt
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2、PCR反应: Xn=X02n 非理想的PCR反应: Xn=X0(1+Ex)n 方程式两边同时取对数得: log Xn=log (X0 (1+Ex)n) 整理方程式得: log X0= (- log(1+Ex) )n+ log Xn 将C(t)和达到C(t)值时终产物的量Xc(t)带入上式得: log X0= (- log(1+Ex) ) C(t)+ log Xc(t) 初始浓度的对数与循环数呈线性关系,n:扩增反应的循环次数 Xn:第n次循环后的产物量 X0:初始模板量 Ex:扩增效率,初始模板量越多,C(t)值越小 C(t)与初始模板浓度的对数值成线性关系,实时定量PCR标准曲线,定量原理,浓度的对数值与循环数呈线性关系,根据样品扩增达到域值的循环数(Ct值)就可分析样品中起始模板量,定量PCR的实验步骤,标准菌株DNA的提取 QPCR探针和引物的设计 阳性克隆质粒的构建 荧光定量PCR反应 定量标准曲线 重复性实验 灵敏性实验,实验材料,
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