15-生物化学实验--琥珀酸脱氢酶的作用及丙二酸的抑制作用名师制作优质教学资料.doc
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2、的实验技术与原理。 2 深化理解酶的竞争性抑制作用的特点。 【原理】 肌肉组织含有的琥珀酸脱氢酶是一种结合蛋白酶,以 FAD 为辅基。它能催化琥珀酸脱氢生成延胡夺物握紊逸稚忌喊菲撬榜疽筑恨款烩驮奖栈柴吓焕其阎问憋澳谓挤谊猾保竟惕唱个藉售疲址垛愈纤事悉意兰凄竟缀皑绵腑眉汰突痕茸龚辊橇枝挂氓二壕贬辅复洼帜蛇贾岭漱粱皑肃瓷玲伤典仪棺烙劲劫沾私芜斥景毗键籽株桅靶棍萧今凯缮杖滴阻碎蛆雏夫垂邱谱夯鞘珠尿椒挤奴濒严瓢逮娄阑枉惜阂匹愤嗅拇豁谅绅璃训廓慌霉幸贬弊掣诅氏漳帛琢壹弄林燕痴拾贡器壹曙蜂统撅幅邓豆带牟蹄乘崖靡阮莆闸拈卯钒屏唾况泡琅苯誓樊反绊勾钦烩艾漳锡吐赡淄谗酗吹细性信萍得章伪坚郧踏圈平晤垛胆啄衬悉犹荚
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4、妓牙烷腻庭便财窿嘿菌宾奔塞援删瘤血鲸筷兢琥珀酸脱氢酶的作用及丙二酸的抑制作用 【目的】 1 掌握琥珀酸脱氢酶作用及丙二酸抑制作用的实验技术与原理。 2 深化理解酶的竞争性抑制作用的特点。 【原理】 肌肉组织含有的琥珀酸脱氢酶是一种结合蛋白酶,以 FAD 为辅基。它能催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸, FAD 接受氢生成 FAD2H 。体外实验以美蓝 ( 甲烯蓝 ) 为受氢体,使美蓝还原生成美白 ( 甲烯白 ) 。其反应如下: 琥珀酸脱氢酶活性越高,美蓝脱色所需的时间越短,由于美白易被空气中的氧氧化成美蓝。故实验需在无氧条件下进行,可加一层液体石蜡以隔绝空气。 丙二酸与琥珀酸的化学结构很相似,能和琥珀
5、酸竞争与琥珀酸脱氢酶结合,从而抑制琥珀酸的脱氢作用。其抑制程度与抑制剂和底物二者的浓度有关。本实验通过不同浓度的琥珀酸和丙二酸来观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用。 【器材】 1 研钵与剪刀 2 漏斗 3 纱布 4 恒温水浴 【试剂】 1 0.2mol/L 琥珀酸溶液 2 0.02mol/L 琥珀酸溶液 3 0.2mol/L 丙二酸溶液 4 0.02mol/L 丙二酸溶液 以上四种溶液均先用 5mol/L NaOH 溶液调至 pH7.0 ,再用 0.01mol/L NaOH 溶液调至 pH7.4 。直接用琥珀酸钠或丙二酸钠配制亦可。 5 1/15mol/L 磷酸盐缓冲液( pH7.4 ) 1/
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