缬沙坦对大鼠心肌梗塞后左室胶原改建的作用.pdf

第 3 0 卷第 4 期吉大 学 学 报(医 学 版 ) 5 7 42 0 0 4 年 7 月 J o u r n a o f 林 夕 J i l i nUn i v e r s i t y ( Me d i c i n e E d i t i o n ) Vo l . 3 0 N o . 4 J u l y 2 0 0 4 文章编号 1 6 7 1 - 5 8 7 X ( 2 0 0 4 ) 0 4 - 0 5 7 4 - 0 3 撷沙坦对大鼠心肌梗塞后左室胶原改建的作用 孙明莉，刘晓亮，黄均树，杨济洲 ，孔繁飞 ( 吉林大学第一医院急救医学科，吉林 长春 1 3 0 0 2 1 ) 摘要 目的: 探讨绷沙坦对实验性心肌梗塞大鼠左心室胶原改建的影响。 方法: 7 0 只S D大鼠随机分成6 组: 假手术对照组 S h a m 1 ( n =5 ) 和S h a m 4 ( n =5 ) ， 合称S h a m组， 开胸打开心包后立即缝合， 用生理盐水 1 . 5 m L 灌胃 ( 每日1 次) ，分别常规饲养 1 和4 周; 对照组A MI 1 ( n =1 0 )和A MI 4 ( n =1 0 ) ，大鼠结扎冠状动脉前 降支建立心肌梗塞模型后立即用生理盐水 1 . 5 m L灌胃 ( 每日1 次) ，分别常规饲养 1 和 4 周;撷沙坦 1 周组 V A S 1 ( n =1 0 )及4 周组V A S 4 ( n =1 0 ) ， 心肌梗塞造模后立即用绷沙坦1 0 m g - k g - ' “ d - 加生理盐水l . 5 m L 灌胃1 或4 周 ( 每日1 次) 。 采用免疫组化法测量非梗塞区左室心肌 I 型及， 型胶原蛋白的比值， 放免法测定血浆 血管紧张素，( A n g I ) 、 醛固酮 ( A L D ) 、内皮素 ( E T ) , T X A : 及P G I , 。 结果: 非梗塞区左室心肌 I 型及， 型 胶原蛋白的比 值降低; 与心肌梗塞对照组比 较， 绷沙坦可降低血浆A L D , E T及T X A , 水平， 使A n g I 及P G I Z 升高。结论:绷沙坦对心肌梗塞后左心室胶原改建可产生有益的影响。 关键词绷沙坦;心肌梗塞; 胶原;血管紧张素 I ;疾病模型.动物 中图分类号R - 3 3 2 ; R 9 7 2 文献标识码A E f f e c t s o f v a l s a r t a n o n l e f t v e n t r i c u l a r c o l l a g e n r e mo d e l i n g i n r a t mo d e l s w i t h my o c a r d i a l i n f a r c t i o n S U N Mi n g - l i ， L I U X i a o - l i a n g , D O N G J u n - s h u ， Y A N G J i - z h o u 0 ，K O N G F a n - f e i 0 ( D e p a r t me n t o f E me r g e n c y , F i r s t H o s p i t a l ， J i l i n Un i v e r s i t y , C h u a n g c h u n 1 3 0 0 2 1 ，C h i n a ) A b s t r a c t ; O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t s o f v a l s a r t a n o n e x p e r i m e n t a l l e f t v e n t r i c u l a r c o l l a g e n r e m o d e l i n g ( L V R M) i n r a t s w i t h m y o c a r d ia l i n f a r c t i o n ( MI ) . M e t h o d s L i g a t e a n t e r i o r d e s c e n d i n g b r a n c h e s o f c o r o n a r y a r t e r y o f S p r a g u e - D a w l e y r a t s w e r e u s e d t o e s t a b l i s h mo d e l s o f a c u t e my o c a r d i a l i n f a r c t i o n ( AMI ) . S e v e n t y r a t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o 6 g r o u p s : S h a .m g r o u p s ; i n c l u d i n g S h a m 1 ( n =5 ) a n d S h a m 4 ( n =5 ) . T h e p e r ic a r d i u m o f r a t s i n S h a m g r o u p s w e r e c u t o p e n a n d s u t u r e d i m m e d i a t e l y . T h e r a t s w e r e r o u t i n e l y b r e e d e d f o r 1 w e e k a n d 4 w e e k s ， r e s p e c t i v e l y , 1 . 5 m L s a l i n e w a s p o u r e d i n t o s t o m a c h o f r a t s o n c e a d a y ; C o n t r o l g r o u p s : A MI 1 ( n = 1 0 ) a n d A MI 4 ( n =1 0 ) . 1 . 5 m L s a l i n e w a s p o u r e d i n t o s t o m a c h o f r a t s w i t h A MI o n c e a d a y f o r 1 w e e k a n d 4 w e e k s ， r e s p e c t i v e l y ; 3 V a l s a r t a n g r o u p s : V A S T ( n =1 0 ) a n d V A S 4( ， =1 0 ) . V a l s a r t a n o f t h e d o s a g e o f 1 0 m g · k g - ' · d 一 ' a n d 1 . 5 m L s a l i n e w e r e p o u r e d i n t o s t o m a c h o f r a t s w i t h A MI f o r 1 w e e k a n d 4 w e e k s ( o n c e a d a y ) ， r e s p e c t i v e l y . T h e r a t io o f c o l l a g e n t y p e I t o，i n n o n - i n f a r c t i o n m y o c a r d i u m i n l e f t v e n t r i c l e w a s d e t e c t e d b y i m m u n o h i s t o c h e m i c a l m e t h o d . T h e l e v e l s o f A n g， ， a l d o s t e r o n e ( A L D ) ， e n d o t h e l i n ( E T ) ， t h r o m b o x a n e A Z ( T X A Z ) ， a n d p r o s t a c y c l i n I Z ( P G I Z ) i n p l a s m a w e r e m e a s u r e d b y r a d i o i m m u n o a s s a y . R e s u l t s T h e r a t i o o f c o l l a g e n t y p e I t o H i n n o n - i n f a r c t i o n m y o c a r d i u m i n l e f t v e n t r i c u l a r w a s d e c r e a s e d ; C o m p a r e d w i t h c o n t r o l g r o u p s ，v a l s a r t a n c o u l d d e c r e a s e A L D , E T, a n d T X A Z a n d i n c r e a s e A n g I a n d P G I Z i n p l a s m a . C o n c l u s i o n Va l s a r t a n h a s b e n e f i c i a l e f f e c t s o n L VRM a f t e r MI . K e y w o r d s :v a l s a r t a n ; m y o c a r d i a l i n f a r c t io n ;c o l l a g e n ; a n g i o t e n s i n，;d i s e a s e m o d e l s , a n i m a l 收稿日期2 0 0 3 - 1 0 - 1 5 仁 基金项目 吉林省科技厅资助课题 ( 9 3 3 5 3 9 ) 仁 作者简介 孙明莉 ( 1 9 7 2 -) ， 女， 吉林省长春市人，主治医师，医学硕士， 主要从事急性心肌梗塞的发病机理及治疗的 研究 。 万方数据 孙明莉，等. 绷沙坦对大鼠心肌梗塞后左室胶原改建的作用 心肌梗塞后左心室重构 ( L V R M)可导致左室 扩张加剧，梗塞区变薄，非梗塞区也存在着形态学 的变化，最终影响心功能。撷沙坦作为非肤类的血 管紧张素I 受体拮抗剂 ( A I R A ) ， 对I . V R m和心 脏功能的影响国内外报道较少。本研究利用急性心 梗塞模型，探讨撷沙坦对大鼠心肌梗塞后左室胶原 改建的作用。 1 材料与方法 1 . 1 动物选择及心肌梗塞模型的建立选用 2 5 0 - 3 0 0 g S D大鼠1 0 0 只 ( 由 本校实验动物中心 提供) ， 雌雄不限。 人选后随机取大鼠， 结扎冠状动 脉制备心肌梗塞动物模型;结扎部位位于左侧冠状 动脉起源点下1 - 2 m m处。 根据心电图I 导R波高 尖、S T段抬高判断心肌梗塞模型的成功建立。 1 . 2 动物及分组共 7 0 只大鼠进人实验。动物随 机分成 6组:假手术对照组，包括 S h a m 1和 S h a m 4 ，各5 只， 合称S h a m组， 开胸打开心包后 立即缝合， 用生理盐水1 . 5 m l ， 灌胃， 每日1 次， 分 别常规饲养 1 和4 周;心肌梗塞对照组，包括 A MI 1 和A MI 4 ， 各1 0 只， 制作心肌梗塞模型后立 即用生理盐水1 . 5 ml , 灌胃， 每日1 次， 分别常规饲 养 1 和4 周;撷沙坦1 周组 ( V A S 1 )及4 周组 ( V A S 4 ) 各1 0 只， 制作心肌梗塞模型后， 参照文献 1 方法，立即用撷沙坦 ( 北京诺华制药公司提供， 批号9 9 0 2 0 2 1 ) 1 0 m g· k g - 加生理盐水1 . 5 m l . 灌 胃，每日1 次，分别常规饲养 1 和4 周。实验中有 5 只大鼠死亡，共 4 5 只大鼠完成实验。 1 . 3 血浆血管紧张素I ( A n g I ) 、 醛固酮 ( A L D ) 及内皮素 ( E T) 01 11 定采用放免法测定， A n g I 试 剂盒由中国北方生物技术研究所提供。 A L D试剂盒 由美国D P C公司提供， E T试剂盒由北京东亚免疫 试剂研究所提供。操作程序及注意事项全部按照药 盒说明书进行。血浆标本的处理参照文献【 2 方法。 A n g I 单位为n g · L ', A L D单位为p m o I _ · L - ' , E T单位为n g· I , - , . 1 . 4血桨血检 素 A Z ( T X A , )及前列腺 素 I , ( P G I , ) 测定采用放免法测定， 试剂盒由苏州医学 院血栓室提供。操作程序及注意事项全部按照药盒 说明书进行。由于T X A : 的半衰期近3 0 s , P G I : 为 2 - 3 m i n ，迅速转化为失活的稳定产物血栓素 B 2 ( T X B , ) 和 6 - 酮一 前列腺素F , o ( 6 - k e t o - P G F , . ) 。 因此， 本文作者以国内外通用的测定 T X B , 和 6 - k e t o - P G F I 口 的方法来反应 T X A : 和 P G I : 的水平。 1 . 5 非梗塞区 ( 含梗塞周边区)左室心肌 I 型及 II 型胶原蛋白的比值参照文献 习 的方法制作心 肌 I 型及II型胶原蛋白的免疫组化切片。 大鼠I 型、 II 型胶原单抗及即用型 S A B C试剂盒由武汉博士 德生物工程有限公司提供。将左室乳头肌横切面水 平下心肌立即放人液氮中保存，用甲基纤维树醋 ( O C T)包埋。连续水平冰冻切片 2 张 ( 5 - 8 p m) , 一张用于 I 型胶原蛋白染色、一张用于 II 型胶原蛋 白染色。 按标准技术进行免疫组化切片染色操作。 然 后在C I N A - 4 0 0 图像分析仪上进行 I 型及II 型胶原 蛋白的相对定量分析。非梗塞区左室心肌 I 型及 班 型胶原蛋白的比值=I 型胶原单位面积下的光亮 度/ II 型胶原单位面积下的光亮度。 1 . 6 统计分析 所有数据均以王 士 : 表示， 用S A S 软件分析数据，采用方差分析方法进行两两均数的 比较。 2 结果 2 . 1 绷沙坦对心肌梗塞大鼠血浆中T X B , , P G I , , A n g I 、 A L D及E T的影响与S h a m组相比， A MI 组T X B : 明显升高( P 0 . 0 1 ) , 6 - k e t o - P G F , 。 明显降 低 ( P 0 . 0 5 ) ;与A MI 1 组相比，V A S T 组T X B , 明显降低 ( P 0 . 0 5 ) , 6 - k e t o - P G F , . 明显升高 ( P 0 . 0 5 ) ; 与A MI 4 组相比， V A S 4 组T X B : 明显降低 ( P 0 . 0 5 ) , 6 - k e t o - P G F , 。 明显升高 ( P 0 . 0 5 ) 。 与 S h a m组相比，A MI 1 组A n g I 、A L D和E T增加 ( P 0 . 0 5 ) ;与A MI 1 组相比， V A S 1 组A n g II 增 加， A L D和E T明显降低 ( P 0 . 0 5 ) ; 与S h a m组 相比，A MI 4组的血浆 A n g II增加，A L D降低 ( P 0 . 0 5 ) , E T无明显变化;与 A MI 4组相比， V A S 4组血浆 A n g I增加，A L D和 E T降低 ( P 0 . 0 5 ) ，见表 l , 2 . 2 绷沙坦对心肌梗塞大鼠左室非梗塞区心肌 I 型及 I型胶原蛋 白比值 的影 响与 S h a m 组 ( 2 . 1 0 士0 . 6 0 ) 相比， A MI 1 组 I 型及II 型胶原蛋白 的比值 ( 4 . 5 5 士2 . 3 8 )上升 ( P 0 . 0 5 ) ;与A MI 1 组比较，V A S 1 组 I / I t 比值( 1 - 8 9 士1 . 0 1 ) 显著下 降 ( P 0 . 0 1 ) ， 回复至S h a m组水平; 与S h a m组相 比，A MI 4组的比值 ( 5 . 2 6 士2 . 3 5 )上升 ( P 0 . 0 5 ) ; 与A MI 4 组比较， V A S 4 组的比值( 1 . 7 9 士 0 . 3 2 ) 显著下降 ( P 0 . 0 1 ) ， 回复至S h a m组水平。 万方数据 5 7 6吉林大学学报 ( 医学版)第 3 0 卷第 4 期2 0 0 4 年 7 月 T a b . 1 E f f e c t s o f v a l s a r t a n o n t h e l e v e l s o f p l a s m a T X B Z ， 6 - k e t o - P G F I. , A n g， , A L D, E T, a n d T X B Z / 6 - k e t o - P G F , a i n r a t s w i t h my o c a r d i a l i n f a r c t i o n ( x 士s ) Gr o u p n ALD S h a m AM I 1 VAS 1 AM I 4 VAS 4 1 0 TX B Z ( p a / n g · L 一 1 ) 1 4 3 . 7 6 士5 . 6 6 2 3 7 . 5 9 士9 . 7 6 “ 1 8 6 . 1 1 士9 . 5 2 ' 1 8 6 . 9 8 士9 . 6 9 “ 1 6 0 . 2 1 士5 . 7 5 . 6 - k e t o - P GF I . ( p a / n g· L 一 I ) 2 4 . 8 1 士5 . 2 1 1 4 . 7 1 士6 . 1 6 “ 1 9 . 6 8 士4 . 5 8 ' 1 9 . 1 1 士2 . 2 1 “ 2 6 . 6 5 士 4 . 2 3 ' An g I ( p a / n g · L 一 ， ) 1 3 8 0 . 9 3 士4 2 8 . 1 9 1 9 1 8 . 9 8 士4 5 6 . 7 5 “ 2 4 5 7 . 2 1 士4 9 6 . 4 2 ' 2 2 4 6 . 3 8 士4 8 9 . 5 9 “ 2 6 7 1 . 9 2 士4 2 0 . 9 1 . ( c u / p m o l · L 一 ) 3 1 1 8 . 5 7 士4 0 2 . 3 4 3 6 6 7 . 6 2 土4 1 7 . 7 1 4 2 6 1 0 . 4 5 士3 8 7 . 0 3' . 1 0 T X B Z / 6 - k e t o 一 P GF加 6 . 0 4 士1 . 3 8 1 8 . 5 0 土8 . 5 7 “ 9 . 8 5 士1 . 9 3二 9 . 8 5 士0 . 6 6 “ 6 . 1 8 士1 . 2 1二 2 9 9 2 . 5 7 士3 8 4 . 6 6 “ 2 4 7 6 . 9 3 士3 7 9 . 8 9. ET ( p u / n g· L - ) 3 . 8 6 士0 . 3 6 6 . 8 9 士0 . 7 8 “ 4 . 2 2 士0 . 4 4 3 4 . 0 0 士0 . 4 1 3 . 3 7 士0 . 5 0 ' 铃 P 0 . 0 5 , “ x P 0 . 0 1 c o m p a r e d w i t h A MI g r o u p ; ' P 0 . 0 5 c o m p a r e d w i t h s h a m g r o u p 3 讨论 正常心肌中 I 型胶原占8 0 0 0 - 8 5 %, 1 型胶原 含量高的组织在强度和力度上都不如 I 型胶原含量 高的组织 4 。 心肌梗塞后左室非梗塞区心肌( 含梗塞 周边区) I 型及 皿型胶原蛋白的比值上升会增加心 肌的僵硬度，使左室顺应性下降，最终降低舒张功 能 3 。 本实验结果说明， 撷沙坦可抑制梗塞后胶原纤 维的增生或减少胶原蛋白的沉积，抑制 I 型胶原蛋 白的合成，改变胶原蛋白的构成比，减弱左室非梗 塞区发生心肌纤维化，抑制心肌梗塞后的左心室重 构。 应用撷沙坦1 周时， A n g I 的浓度有明显升高， 4 周时也有升高趋势， 而A L D水平明显降低。 这是 因为在使用缀沙坦之后，血浆肾素活性增加，导致 A n g II 在血浆水平的升高 5 1 a 缀沙坦通过与A T , 受 体相互作用， 阻止A n g I 与A T : 受体的结合， 虽然 血浆A n g I 浓度增加， 但不能发挥与A T ， 受体有关 的生物学作用( 如醛固酮释放、 血管平滑肌收缩、 血 管及心脏增生) 。A MI 后应用缴沙坦，血浆中P G 几 增高，T X A : 降低，T X A Z / P G I : 降低，其机制可能 是应用撷沙坦后血浆A n g I 水平代偿升高， 再度激 活A n g I A T : 受体， 令其表达增加， 从而产生血管 舒张、抑制细胞生长分化的作用，并通过促进内皮 产生N O, P G I : 及缓激肤 ( B K)的作用最终缩小梗 塞面积， 减少胶原的沉积， 减轻L V R M, A n g I 可 以剂量依赖的方式刺激E T分泌增加; 当以AI R A 抑制受体活性之后，A n g II 的这一刺激作用被完全 阻断1 6 3 。本研究应用撷沙坦 1 周后血浆E T水平下 降，结果与之相符。同时也可能与应用撷沙坦后血 浆A n g I 水平代偿升高， 激活A T , 受体令其表达增 加，抑制细胞生长分化的作用有关。 综上所述， 撷沙坦对心肌梗塞后 L V R M 可产生 有益的影响。 参考文献 1 Mi L a v e t z J J , R a y a T E . J o h n s o n C S , e t a l m y o c a r d i a l i n f a r c t i o n i n r a t s , c a p t o p r i l v e r s u s S u r v i v a l l o s a r t a n J AC C, 1 9 9 6 , 2 7 : 7 1 4 - 7 1 9 . 2 雷立权， 田 斌， 高广道. 心肌梗塞后心肌局部和循环肾素一 血 管紧张素系统的变化 月. 西安医科大学学报， 1 9 9 4 , 1 5 : 3 1 4 . 3 C l e u t j e n s J P M, V e r l u y t e n MJ A, S m i t s J F M, e t a l . C o l l a g e n r e m o d e l i n g a f t e r m y o c a r d ia l i n f a r c t io n i n t h e r a t h e a r t J . A m J P a t h o l , 2 0 0 2 , 1 4 7 , 3 2 5 - 3 3 8 . 4 Wa u g h J . K e a t i n g G M. L o s a r t a n , i n t h e r e d u c t io n o f s t r o k e r i s k i n p a t i e n t s w i t h h y p e r t e n s i o n a n d l e f t v e n t r i c u l a r h y p e r t r o p h y J . A m J C a r d io v a s c D r u g s , 2 0 0 3 . 3 ( 5 ) :3 7 1 - 3 7 7 . 5 G o l d J A , R a h k o P S . A C E i n h i b i t o r s v s . a n g io t e n s i n I r e c e p t o r b l o c k e r s i n a c u t e m y o c a r d i a l i n f a r c t i o n a n d h e a r t f a i l u r e J . WMJ , 2 0 0 4 .1 0 3 ( 1 ) :7 1 - 7 2 . 6 T a k a h a s h i T , A n z a i T, Y o s h i k a w a T , e t a l . A n g io t e n s in r e c e p t o r b l o c k a d e i m p r o v e s m y o c a r d i a l b e t a - a d r e n e r g i c r e c e p t o r s i g n a l i n g i n p o s t i n f a r c t i o n l e f t v e n t r ic u la r r e m o d e l i n g , a p o s s i b l e l i n k b e t w e e n b e t a - a d r e n e r g i c r e c e p t o r k i n a s e - 1 a n d p r o t e in k i n a s e C e p s il o n i s o f o r m J . J A m C o l l C a r d i o l , 2 0 0 4 , 4 3 ( 1 ) :1 2 5 - 1 3 2 . 长春中医学院 ” 骨伤一班 万方数据