维生素类药物分析.ppt

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1、第十四章第十四章 维生素类药物的分析维生素类药物的分析 Chapter 14 Analysis of VitaminsChapter 14 Analysis of Vitamins学习要求学习要求掌握掌握VitA的鉴别和含量测定；的鉴别和含量测定；VitC的鉴别、检查和含量测定。的鉴别、检查和含量测定。熟悉熟悉VitB1的鉴别和含量测定；的鉴别和含量测定；VitE的鉴别、检查和含量测定。的鉴别、检查和含量测定。了解了解VitD的鉴别、检查和含量测定。的鉴别、检查和含量测定。概概 述述一、概念一、概念 维生素维生素1 1）维持人体正常生理功能所必需的一类微量）维持人体正常生理功能所必需的一类微量

2、 的生物活性物质。的生物活性物质。2 2）大多数人体内不能自行合成）大多数人体内不能自行合成,必须从食物必须从食物 中摄取。中摄取。VitAVitA 缺乏缺乏 夜盲症夜盲症 VitBVitB1 1缺乏缺乏 脚气病脚气病 VitCVitC 缺乏缺乏 坏血病坏血病 VitDVitD 缺乏缺乏 如果人体缺少某种维生素，就会如果人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症，而影响人体的引起维生素缺乏症，而影响人体的正常生理机能。正常生理机能。水溶性：水溶性：VitA、D、E、K等等VitB族（族（B1、B2、B6、B12等）等）VitC、烟酸、叶酸、烟酰胺、泛、烟酸、叶酸、烟酰胺、泛酸等酸等脂溶性：脂溶性

3、二、分类二、分类按溶解度按溶解度结结构构性性质质VitA、D、E、B1、C鉴鉴别别试试验验杂杂质质检检查查含含量量测测定定VitAVitA1 1：视黄醇，生物活性最高视黄醇，生物活性最高VitAVitA2 2：去氢维生素，活性是去氢维生素，活性是V VA1A1的的30-40%30-40%VitAVitA3 3：去水维生素，活性是去水维生素，活性是V VA1A1的的0.4%0.4%第一节第一节 维生素维生素A A的分析的分析 Analysis of vitamin Analysis of vitamin A A VitA故通常所说的维生素故通常所说的维生素A A是指维生素是指维生素A A1 1

4、人工合成的人工合成的V VA A醋酸酯结晶醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶加精制植物油制成的油溶液，还有液，还有VAVA胶丸、胶丸、V VADAD胶丸胶丸和和V VADAD滴丸滴丸Ch.Pv 药典收录情况药典收录情况环己烯环己烯共轭多共轭多烯侧链烯侧链 存在多种立体异存在多种立体异 构化合物构化合物 具有具有UVUV吸收吸收1 1 化学结构化学结构一结构与性质一结构与性质CH2OR654321987654321lR=HVitA醇醇VA1retinollR=COCH3VitA醋酸酯醋酸酯vitaminAacetatelR=COC15H31VitA棕榈酸酯棕榈酸酯vitaminApalmitat

5、eCH2O R去氢去氢VitA（A2，dehydroretinol）C H2去水去水VitA（A3，anhydroretinol）6个共轭双键个共轭双键u（1 1）环己烯）环己烯 +共轭多烯侧链；共轭多烯侧链；5 5个双键个双键u（2 2）存在多种立体异构体，具有）存在多种立体异构体，具有UVUV吸收吸收 天然天然 VitAVitA 侧链为全反式；侧链为全反式；u（3 3）通常所说的维生素）通常所说的维生素A A是指维生素是指维生素A A1 1u（4 4）天然来源为鱼肝油，主要为）天然来源为鱼肝油，主要为醋酸酯和醋酸酯和 棕榈酸酯。目前多为人工合成产物棕榈酸酯。目前多为人工合成产物结构特点：结

6、构特点：（二）性（二）性 质质 Properties1 1溶解性溶解性 2 2不稳定性不稳定性 3 3紫外吸收特性紫外吸收特性4 4与三氯化锑呈色与三氯化锑呈色不溶于水不溶于水溶于乙醚，溶于乙醚，氯仿，氯仿，异丙醇，环己烷异丙醇，环己烷，脂肪和油。脂肪和油。1 1溶溶 解解 性性 VA光、热、氧化剂、氧光、热、氧化剂、氧氧化产物（无活性）氧化产物（无活性）2 2不不 稳稳 定定 性性 共轭多烯侧链共轭多烯侧链 性质不稳定性质不稳定.临床用其醋酸酯或棕榈酸酯的油溶液临床用其醋酸酯或棕榈酸酯的油溶液 密封、凉暗处保存，充氮气或加入抗氧剂密封、凉暗处保存，充氮气或加入抗氧剂维生素维生素A的氧化产物：

7、无生物活性的氧化产物：无生物活性环氧化物环氧化物维生素维生素A醛醛维生素维生素A酸酸CH2OHOCOOHCHOCH2OHO具有共轭多烯侧链具有共轭多烯侧链紫外吸收。紫外吸收。maxmax=325=325328nm328nm，随随VAVA存在状态以及所用的溶剂，最大存在状态以及所用的溶剂，最大 吸收波长的位置有所不同吸收波长的位置有所不同鉴别、含量测定鉴别、含量测定3 3紫外吸收特性紫外吸收特性 鉴别鉴别 含量测定含量测定4 4与与SbCl3呈色呈色Carr-PriceVA蓝色蓝色SbCl3CHCl3紫红色紫红色max=620nmua.溶解性溶解性ub.不稳定性不稳定性uc.紫外吸收特性紫外吸收

8、特性ud.与与SbCl3作用作用小结小结.维生素维生素A A结构性质结构性质CH2OR654321987654321二、鉴别试验二、鉴别试验Carr-PriceUVTLCVitA(1020IU/ml)蓝色蓝色SbCl3/CHCl3紫红色紫红色无水无水/无醇无醇（一）三氯化锑反应（一）三氯化锑反应 Carr-Price反应机理：反应机理：VA与三氯化锑与三氯化锑(SbCl3)中存在的中存在的SbCl5作用形成作用形成不稳定的蓝色正碳离子。不稳定的蓝色正碳离子。注意事项：注意事项：反应需在无水、无醇条件下进行。反应需在无水、无醇条件下进行。溶剂：无水三氯化锑的无醇氯仿溶液溶剂：无水三氯化锑的无醇氯

9、仿溶液乙醇可与正碳离子作乙醇可与正碳离子作用，使正电荷消失用，使正电荷消失水可使水可使SbCl3水解成水解成SbOClVitA：5个共轭双键，无水乙醇液个共轭双键，无水乙醇液max=326nmVitA2、A3：6个共轭双键，红移个共轭双键，红移.（二）紫外分光光度法（二）紫外分光光度法 UV例：例：VA和其标准品用环己烷溶解和其标准品用环己烷溶解展开剂：环己烷展开剂：环己烷乙醚（乙醚（8：2）薄层板：薄层板：硅胶硅胶G显色剂：显色剂：SbCl3T.S.现现象：象：蓝色斑点蓝色斑点Rf：VA醇醇0.08VA醋酸酯醋酸酯0.41VA棕榈酸酯棕榈酸酯0.75目的：鉴别醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯目的：

10、鉴别醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯（三）薄层色谱法（三）薄层色谱法 TLC三、含量测定三、含量测定1 1紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法2 2 比比 色色 法法3 3 高效液相色谱法高效液相色谱法（一）（一）紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法 Ch.PCh.P 2005 2005利用利用共轭多烯共轭多烯结构，结构，在在325328nm处有选择性吸收峰处有选择性吸收峰（1 1）原因）原因（2 2）原理）原理（3 3）波长的选择）波长的选择（4 4）测定方法）测定方法方法：三点校正法方法：三点校正法三波长测定法三波长测定法（1 1）原因）原因为了消除杂质（相关物质）吸收所引起的误差为了消除杂

11、质（相关物质）吸收所引起的误差相关物质相关物质结构相似结构相似,维生素维生素A A最大吸收波长最大吸收波长 附近也有吸收，对测定有影响。附近也有吸收，对测定有影响。MortonMorton和和StubbsStubbs等人在等人在19461946年提出了三点年提出了三点 校正法。校正法。l相关物质的吸收相关物质的吸收d.鲸醇：维生素鲸醇：维生素A醇的二聚体，醇的二聚体，无生物活性无生物活性a.维生素维生素A的衍生物（的衍生物（A2、A3）b.维生素维生素A的氧化产物的氧化产物c.合成时的中间体合成时的中间体e.维生素维生素A异构体异构体f.稀释用油稀释用油（2 2）原理：假定、根据）原理：假定、

12、根据a:a:杂质吸收在杂质吸收在310nm310nm340nm340nm范围近似呈一条直线，范围近似呈一条直线，随随,A,Ab:b:物质对光的吸收具有加和性物质对光的吸收具有加和性 A A样品样品 =A=A维生素维生素A A+A+A相关物质相关物质（3 3）波长的选择）波长的选择 2 2、3 3：分别在：分别在 1 1两侧两侧 1 1：VitAVitA的的 maxmax等波长差法：等波长差法：等吸收比法：等吸收比法：等波长差法：测等波长差法：测VitAVitA醋酸酯醋酸酯 1=328nm;2=316nm;3=340nmii ii等吸收比法：测等吸收比法：测VitAVitA醇醇 1=325nm;

13、2=310nm;3=334nm*波长的选择波长的选择 V VA A醋酸酯醋酸酯 1 1=328nm =328nm 2 2=316nm =316nm 3 3=340nm=340nm等波长差法：等波长差法：等吸收比法：等吸收比法：2 2、3 3：分别在：分别在 1 1两侧两侧 1 1：VitAVitA的的 maxmax V VA A 醇醇 1 1=325nm=325nm 2 2=310nm=310nm 3 3=334nm=334nm（4 4）测定方法）测定方法 Ch.p收载有收载有2 2种方法种方法第一法（直接测定法）第一法（直接测定法）测定测定对象对象 VAVA醋酸酯醋酸酯 等波长差法等波长差法

14、 300300、316316、328328、340340、360nm360nm325325330330波长：波长：300、316、328、340、360nm测定：测定：A0、A1、A2、A3、A4找到：找到：max=328nm（326329）在在326326329nm329nm，第一法测定。第一法测定。不在不在326326329nm329nm，第二法测定。，第二法测定。计算比值：计算比值：A0/A2、A1/A2、A2/A2、A3/A2、A4/A2比较：比较：算吸光度比值差算吸光度比值差测定测定波长波长吸光吸光度度吸光度比值吸光度比值吸光度比吸光度比值差值差计算计算值值规定规定值值3000.55

15、53160.907(325)3281.000(330)3400.8113600.299判断判断最大吸收波长是否在最大吸收波长是否在326326329329之间之间是是否否计算吸收度比值之差是否超过计算吸收度比值之差是否超过0.020.02第二法（皂化）第二法（皂化）是是否否A A328328-15%-3%03%皂化皂化A A328328（校正）校正）A A328328皂化皂化1IU1IU的的VitAVitA=0.300ug=0.300ug的维生素的维生素A A醇醇 =0.344ug=0.344ug的维生素的维生素A A醋酸酯醋酸酯a:a:效价的定义：效价的定义：每每g g供试品中含有供试品中含

16、有VitAVitA的的 国际单位数。单位国际单位数。单位 IU/gIU/g计算计算1g1g维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯=1g1g维生素维生素A A醇醇=换算因子换算因子（维生素（维生素A A醋酸酯）醋酸酯）=2907000/1530=1900换算因子换算因子（维生素（维生素A A醇醇）=3330000/1820=1830b:b:换算因子的定义：换算因子的定义：单位单位 数值所相当的效价数值所相当的效价C:C:求求 A:A328校正校正A328d:d:求效价求效价e:求标示量求标示量%小结：第一法（直接测定法）小结：第一法（直接测定法）-VAVA醋酸酯醋酸酯判断判断A328,A328校正校正求

17、效价求效价求求求求已知：平均胶丸重为已知：平均胶丸重为0.0815g0.0815g维生素维生素A A的标示量为的标示量为10000IU/10000IU/丸丸取样：取样：0.1279g0.1279g100ml100ml，从中取出，从中取出2ml 2ml 25ml.25ml.波长波长吸收度吸收度比值比值规定值规定值比值差比值差3003000.3740.3740.5550.5553163160.5840.5840.9070.9073283280.6520.6521 13403400.5340.5340.8110.8113603600.2110.2110.2990.299练习题：维生素练习题：维生素A

18、 A醋酸酯胶丸的含量测定醋酸酯胶丸的含量测定l l求：维生素求：维生素A A醋酸酯醋酸酯的标示百分含量。的标示百分含量。0.5740.5740.8960.8961 10.8190.8190.3390.3390.0190.019-0.01-0.010 00.008 0.008 0.040.04首先计算吸收度比值和吸收度比值差。首先计算吸收度比值和吸收度比值差。由结果由结果知，需计算校正吸收度。知，需计算校正吸收度。由此可知，应该用测得的由此可知，应该用测得的A A328328计算。计算。第二法第二法(皂化法皂化法)测定测定对象对象 VitAVitA醇醇 等吸收比法等吸收比法 300300、310

19、310、325325、334nm334nm皂化皂化EtOHEtOH+KOH+KOH乙醚乙醚提取提取*样品一定量样品一定量水浴水浴浓缩浓缩异丙醇异丙醇溶介溶介915IU/ml波长：波长：300、310、325、334nm测定：测定：A0、A1、A2、A3找到：找到：max=325nm（323327）在在323323327nm327nm，皂化法测定。，皂化法测定。不在不在323323327nm327nm，色谱法纯化。，色谱法纯化。计算比值：计算比值：A0/A2-A300/A325算吸光度比值算吸光度比值判断判断吸光度比值是否吸光度比值是否 0.730.73A325校正校正=6.815A3252.5

20、55A3104.260A334最大吸收波长是否在最大吸收波长是否在323323327327之间之间是是否否A A300300/A/A325325是否是否0.730.73色谱法纯化色谱法纯化是是否否A A325325校正校正 =6.815A=6.815A325325-2.555A-2.555A310310-4.260A-4.260A33433403%3%A325校正校正A325校正校正A325求效价求效价小结：测定方法小结：测定方法第一法第一法VAVA醋酸酯醋酸酯第二法第二法VAVA醇醇323327nmA300/A3250.73326326329nm329nm0.02之间之间 超超否否A A32

21、83283%3%之间：之间：A A328328-15%-15%-3%-3%：A A328328校正校正-15%+3%:+3%:皂化法皂化法3%3%之间：之间：A A325325-3%+3%:A+3%:A325325校正校正色谱色谱法法A A328328校正校正 =3.52=3.52（2A2A328328 A A316316A A340340）A A325325校正校正 =6.815A=6.815A325325-2.555A-2.555A310310-4.260A-4.260A334334求求 判断判断A A小结小结:VitAVitA 紫外分光光度法紫外分光光度法 Ch.PCh.P 2005 2

22、005方法：三点校正法方法：三点校正法三波长测定法三波长测定法 2、3：在：在 1两侧两侧等波长差法：等波长差法：等吸收比法：等吸收比法：1：VitA的的 max（1 1）原因：消除杂质吸收所引起的误差）原因：消除杂质吸收所引起的误差a:a:杂质吸收在杂质吸收在310nm-340nm310nm-340nm范围近似呈范围近似呈 一条直线，随一条直线，随 ,A,Ab:b:物质对光的吸收具有加和性物质对光的吸收具有加和性（2 2）原理）原理（3 3）波长的选择）波长的选择（4 4）测定方法）测定方法（二）三氯化锑比色法（二）三氯化锑比色法（三）高效液相色谱法（三）高效液相色谱法思考题思考题1 1、三

23、点校正紫外分光光度法测定维生素、三点校正紫外分光光度法测定维生素A A含量含量的依据（原理）是什么？的依据（原理）是什么？2 2、三点校正紫外分光光度法测定维生素、三点校正紫外分光光度法测定维生素A A醋酸醋酸酯含量时，换算因子是多少？写出测定其胶丸酯含量时，换算因子是多少？写出测定其胶丸含量时标示量含量时标示量%的计算式。的计算式。3 3、将维生素将维生素A A溶于无水乙醇溶于无水乙醇-盐酸溶液中，测盐酸溶液中，测定紫外吸收光谱，在定紫外吸收光谱，在326nm326nm波长处有一吸收峰，波长处有一吸收峰，而将此液置水浴上加热，冷却后，在而将此液置水浴上加热，冷却后，在300-300-400n

24、m400nm范围内出现范围内出现3 3个吸收峰，这是为什么？个吸收峰，这是为什么？小结：小结：VitAVitA的分析的分析ua.紫外吸收特性紫外吸收特性b.溶解性溶解性uc.不稳定性不稳定性d.与与SbCl3作用作用结构性质结构性质鉴别试验鉴别试验含量测定含量测定CH2OR654321987654321Carr-Price、UV、TLC紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法三氯化锑比色法三氯化锑比色法高效液相色谱法高效液相色谱法维生素维生素A含量用生物效价表示，其效价单位是含量用生物效价表示，其效价单位是A、IUB、gC、mlD、IU/gE、IU/ml已已知知每每单单位位维维生生素素A相相当当

25、于于维维生生素素A醋醋酸酸酯酯0.344 g，其其=1530，则则换换算算因因数数等于等于A、1820B、1830C、1900D、1920E、无法计算无法计算 计算维生素计算维生素A A吸收度的校正公式为吸收度的校正公式为 A A328(328(校校正正后后)=3.52(2A=3.52(2A328328-A-A316316-A-A340340)。如如果果校校正正后后的的吸吸收收度度与与未未校校正正的的吸吸收收度度之之差差对对未未经经校校正正吸吸收度的百分比为收度的百分比为-3.2%-3.2%，则应，则应 A A、用皂化法测定用皂化法测定 B B、用校正后的吸收度计算含量用校正后的吸收度计算含量

26、 C C、用未校正的吸收度计算含量用未校正的吸收度计算含量 D D、改用另一校正公式计算改用另一校正公式计算 E E、以上都不对以上都不对 维生素维生素A A的鉴别试验为的鉴别试验为 A A、三氯化铁反应三氯化铁反应B B、硫酸锑反应硫酸锑反应C C、2,6-2,6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应D D、三氯化锑反应三氯化锑反应E E、间二硝基苯的碱性乙醇液反应间二硝基苯的碱性乙醇液反应 维生素维生素A A具有易被紫外光裂解、易被具有易被紫外光裂解、易被空气中氧或氧化剂氧化等性质，是由于空气中氧或氧化剂氧化等性质，是由于分子中含有（分子中含有（）A A、环已烯基、环已烯基 B B、2,6,6-2,6

27、6-三甲基环已烯基三甲基环已烯基 C C、伯醇基、伯醇基 D D、乙醇基、乙醇基 E E、共轭多烯醇侧链、共轭多烯醇侧链 E 哪些描述适合哪些描述适合VitAVitA结构及性质结构及性质 A A、分子具有长二烯醇侧链，易被氧化分子具有长二烯醇侧链，易被氧化 B B、具有较长的全反式共轭多烯结构具有较长的全反式共轭多烯结构 C.C.含酯键，经水解后产生苯并二氢吡喃衍含酯键，经水解后产生苯并二氢吡喃衍 生物，易被氧化生物，易被氧化 D.D.与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳定兰与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳定兰 色，很快转变为紫红色色，很快转变为紫红色 E E、样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加后，样品

28、用无水乙醇溶解后，加硝酸加后，呈橙红色呈橙红色 中中国国药药典典（20002000年年版版）规规定定维维生生素素A A的的测测定定采采用用紫紫外外分分光光光光度度（三三点点校校正正法法），此此法法又又称称为为 A A、等波长差法等波长差法B B、等吸收比法等吸收比法C C、6/7A6/7A法法D D、差示分光光度法差示分光光度法E E、双波长分光光度法双波长分光光度法 用用“三点校正法三点校正法”测定维生素测定维生素A A含量的依据是含量的依据是 A A、维生素维生素A A可见光区有最大吸收可见光区有最大吸收 B B、杂质在杂质在310310340nm340nm波长范围内呈线性吸收波长范围内呈

29、线性吸收 C C、物质对光吸收具加和性物质对光吸收具加和性 D D、维生素维生素A A与三氯化锑的无水氯仿溶液作与三氯化锑的无水氯仿溶液作 用，产生不稳定蓝色用，产生不稳定蓝色 E E、维生素维生素A A在碱性溶液中，可被铁氰化钾氧在碱性溶液中，可被铁氰化钾氧 化生成具有蓝色荧光的硫色素化生成具有蓝色荧光的硫色素 第二节第二节 维生素维生素B B1 1的分析的分析 AnalysisofvitaminB1氨基嘧啶环氨基嘧啶环噻唑环噻唑环(季铵碱季铵碱)一、结构与性质一、结构与性质NNH3CNH2NSCH3CH2CH2OH+H-ClClCH2还原性还原性碱性碱性酸性酸性1 1、结构、结构(盐酸硫胺

30、盐酸硫胺)2 2、结构特点、结构特点a.a.氨基嘧啶氨基嘧啶亚甲基亚甲基噻唑环季铵化合物噻唑环季铵化合物b.b.碱性基团：碱性基团：嘧啶环上的氨基嘧啶环上的氨基 噻唑环上的季铵噻唑环上的季铵可与酸成盐可与酸成盐（一）、（一）、溶解性溶解性1 1、易溶于水、易溶于水2 2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性（二）、（二）、UVUVHCl(91000)max=246nm（三）、（三）、硫色素反应硫色素反应硫色素硫色素OH-O蓝色荧光蓝色荧光VitB1正丁醇正丁醇3 3、性质、性质（四）、（四）、沉淀反应沉淀反应嘧啶环嘧啶环噻唑环噻唑环生物碱沉淀剂生物碱沉淀剂沉淀沉淀（五）、具有两个碱性基团，（五）、具有两

31、个碱性基团，可以和酸成盐。可以和酸成盐。噻唑环上的季铵噻唑环上的季铵 嘧啶环上的氨基嘧啶环上的氨基（六）、氯化物特性（六）、氯化物特性呈氯化物的反应，用于鉴别呈氯化物的反应，用于鉴别（七）、（七）、硫化物特性硫化物特性VitBVitB1 1Pb Pb2+2+OHOH-PbSPbS二、鉴别试验二、鉴别试验 （一）硫色素反应（一）硫色素反应 Ch.PCh.P（20052005）荧光消失荧光消失正丁醇正丁醇蓝色荧光蓝色荧光H+OH-硫色素硫色素铁氰化钾铁氰化钾K3Fe(CN)6维生素维生素+-OH1BVBVB1 1专属反应，用于鉴别和含量测定。专属反应，用于鉴别和含量测定。（三）其他反应（三）其他反

32、应S元素反应元素反应Cl-反应反应小结：小结：VitBVitB1 1鉴别试验鉴别试验O硫色素硫色素OH-蓝色荧光蓝色荧光VitB1正丁醇正丁醇嘧啶环嘧啶环噻唑环噻唑环生物碱沉淀剂生物碱沉淀剂沉淀沉淀ClCl-反应反应NaOHPb(NO3)2PbSS S元素反应元素反应HNO3AgNO3AgCl（一）硫色素反应（一）硫色素反应 Ch.PCh.P（20052005）（二）沉淀反应（二）沉淀反应（三）其他反应（三）其他反应Cl2MnO2H+KI-KI-淀粉淀粉 蓝色蓝色 三、含量测定三、含量测定非水滴定法（非水滴定法（Ch.PCh.P 2005 2005测原料药）测原料药）紫外分光光度法（紫外分光光

33、度法（Ch.PCh.P 2005 2005测制剂）测制剂）硫色素荧光法硫色素荧光法硅钨酸重量法硅钨酸重量法（一）非水碱量法（一）非水碱量法 VitBVitB1 1原料原料 醋酸汞：可与氢卤酸盐生成卤化汞，醋酸汞：可与氢卤酸盐生成卤化汞，消除氢卤酸盐的干扰消除氢卤酸盐的干扰1、原理、原理VitB12HClO4冰醋酸冰醋酸Hg(Ac)2VitB1ClO4HClO4溶剂：冰醋酸溶剂：冰醋酸指示剂：指示剂：ChPChP 以喹那啶红以喹那啶红-亚甲蓝亚甲蓝 （紫红（紫红天蓝）天蓝）滴定剂：高氯酸滴定剂：高氯酸 (0.1mol/L)醋酸汞：消除氢卤酸盐的干扰醋酸汞：消除氢卤酸盐的干扰需要做空白试验需要做空

34、白试验 摩尔比：摩尔比：1 1：2 22 2、方法、方法3、计算、计算要求：要求：99.0%99.0%（二）（二）UV法法VitB1片剂、注射剂片剂、注射剂1、原理、原理共轭体共轭体pH=2HCl(91000)max=246nm2 2、计算、计算VitB1片：片：90.0%110.0%VitB1注射液：注射液：93.0%107.0%（三）（三）硫色素荧光法硫色素荧光法ex=365nm,em=435nm（四）（四）硅钨酸重量法硅钨酸重量法2VB1硅钨酸硅钨酸白色沉淀白色沉淀4HCl1 1、原理、原理 2VB1的分子量为的分子量为2337.27沉淀的分子量为沉淀的分子量为3479.222 2、计算

35、计算换算因数换算因数=0.1939（含义：（含义：1g沉淀相当于沉淀相当于0.1939gVB1）鉴别试验：鉴别试验：硫色素反应硫色素反应、沉淀反应、其他反应、沉淀反应、其他反应含量测定含量测定 非水碱量法、非水碱量法、UVUV法法、硫色素荧光法、硫色素荧光法、硅钨酸重量法硅钨酸重量法小结：小结：VitBVitB1 1的分析的分析NNH3CNH2NSCH3CH2CH2OH+H-ClClCH2u能发生硫色素特征反应的药物能发生硫色素特征反应的药物A、维生素维生素AB、维生素维生素B1C、维生素维生素CD、维生素维生素EE、烟酸烟酸u下下列列药药物物的的碱碱性性溶溶液液，加加入入铁铁氰氰化化钾钾后

36、后，再加正丁醇，显蓝色荧光是再加正丁醇，显蓝色荧光是 A A、维生素维生素A A B B、维生素维生素B B1 1 C C、维生素维生素C C D D、维生素维生素D D E E、维生素维生素E E烯二醇烯二醇强还原性强还原性酸性酸性L抗坏血酸抗坏血酸一、一、结构与性质结构与性质第三节第三节 维生素维生素C C的分析的分析 内酯环内酯环水解水解手性手性CUV与糖类结与糖类结构相似构相似VcVc易溶于水，水溶液呈酸性；易溶于水，水溶液呈酸性；三氯甲烷中不溶三氯甲烷中不溶（一）溶解性（一）溶解性（二）烯二醇结构（二）烯二醇结构还原性、酸性还原性、酸性u强还原性强还原性u酸性酸性 一元酸一元酸由于共

37、轭效应的影响由于共轭效应的影响C3OHpKa=4.17C2OHpKa=11.5可与可与NaHCO3生成钠盐生成钠盐 （三）手性（三）手性C C（C C4 4、C C5 5）旋光性）旋光性 比旋度比旋度+20.5+20.50 0+21.5+21.50 0 OOHHOOC OHHCH2OH123456*L(+)抗坏血酸（活性最高）抗坏血酸（活性最高）D(-)异抗坏血酸（异抗坏血酸（5%）L(+)异抗坏血酸（无活性）异抗坏血酸（无活性）D(-)抗坏血酸（无活性）抗坏血酸（无活性）aOHaOH酮酸盐酮酸盐（四）内酯环结构（四）内酯环结构 水解性水解性a a2 2COCO3 3单钠盐单钠盐（五）与糖类结

38、构相似（五）与糖类结构相似 具有糖的性质具有糖的性质50（六）共轭双键（六）共轭双键 UV UV 二、鉴别试验二、鉴别试验 IdentifactionTests （一）与氧化剂反应（强还原性）（一）与氧化剂反应（强还原性）1、与、与AgNO3反应反应Ch.P2005VitCVitC2,6二氯靛酚二氯靛酚玫瑰红色玫瑰红色无色无色2 2、与、与2,62,6二氯靛酚反应二氯靛酚反应 Ch.P20053 3、与其他氧化剂的反应、与其他氧化剂的反应l碘或高锰酸钾碘或高锰酸钾l碱性酒石酸酮碱性酒石酸酮l磷钼酸磷钼酸Cu2O砖红色砖红色钼蓝钼蓝试剂褪色试剂褪色（二）（二）糖类的糖类的反应反应VitC三氯醋酸

39、三氯醋酸戊糖戊糖5050 吡咯吡咯水解、脱羧水解、脱羧脱水脱水糠醛糠醛（三）（三）UV（BP）VitCH+0.01mol/LHClmax=243nm小结：小结：VitCVitC 的鉴别试验的鉴别试验（一）与氧化剂反应（强还原性）（一）与氧化剂反应（强还原性）1 1、与、与AgNOAgNO3 3反应反应 Ch.PCh.P 2005 2005 2 2、与、与2,62,6二氯靛酚反应二氯靛酚反应 Ch.PCh.P 2005 2005 3 3、与其他氧化剂的反应、与其他氧化剂的反应（二）（二）糖类的糖类的反应反应（三）（三）UV UV 0.01mol/L 0.01mol/L HClHCl maxmax

40、243nm=243nmu溶液的澄清溶液的澄清度与颜色度与颜色u铁、铜离子铁、铜离子的检查的检查三、三、杂质检查杂质检查1 1、溶液的澄清度与颜色：、溶液的澄清度与颜色：有色杂质：有色杂质：VitCVitC PHPH、光线、空气、温度、光线、空气、温度 糠醛糠醛 检查方法检查方法分光光度法分光光度法原料原料:溶液应澄清无色溶液应澄清无色 420nm420nm，A0.03A0.03注射剂：注射剂：420nm420nm，A0.06 A0.06 片剂：片剂：440nm440nm，A0.07A0.072 2、铁、铜离子的检查、铁、铜离子的检查方法：原子吸收分光光度法方法：原子吸收分光光度法 供试品供试

41、品+标准溶液标准溶液a供试品供试品b合格合格ba-b标准溶液的吸收标准溶液的吸收Fe：248.3nmCu：324.8nm（一）（一）碘量法碘量法Ch.P2005原料、片剂、注射液原料、片剂、注射液（二）（二）2，6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应USPJP四、含量测定四、含量测定 （一）（一）碘量法碘量法 （原料、片剂、注射液）（原料、片剂、注射液）1 1、原理、原理指示剂指示剂 淀粉指示液淀粉指示液 (无色无色蓝色）蓝色）反应摩尔比反应摩尔比11112 2、方法、方法 取本品约取本品约0.2g0.2g，精密称定，加新沸过精密称定，加新沸过的冷水的冷水100ml100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml10

42、ml使溶解，加淀使溶解，加淀粉指示液粉指示液1ml1ml，立即用碘（立即用碘（0.05mol/L0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在滴定，至溶液显蓝色，在3030秒内不褪。秒内不褪。每每1ml1ml碘液碘液(0.05mol/L)(0.05mol/L)相当于相当于8.806mg8.806mg的的C C6 6H H8 8O O6 6。3 3、讨论、讨论 C C、立即滴定立即滴定 减少减少O O2 2的干扰的干扰A A、新沸冷水新沸冷水 赶走水中赶走水中O O2 2B B、酸性环境酸性环境 稀醋酸稀醋酸 减慢减慢VitCVitC被被O O2 2氧化速度氧化速度D D、附加剂干扰的排除、附加剂干

43、扰的排除 VitCVitC注射液注射液消除抗氧剂的干扰消除抗氧剂的干扰uVitCVitC注射液测定前要加丙酮注射液测定前要加丙酮NaHSO3抗氧剂抗氧剂COCH3CH3COH33CHCHNaSO34、计算、计算原料药：原料药：99.0%注射剂：注射剂：90.0%110.0%片剂：片剂：93.0%107.0%鉴别试验：鉴别试验：硫色素反应硫色素反应、沉淀反应、其他反应、沉淀反应、其他反应含量测定含量测定 非水碱量法、非水碱量法、UVUV法法、硫色素荧光法、硫色素荧光法、硅钨酸重量法硅钨酸重量法小结：小结：VitBVitB1 1的分析的分析NNH3CNH2NSCH3CH2CH2OH+H-ClClC

44、H2 （二）（二）2,62,6二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法1 1、原理、原理 USP JP USP JP 2,6-2,6-二氯靛酚二氯靛酚VitCVitC酚亚胺酚亚胺 H H+2 2、方法、方法样品样品空白空白HPO3-HAc二氯靛酚液二氯靛酚液V样样V空白空白自身指示终点法：玫瑰红色，自身指示终点法：玫瑰红色，持续持续5 5秒不褪秒不褪（1）酸性环境）酸性环境HPO3-HAc稳定稳定VitC（2）快速滴定）快速滴定2min内内防止其他还原性物质干扰防止其他还原性物质干扰（3）测定对象：）测定对象：VC制剂及食品分析制剂及食品分析3 3、讨论、讨论 discuss （4 4）缺点）缺点2,62

45、6二氯靛酚二氯靛酚不稳定不稳定需经常标定需经常标定贮存贮存一周一周干扰多干扰多 氧化能力强氧化能力强小结：小结：VitC的分析的分析L L抗坏血酸抗坏血酸l溶解性溶解性l强还原性强还原性l酸性酸性l旋光性旋光性l水解性水解性l糖的性质糖的性质lUVUV与氧化剂反应与氧化剂反应糖类的糖类的反应反应UVUV溶液的澄清度与颜色溶液的澄清度与颜色铁、铜离子的检查铁、铜离子的检查碘量法碘量法2,6二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法鉴别鉴别杂质检查杂质检查含量测定含量测定维生素维生素C C的鉴别反应是的鉴别反应是 A.A.与与硝酸银反应硝酸银反应 B.B.与与2 2，6-6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应 C.C.

46、与三氯化铁反应与三氯化铁反应 D.D.与茚三酮反应与茚三酮反应 E.E.与碘化汞钾与碘化汞钾反应反应 测测定定维维生生素素C C注注射射液液的的含含量量时时,在在操操作作过过程程中中要加入丙酮，这是为了要加入丙酮，这是为了 A A、保持维生素保持维生素C C的稳定的稳定 B B、增加维生素增加维生素C C的溶解度的溶解度 C C、使反应完全使反应完全 D D、加快反应速度加快反应速度 E E、消除注射液中抗氧剂的干扰消除注射液中抗氧剂的干扰 使使用用碘碘量量法法测测定定维维生生素素C的的含含量量，已已知知维维生生素素 C的的 分分 子子 量量 为为 176.13，每每 1ml碘碘 滴滴 定定

47、液液(0.05mol/L)，相当于维生素，相当于维生素C的量为的量为A.17.61mgB.8.806mgC.176.1mgD.88.06mgE.1.761mg碘量法测定维生素碘量法测定维生素C C含量，取本品含量，取本品0.2000g0.2000g，加新沸过的冷水加新沸过的冷水100ml100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml10ml至溶液至溶液中，加淀粉指示液中，加淀粉指示液1ml1ml，立即用碘滴定液立即用碘滴定液(0.05mol/L)(0.05mol/L)滴定，使溶液显蓝色并在滴定，使溶液显蓝色并在30s30s内内不退，消耗碘溶液不退，消耗碘溶液20.00ml20.00ml。已知维生素已知维生

48、素C C的的分子量为分子量为176.13176.13，求维生素，求维生素C C含量含量98.1%B.98.9%98.1%B.98.9%C.98.5%D.50.8%E.88.1%C.98.5%D.50.8%E.88.1%可发生以下反应或现象的药物为可发生以下反应或现象的药物为 A A、维生素维生素B B1 1(盐酸硫胺盐酸硫胺)B)B、维生素维生素C C C C、两者均能两者均能 D D、两者均不能两者均不能 121121、与碘化汞钾生成黄色沉淀、与碘化汞钾生成黄色沉淀 122122、麦芽酚反应、麦芽酚反应 123123、在乙醚中不溶、在乙醚中不溶 124124、与、与2,6-2,6-二氯靛酚反

49、应使颜色消失二氯靛酚反应使颜色消失 125125、硫色素反应、硫色素反应ADCBA第五节第五节 维生素维生素E E的分析的分析 AnalysisofvitaminE苯并二氢吡喃醇苯并二氢吡喃醇（一）、结构（一）、结构一、一、结构与性质结构与性质名名称称R1R2生物活性生物活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.11OCH3R2HORCH3CH3CH3CH3CH3维生素维生素EOCH3R2OR1COCH3CH3CH3CH3CH3CH3母核：苯并二氢吡喃醇衍生物母核：苯并二氢吡喃醇衍生物 苯环上有一乙酰化的酚羟基苯环上有一乙

50、酰化的酚羟基名称：合成型名称：合成型 dldl生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯 天然型天然型 dd生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯侧链：脂肪烷烃侧链：脂肪烷烃（二）、性质（二）、性质1 1、溶解性、溶解性脂溶性脂溶性2 2、UVUV芳环芳环3 3、水解性、水解性乙酰化的酚羟基乙酰化的酚羟基H+orOH-VitE生育酚生育酚O醌型化合物醌型化合物杂质，需杂质，需检查检查二、鉴别试验二、鉴别试验 1 1、硝酸反应、硝酸反应 (Ch.PCh.P 2005)2005)橙红色橙红色7515生育红生育红生育酚生育酚OHNO3VitE2.2.三氯化铁联吡啶反应三氯化铁联吡啶反应生育醌生育醌+Fe+Fe2+2+Fe3+联吡啶