岛津液相色谱维护保养.ppt

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1、岛津液相色谱维护保养岛津液相色谱维护保养液相色谱基础知识SHIMADZU液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法vv适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析分析分析分析vv流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用流动相具有运

2、载样品分子和选择性分离的双重作用 气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法vv适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析vv流动相只起运载样品分子的能力流动相只起运载样品分子的能力流动相只起运载样品分子的能力流动相只起运载样品分子的能力 液相色谱基础知识液相色谱基础知识液相色谱流程图溶剂输液泵进样器柱温箱检测器数据处理液相色谱基

3、础知识采用采用采用采用“HPLC”“HPLC”“HPLC”“HPLC”级溶剂级溶剂级溶剂级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂剂剂剂对试样有适宜的溶解度对试样有适宜的溶解度对试样有适宜的溶解度对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小溶剂粘度要小溶剂粘度要小溶剂粘度要小与检测器相匹配与检测器相匹配与检测器相匹配与检测器相匹配流动相的选择溶溶 剂剂 等等 级级水的等级水的等级水的等级水的等级纯化水纯化水纯化水纯化水蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水去离子水去离子水去离子水去离子水波长波长

4、nm)纯化水纯化水去离子水去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物纯化水中去除了无机和有机的污染物吸吸吸吸光光光光率率率率水水/MeOH梯度梯度ODS 柱柱鬼峰鬼峰Gradient Curve1 ml/min,0-100%MeOHover 10 mins and hold for15 mins.溶溶 剂剂 等等 级级鬼峰的出现鬼峰的出现鬼峰的出现鬼峰的出现溶溶 剂剂 等等 级级溶剂的等级溶剂的等级溶剂的等级溶剂的等级HPLCHPLCHPLCHPLC级级级级优级纯优级纯优级纯优级纯分析纯分析纯分析纯分析纯都经过蒸馏和都经过

5、蒸馏和0.45u的过滤的过滤(除纤维毛除纤维毛,未溶解的机械颗粒未溶解的机械颗粒优级纯的纯度比分析纯大优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过级经过0.2u的过滤的过滤,且除去有紫外吸收的杂质且除去有紫外吸收的杂质微量分析、梯度洗脱微量分析、梯度洗脱微量分析、梯度洗脱微量分析、梯度洗脱甲醇甲醇 乙睛乙睛 正己烷正己烷分析纯级和HPLC级溶剂的吸光度比较图溶溶 剂剂 等等 级级General Maintenance and Troubleshooting缓冲液的使用缓冲液的使用 使用前必须过滤使用前必须过滤 使用后一定要进行清洗使用后一定要进行清

6、洗，以免造成腐蚀、磨损、阻塞，以免造成腐蚀、磨损、阻塞:用纯水冲洗用纯水冲洗30-60min（1ml/min），），再用甲醇冲洗再用甲醇冲洗30min易受到细菌和霉菌的影响易受到细菌和霉菌的影响 溶溶 剂剂 等等 级级不能直接用有机溶剂冲洗不能直接用有机溶剂冲洗过滤：过滤：过滤：过滤：0.45um0.45um0.45um0.45um或更小孔径滤膜或更小孔径滤膜或更小孔径滤膜或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲

7、液。其是使用无机盐配制的缓冲液。其是使用无机盐配制的缓冲液。其是使用无机盐配制的缓冲液。脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响：气泡对测定的影响：气泡对测定的影响：气泡对测定的影响：1 1 1 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2 2 2 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形）柱中气泡使流动相绕流，峰变形）柱中气泡使

8、流动相绕流，峰变形）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3 3 3 3）检测器中的气泡产生基线波动）检测器中的气泡产生基线波动）检测器中的气泡产生基线波动）检测器中的气泡产生基线波动 无在线脱气应注意：无在线脱气应注意：无在线脱气应注意：无在线脱气应注意：1 1 1 1）每天脱气）每天脱气）每天脱气）每天脱气 2 2 2 2）如使用氦脱气，对混合溶剂脱气时间不能过长）如使用氦脱气，对混合溶剂脱气时间不能过长）如使用氦脱气，对混合溶剂脱气时间不能过长）如使用氦脱气，对混合溶剂脱气时间不能过长溶溶 剂剂 前前 处处 理理岛津VP系列输液泵目的 单元 流速范围特性和应用 分析 LC-10ADVP0.001

9、9.999无脉动，适于半微量LC 和 LC-MS LC-10ATVP0.001-9.999非凡的耐用性，适于常量分析*所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度液相色谱基础知识LC-10ATvp泵：泵：串联式往复泵串联式往复泵LC-10ADvp泵：泵：并联式微体积往复泵并联式微体积往复泵LC-10ADVP/LC-10ATVP工作原理工作原理单向阀结构单向阀结构抛光面透明塑料垫片宝石球单向阀原理单向阀原理吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头LC-10ADVP/LC-10ATVP工作原理工作原理液相色谱基础知识梯度洗脱形式：梯度洗脱形式：v线性梯度：在梯度洗

10、脱时，流动相强度的变化和时间成线性比例v指数梯度：在梯度洗脱时，流动相强度随时间的变化呈指数关系v折线梯度：梯度洗脱装置：梯度洗脱装置：v高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入v低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。梯度洗脱形式的选择1.使用流动相溶解样品 -减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要 -保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀 2.进样前最好使用0.45um 的膜进行过滤 如果样品很脏，要使用0.2um的膜进行过滤样 品 处 理进样器自动进样器手动进样器 原理：（六通阀）注入方式：1 1）全量注入）全

11、量注入 2 2）部分注入）部分注入液相色谱基础知识进样量和检测器响应的关系示意图进样量和检测器响应的关系示意图液相色谱基础知识进样体体积 检检测测器器响响应应值值定量定量环环体体积的一半的一半3倍定量倍定量环环体体积全量注入全量注入部分注入部分注入手动进样器的原理图手动进样器的原理图 装填状态装填状态液相色谱基础知识进样状态进样状态交叉污染的原因微量注射器微量注射器 红色表示残留样品红色表示残留样品手动进样法一般的方法一般的方法一般的方法一般的方法 1.1.1.1.在进样状态下清洗针口在进样状态下清洗针口在进样状态下清洗针口在进样状态下清洗针口 2.2.2.2.在装填状态下插入微量注射器在装填

12、状态下插入微量注射器在装填状态下插入微量注射器在装填状态下插入微量注射器 3.3.3.3.注入样品注入样品注入样品注入样品 4.4.4.4.切到进样状态切到进样状态切到进样状态切到进样状态手手动进样法法便捷的方法（不需清洗）便捷的方法（不需清洗）便捷的方法（不需清洗）便捷的方法（不需清洗）1.1.1.1.进样状态下插入微量注射器进样状态下插入微量注射器进样状态下插入微量注射器进样状态下插入微量注射器 2.2.2.2.切到装填状态切到装填状态切到装填状态切到装填状态 3.3.3.3.注入样品注入样品注入样品注入样品 4.4.4.4.切回到进样状态切回到进样状态切回到进样状态切回到进样状态柱温箱分

13、析结果重现性好分析结果重现性好分析结果重现性好分析结果重现性好提高柱效提高柱效提高柱效提高柱效降低柱压降低柱压降低柱压降低柱压保证检测稳定性保证检测稳定性保证检测稳定性保证检测稳定性 液相色谱基础知识vv柱压低于柱压低于柱压低于柱压低于150150150150kgf/cmkgf/cmkgf/cmkgf/cm2 2 2 2vv柱温在柱温在柱温在柱温在40404040左右，最高使用温度为左右，最高使用温度为左右，最高使用温度为左右，最高使用温度为50505050vv缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液PHPHPHPH使用范围为使用范围为使用范围为使用范围为2 2 2 27 7 7 7vv流动相有机溶剂比例过低

14、流动相有机溶剂比例过低流动相有机溶剂比例过低流动相有机溶剂比例过低,柱效下降快柱效下降快柱效下降快柱效下降快返回ODSODS柱的使用注意点：柱的使用注意点：柱的使用注意点：柱的使用注意点：硅胶在硅胶在硅胶在硅胶在PHPHPHPH为为为为3 3 3 34 4 4 4时稳定性最好时稳定性最好时稳定性最好时稳定性最好碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。液相色谱基础知识硅胶基底硅胶基底聚合物基底聚合物基底pH 范围范围2-7.5宽范围宽范围有机溶剂有机溶剂所有所有有限制有

15、限制压力压力 250 kgf/cm2低压低压温度温度宽范围宽范围60C液相色谱基础知识色谱柱的类型及适用范围色谱柱的类型及适用范围分分 析析 柱柱 的的 维维 护护1.在在使用新柱之前，最好用强溶剂在低流量下使用新柱之前，最好用强溶剂在低流量下(0.2-0.3 ml/min)冲洗冲洗 30 mins，长时间未用的分析柱也要同样长时间未用的分析柱也要同样 处理处理2.定期使用强溶剂冲洗柱子定期使用强溶剂冲洗柱子3、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗4、净化样品净化样品5、分离条件、分离条件6、不使用时，要盖上盖子，避免固定相干枯、不使用时，

16、要盖上盖子，避免固定相干枯常用检测器常用检测器vv紫外检测器（包括二极管阵列检测器）紫外检测器（包括二极管阵列检测器）vv荧光检测器荧光检测器vv示差折光检测器示差折光检测器vv电导检测器电导检测器液相色谱基础知识vv原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收吸收吸收吸收vv定量基础：比耳定律，定量基础：比耳定律，定量基础：比耳定律，定量基础：比耳定律，A AKCLKCLvv优点：优点：优点：优点：1 1 1 1）灵敏度高）灵敏度高）灵敏度高）灵敏度高 2

17、2 2 2）对温度和流速不敏感）对温度和流速不敏感）对温度和流速不敏感）对温度和流速不敏感 3 3 3 3）可用于梯度洗提）可用于梯度洗提）可用于梯度洗提）可用于梯度洗提vv缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质紫外检测器二极管阵列检测器二极管阵列检测器二极管阵列检测器二极管阵列检测器（SPDM10AVP）-二十一世纪标准紫外检测器二十一世纪标准紫外检测器色谱定性依据：色谱定性依据：保留时间保留时间 常规紫外检测器常规紫外检测器 峰纯度峰纯度 二极管阵列检测器二极管阵列检测器液相色谱基础知识 样品

18、池样品池二极管阵列二极管阵列光栅光栅D2/W 灯灯每一组分可在每一波每一组分可在每一波长处得到一吸光度值长处得到一吸光度值二极管阵列检测器二极管阵列检测器1 1）采集三维谱图）采集三维谱图2 2）峰纯度检验）峰纯度检验3 3）光谱库检索）光谱库检索4 4）可以发现单波长检测时未测到的峰）可以发现单波长检测时未测到的峰二极管阵列检测器的优点vv原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测vv优点：优点：优点：优点：1 1 1 1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一）灵敏度极高

19、是最灵敏的检测器之一）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一 2 2 2 2）选择性好）选择性好）选择性好）选择性好 3 3 3 3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱vv缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质vv可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、可检测

20、物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）荧光检测器vv原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。组分浓度。组分浓度。组分浓度。vv优点：通用型检测器，优点：通用型检测器，优点：通用型检测器，优点：通用型检测器，vv缺点：缺点：缺点：缺点：1 1 1 1）对温度变化敏感）对温度变化敏感）对温度变化敏感）

21、对温度变化敏感2 2 2 2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测3 3 3 3）属于中等灵敏度的检测器）属于中等灵敏度的检测器）属于中等灵敏度的检测器）属于中等灵敏度的检测器示差折光检测器vv原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。广泛应用于离子色谱法化来测定电离物质含量。广泛应用于离子色谱法化来测定电离物质含量。广

22、泛应用于离子色谱法化来测定电离物质含量。广泛应用于离子色谱法vv优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗脱度洗脱度洗脱度洗脱vv缺点：对温度变化敏感（每升高缺点：对温度变化敏感（每升高缺点：对温度变化敏感（每升高缺点：对温度变化敏感（每升高1 1 1 1度，电导率增加度，电导率增加度，电导率增加度，电导率增加2%-2%-2%-2%-2.5%)2.5%)2.5%)2.5%)vv主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子返回电导检测器