美天旎公司磁珠分选产品.docx

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1、美天旎公司MACS(磁珠分选)相关产品一、MACS微珠(MicroBeads)MACS微珠是一种与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒，用于目的细胞或者去除细胞的磁性标记。微珠直彳5约有50nm，比细胞小200多倍，体积为细胞的百万分之一，光学显微镜下不可见。微珠由多聚糖和氧化铁组成，无毒性，对细胞无损伤，可以生物降解。MACS微珠与流式细胞仪兼容，不会影响细胞的光散射特性；磁性标记只占用2030%的结合位点，不影响细胞的荧光抗体标记。此外，MACS微珠可以最大限度地避免细胞活化；无需解离磁珠，可以直接进行后续实验：如流式细胞仪分析或分选、细胞培养、分子生物学研究、回输给人或者动物。MAC

2、S微珠主要有三种：直标微珠、间标微珠、多选微珠。其中间标微珠有抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠。多选微珠是专门为分选细胞亚群而研制的一种微珠。这种微珠通过特殊的方式与抗体偶联，在第一次阳性分选完成后，与细胞结合的多选微珠可以被解离试剂剪切下来，阳性分选的细胞可以进行再次阳性分选或者去除分选。MACS技术分选的CD8阳性T细胞(箭头所示为磁性结合在细胞表面的微珠)二、MACS分选柱(SeparationColumn)MACS分选柱是一类填充有不同规格铁珠的塑料容器，铁珠表面有亲水包被，因此不会损伤细胞。在磁场外MACS分选柱不带有磁性，但是当置于一个永久性磁场一MAC

3、S分选器中时，分选柱内的铁珠可以使分选器的磁场增弓H1000倍，足以滞留仅标记有极少量微珠的目的细胞；磁性标记细胞从分选柱中通过时可以受到均匀的磁力作用，从而提高分选纯度和回收率。手动操作在30分钟内可完成，自动分选仅需2.5-10分钟，得到的细胞可立即用于后续实验。此外，大多数MACS分选柱都是无菌包装，一次性使用，可以满足细胞培养所需的无菌条件。MSLSXSLargeCellairtoMACSCSDLD卬M三、MACS分选器(MACSSeparators)MACS分选器由永久性磁铁和支架构成。与分选柱一起组成高强度的梯度磁场。根据应用范围分为研究用和临床应用的MACS分选器，根据操作方式分

4、为手动和自动分选器。1、MiniMACS分选器和OctoMACS分选器MiniMACS分选器是专为手动分选动、植物细胞，细菌、病毒、细胞器和mRNA等分子而设计的。该设备价格低廉，快速分选，应用广泛，易于操作，是获得少量高纯度细胞的理想设备。OctoMACS分选器把8个MiniMACS分选器连在一起，可以在一台仪器上同时进行8个标本的分选。MiniMACSOctoMACS2、MidiMACS分选器和QuadroMACS分选器MidiMACS分选器是MiniMACS分选器的扩大版本，与LS和LD分选柱配合使用，可阳性选择或者去除大量高纯度细胞。QuadroMACS分选器把4个MidiMACS分选

5、器连在一起，可以同时进行多个分选过程，或者同时进行多个样本分选，也可将一个大的样本分成数个部分同时分选。3、VarioMACS分选器VarioMACS分选器有多种适配器，可以使用MS、LS、LD和CS分选柱。可用于阳性选择和去除分选：既可高纯度地分选出稀有细胞（如频率低至10-8）,也可用来从细胞悬液中去除多达2X108非目的细胞。牝门口MAC4、SuperMACSII分选器设计的SuperMACSII分选器专门用于大量细胞分选，一次分选的总细胞数大于1011,同时该仪器也适用于少量细胞的分选。uperMACSII分选器备有三个适配器，除了科分选柱和autoMACS分选柱外，其它所有各型MAC

6、S分选柱均可用于SuperMACSII分选器。SuperMACSII5、科MACS分选器科MACS分选器是为分子生物学和蛋白生化分选设计的分选器。同时容纳4个科分选柱，可以分选出高纯度分子，如mRNA、序列特异性核酸或者蛋白。MMACS6、autoMACS分选仪7、CliniMACS分选种类分选柱容量适配分选器2X108总细胞MS分选柱MiniMACS、VarioMACS、SuperMACS107个标记细胞2X108总细胞大细胞分选柱MiniMACS、VarioMACS、SuperMACS手动阳性分选或者强107个标记细胞阳性细胞去除分选2X109总细胞LS分选柱MidiMACS、VarioM

7、ACS、SuperMACS108个标记细胞2X1010总细胞XS分选柱SuperMACS109个标记细胞5X108总细胞LD分选柱MidiMACS、VarioMACS、SuperMACS108个标记细胞手动去除分选CS分选柱2X108个标记细胞VarioMACS、SuperMACSD分选柱109个标记细胞SuperMACS4X109总细胞自动分选AutoMACS分选柱AutoMACS2X108个标记细胞6-12X10 10总细胞CliniMACSMACSMiniMACSCliniMACS6-12X108个标记细胞分子生物学分选F分选柱1011gmRNAM分选柱5011gmRNAMiltenyi

8、磁柱选择及标记问题(主要针对Miltenyi产品)一、标记策略用MACS进行磁分离，最重要的参数就是高质量的标记。对阳性细胞的标记应尽可能强，而背景要尽可能低，才能获得对磁标记的阳性细胞和未标记的阴性细胞的最好分辨。有多种不同的标记策略可供参考：1、直接标记直接标记是最快速和最特异的磁标记方法。2、间接标记几乎所有的单克隆抗体或多克隆抗体都可以用于间接标记。用无标记的、生物素化的或FITC、PE或APC结合的一抗标记细胞，再用抗免疫球蛋白、抗生物素、链霉菌亲和素、抗FITC、抗PE、或抗APC的微珠分别进行磁标记。间接标记可以放大磁标记，用于分离表达比较弱的标记很有用。在间接标记中，以使用生物

9、素化的或PE表记的一抗结果特异性最好。二、磁分离柱的选择下表为德国Miltenyi公司的分离柱种类，其中MS,LS,XS柱适合于正性细胞选择，如果磁标记很强，也可用于负性选择。LargeCellColumns与MS柱相比，孔径较大，适合于人和动物大细胞的正性选择，如巨核细胞。新的LD柱是为最方便的负选设计，代替了AS和BS柱。LD柱和CD及D柱即使在磁标记很弱的情况下也能获得最高的负选效率。科和M柱是为分子生物学方面的应用而设计的。三、分选策略分选策略也要根据实际情况进行选择1、正性选择(positiveselection)因此一般首先应该考虑正选策略。正选具有速度快和单克隆抗体的特异性磁珠对

10、细胞功能和活力的影响很小，优势，大多数情况下，正选省时省钱。2、负性选择(negativeselection)如果正选策略不适合您的实验，比如有可能因抗体结合引起细胞活化或没有针对靶细胞的特异性抗体，可以选择负选策略。MACS对许多细胞类型提供了合适的试剂盒，含有滴定好的针对非靶细胞的混合抗体。附：Miltenyi分离柱技术指标及图片戴分离懿碧最大在吸附细胞数霞大上殿缴8赦，_1亦2x10*i他0Ms爆*2x10*-,xa2X1LargectHk即桢。将1042x10必叫WM6跺4x1皿LOMJUiMACS，1%fx*-D*10-310ugMrniMACSlugeRWV炉1USISXSLare

11、CMmJIqMACSCSDLDMiltenyi的柱子回收方法准备使用回收的柱子时，抗体孵育始，即将柱子置于新鲜的75%酒精中，柱的容器内盛满酒精，自动流下，既消毒，又de-gas,去除气泡十分关键。洗抗体时，即开始洗柱子，将回收柱架于消毒过的长试管口上。换新的酒精自然滴下，换PBS+0.1%FBS冲洗之，最后用MACSBuffer冲洗。柱子准备完毕，准备上柱的细胞也就同时准备好了。回收方法将长试管注满PBS,回抽柱子的活塞，倒出回抽液。倒入新的PBS,打出之；重复两次-此时基本上将柱子内的杂细胞除尽。再抽、打两三次无水酒精或95%酒精，然后置于50-60度烘箱，过夜，即能防止生锈。此法回收的柱子可用2-5次。本人用回收的柱子分离血CD4细胞，纯度90%。