原发性胆汁性肝硬化患者淋巴细胞培养上清液中几种细胞因子水平的测定.docx

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1、原发性胆汁性肝硬化患者淋巴细胞培育上清液中几种细胞因子水平的测定原发性胆汁性肝硬化患者淋巴细胞培育上清液中几种细胞因r水平的测定原发性胆汁性肝硬化患者淋巴细胞培育上清液中几种细胞因子水平的测定作者：王少敏孙建徐丽娅作者单位：吉林高校第一医院检验科，吉林长春1300211长春市民政局军休中心南岭干休所【摘要】目的探讨几种细胞因子(白细胞介素(I1.)2、肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素(IFN)、I1.4)水平变更对原发性胆汁性肝硬化(PBC)的诊断价值。方法醇联免疫吸附(E1.ISA)法检测经植物血凝素(PHA)刺激后淋巴细胞培育上清液中I1.2、TNF、IFN及I1.4水平。结果PBC患者淋巴

2、细胞培育上清液中I1.2、TNF水平与正常比照组比较均明显上升；IFN水平与正常比照组比较轻度上升；I1.4水平与正常比照组比较无明显变更。结论Th1.亚群占优势，Th1.细胞被激活，介导了自身免疫性损害，导致PBC的发病，推想细胞因子在肝损害中可能起着重要作用。【关键词】原发性胆汁性肝硬化细胞因子外周血淋巴细胞上清液酶联免疫吸附法目前认为原发性胆汁性肝硬化(PBC)是由自身免疫机制介导的以肝内小胆管进行性非化脓性破坏性炎症为特征的慢性胆汁淤积性疾病，并可进展为肝纤维化与肝硬化(I)0临床上90%见于女性,且多见于中老年妇女（2）。检测肝组织中T细胞生成的细胞因子，发觉同时存在Th1.和Th2

3、两组生成不同细胞因子的协助性T细胞（Th）亚群,以Th1.细胞因子为主（3）,但有关外周血中T细胞生成的细胞因子水平的探讨报道较罕见。本文通过测定PBC外周血淋巴细胞上清液（PBMC）中细胞因子（白细胞介素（I1.）2、肿病坏死因子（TNF）、干扰素（IFN）、I1.4）水平，探讨PBC患者体内T细胞亚群比例失调状况及由其引起的机体免疫功能失调、免疫系统紊乱，为进一步探究PBC的发病机制供应新的依据。1材料与方法1.1对象2002年9月至2004年3月在本院住院的PBC患者30例，均为女性，年龄3862岁。均符合临床上PBC的诊断标准：临床表现符合PBC,除外其他肝内或肝外胆汁淤积，淤胆性肝功

4、能试验异样，病理学检查符合PBC的组织学变更。正常比照组20例，为长春血站健康献血者，男4例，女16例，年龄2546岁。1.2材料Hanks液、淋巴细胞分层液（比重1.077）（TBD公司）；植物血凝素（PHA）（上海医学化验所）；白细胞计数液（2%冰醋酸）；培育液IMDM（含10%小牛血清）；肝素（丽珠集团苏州新宝制药厂）；E1.1.SA试剂盒（TPI1.NC,UG1.G）;酶标仪（MOde1.1550BIORAD,日本）。1.3方法1.3.1淋巴细胞分别无菌静脉采血IOm1.,加肝素抗凝（每m1.血含12U肝素），将抗凝血缓慢滴入加有淋巴细胞分层液的试管中（二者比例为1：2）,使血液重叠于

5、分层液之上，采纳水平离心机，2000r/min离心15min。可见离心管分出明显两段，吸取上层血浆弃去，当心吸取分层液与血浆之间的淋巴细胞层，置于试管中，加入肯定量Hanks液，混匀后离心15000r/min,IOmin,弃上清，反复洗3次，分装备用。1.3.2淋巴细胞培育上清液收集加入含10%小牛血清的IMDM培育液将细胞悬浮，用白细胞稀释液显微镜下计数细胞数,调整细胞浓度为5106m1.,备用。将待测样品按不同稀释度加于96孔培育板中，设三复孔，每孔1001,加入已稀释的PHA100U将培育板置5%C02.37C、95%湿度轲箱中，培育3072h,随时视察细胞转化状况，在细胞转化最相宜时间

6、100Ormin离心10min,收集上清分装标记，置-30C保存。1. 3.3的联免疫吸附（E1.ISA）法检测淋巴细胞培育上清液（PHA刺激前后）中I1.2、TNF、IFN及I1.4水平，操作严格依据试剂盒说明书进行。1.4统计学处理数据用xs表示，并用t检验。2结果PBC患者I1.2与正常比照组比较明显上升，差异有显著性（P005）;TNF水平与正常比照组比较显著上升,差异有显著性(P001);PBC患者IFN水平与正常比照组比较轻度上升，I1.4水平较正常比照组比较无明显变更，差异无显著性(P0.05)(见表Do表IPBC患者淋巴细胞培育上清I1.2、TNFUFN及I1.4水平(略)3

7、讨论PBC是自身免疫性胆汁淤积性疾病，抗线粒体抗体(AvA)为其特征性免疫学标记(4)oPBC病人的胆管壁及其四周有大量的T淋巴细胞浸润，旦体外试验表明PBC病人的淋巴细胞可导致自体胆管上皮细胞坏死，因此有理由推想T淋巴细胞参加了PBC的发病过程，但CD4+与CD8+T淋巴细胞谁占主导地位却存在争议，PBC时细胞因子的变更在不同的探讨中报道不一样。有探讨证明Th1.生成的IFN和I1.2在PBC病人的肝组织和分别的抗原特异性T细胞中均显著增高，而I1.4却较低，提示Th1.亚群占优势(5)Berg(6)等通过探讨PBC病人细胞因子基础表达和未被激活的肝脏浸润细胞或PBC病人细胞因子基因表达和未

8、被激活的肝脏浸润细胞或PBMC细胞因子类型，发觉PBC病人Th1.Th2型因子比率为1：1.并认为PBC主要是Th1.细胞被激活，其介导了H身免疫性损害。VandeWater(7)等从PBC患者肝脏中分别出PDCE2等2或IFN,或二者都分特异性T细胞克隆，测得其分泌I1.泌，但不产生I1.4。也有探讨表明PBC病人肝脏浸润细胞或PBMC主要分泌Th2型细胞因子。鉴于上述报道得出的不同结果，本探讨经PHA刺激后，检测PBC病人外周血淋巴细胞转化的上清液中的细胞因子(I1.2、TNF、IFN、I1.4)水平，发觉PBC患者体内I1.2分泌明显增高,I1.2主要由活化的T细胞,尤其是CD4+T细胞

9、及MK细胞分泌，属于Th1.细胞因子，可以诱导T淋巴细胞的增殖，淋巴细胞过度活化，NK细胞与CT1.杀伤活性下降，推想PBC的发病是Th1.占优势。TNF分泌明显高于比照组，TNF分泌增高，可激活巨噬细胞,导致炎症介质产生，这些炎症介质始终参加免疫调整过程，故认为PBC的发病是可能是由H型超敏反应所致。本探讨中通过测定外周血I1.4水平无明显变更，但I1.2、TNF、IFN分泌增高，提示Th1.亚群占优势，Th1.细胞被激活，其介导了自身免疫性损害，导致PBC的发病，推想细胞因子在肝损害中可能起着重要作用。由于PBC女性患者多发，且无少儿患者，推想PBC的发病除免疫因素外，可能还与内分泌或环境

10、因素有关(8)细胞因子在PBC发病机制中的准确作用机制尚无统一相识，找寻有效方法调整患者体内上述细胞因子水平，从而调整体内Th1.Th2平衡状态，将为上述自身免疫性疾病治疗开拓一条新途径。【参考文献】1NeubergerJ.Primarybi1.iarycirrhosis(J).1.ancet,1997;350(9081)：8759.2仲人前，孔宪涛.自身免疫性肝病(M).上海：科学技术出版社，1996：94105.3DienesHP,1.ohseAW,GerkenGeta1.BiIeductepithe1.iaastargetce1.1.sinprimarybi1.iarycirrhosis

11、andprimarysc1.erosingcho1.angitis(J).VirchowsArch,1997;431(2)：11924.4MackayIR1GershwinME.Thenatureofautoimmunedisease(J).Semin1.iverDis,1997;17:312.5潘淑荣.原发性胆汁性肝硬化患者免疫学探讨(J).临床肝胆病杂志,1989;5(3):145.6BcrgP,K1.einR,RockenM.CytokinesinprimarybiIiarycirrhosis(J).Semin1.iverDis,1997;17:11523.7VandeWaterJnsa

12、riA,Prindive1.1.eT,eta1.HeterogeneityofautoreactiveTce1.1.c1.onesspecificfortheE2componentofthepyruvatedehydrogenasecomp1.exinprimarybi1.iarycirrhosis(J).JExpMed,1995:181:72333.8KimWR,1.indorKU,1.ocIcosGReta1.Epidemio1.ogyandnatura1.historyofprimarybi1.iarycirrhosisinUScommunity(J).Gastroenteso1.ogy

13、2000;119(6):1631.测论文查重检测三严三实开展以来，我仔细学习了习近平总书记系列讲话，研读了中心、区、市、县关于党的群众路途教化实践活动有关文件和资料。我对个人四风方面存在的问题及缘由进行了仔细的反思、杳摆和剖析，找出了H身存在的诸多差距和不足，理出了问题存在的缘由，明确了今后努力的方向和整改措施。现将比照检查状况报告如下，不妥之处，敬请各位领导和同志们指责指正。一、存在的突出问题一是学习深度广度不够。学习上存在形式主义，学习的全面性和系统性不强，在抽时间和挤时间学习上还不够自觉，致使自己的学习无论从广度和深度上都有些欠缺。学习制度坚持的不好，客观上强调工作忙、压力大和事务多，

14、有时不耐性、不耐烦、不耐久，实则是缺乏学习的钻劲和恒心。学用结合的关系处理的不够好，写文章、搞材料有时上网拼凑，求全求美求好看，结合本单位和实际工作的实质内容少，实用性不强。比如，每天对各级各类报纸很少刚好去阅读。因而，使臼己的学问水平跟不上新形势的须要，工作标准不高，唱功好，做功差，忽视了理论对实际工作的指导作用。二是服务不深化不主动。工作上有时习惯于按部就班，习惯于常规思维，习惯于凭老观念想新问题，在统筹全局、分工协作、围绕中心、协调方方面面上还不够好。存在着为领导服务、为基层服务不够到位的问题，参谋和助手作用发挥得不够充分。比如，到乡镇、部门、企业了解状况，有时浮皮潦草，不够全面系统。与

15、基层群众谈心沟通少，没有真正深化到群众当中了解一线状况，驾驭的第一手资料不全不深，书到用时方恨少，不能为领导决策供应更好的服务。三是工作执行力不强。口常工作中与办公室同志谈心谈话少，对干部思想状态了解不深，疏于管理。办公室虽然制定出台了公文办理、工作守则等规章制度，但执行的意识不强，有时流于形式。比如，办公场所禁止吸烟，这一点我没有严格执行，有时还在办公室吸烟。四是工作创新力不高。有时工作上习惯于照猫画虎，工作只求过得去、不求过得硬，存在着求稳怕乱的思想和患得患失心理，导致工作上不能完全放开手脚、甩开膀子去干，缺少一种敢于负责的担当和气魄。比如，做协调工作，有时真成了传话筒和二传手，只传达领导

16、交办的事项，缺乏与有关领导和同志共同商讨如何把事情做得更好，创建性地开展工作。五是深化基层调查探讨不够。工作中，有时忙于详细事务，到基层一线调研不多，针对性不强,有时为了完成任务而调研，多了一些官气、少了一些士气。往往是听汇报的多，干脆倾听群众看法的少：了解面上状况多，发觉深层次问题少。比如，对县委提出的用三分之一时间下基层搞调研活动，在实际工作中却没有做到。即使下基层，有时也是走马观花，蜡蜓点水，让看什么看什么，让听什么听什么。在基层帮扶工作上，有时只注意出谋划策，抓落实、抓详细的少,对群众身边的一些小事情、小问题关切少、关注不够。六是主观能动性发挥不够。自认为在办公室工作多年，已经能够胜任

17、工作，有自满心情，缺乏俯下身子、虚心请教、不耻下问的看法。对待新问题、新状况，习惯于依据简洁阅历提出解决方法，创新不足，主观上存在满意现状，不思进取思想，主观能动性发挥不够。七是对工作细微环节重视不够。作为办公室负责人，存在抓大放小，不能做到知上、知下、知左、知右、知里、知外，有时在一些小的问题上、细微环节上没有做好，导致工作落实不到位，出现偏差。八是工作效率不是很高。面对比较繁重的工作任务，工作有时拈轻怕重、拖拉应付、不够仔细。存在不推不动、不够主动，推一推动一动、有些被动。比如，文稿材料的撰写，有时东拼西凑、生搬硬套、缺乏深化思索。有时也存在着推诿扯皮现象，不能刚好完成，质量也难以保证。对

18、于领导交办的事项，有时跟踪、督导的不够，不能刚好协调办理，缺乏应有的紧迫感，缺乏开拓创新精神，致使工作效率不高。二、产生问题的缘由分析仔细反思和深刻剖析自身存在的问题与不足，主要是自己没有加强世界观、人生观、价值观的改造，不注意提高自身修养，同时受社会不良风气的影响，在详细应对上没有很好地把握自己，碍于情面同流合污。产生问题的缘由主要有以下几方面。(一)自身放松了政治理论学习。对政治理论学习的重要性相识不足，重视程度不够。尤其是在处理工作与学习关系方面，把工作当成硬任务，把学习当作软指标，对政治理论学习投入的心思和精力不足，缺乏自觉学习的主动性和主动性。(二)宗旨意识有所淡化。由于乡镇工作比较

19、辛苦，从基层回到机关工作后，产生了松口气的念头，有时不臼觉产生了优越感和傲慢自满的心情。听惯了来自各方面的赞誉之声，深化基层少，对群众的呼声、疾苦、困难了解不够，没有树立较强的大局意识和责随意识，使得臼己有时会片面地认为只要做好本职工作，完成领导交办的任务就行了，而未能完全发挥自身的主观能动性，缺乏做好工作应有的责任心和紧迫感。（三）忧患意识不强。只是片面看到了自身工作生活环境的变更，吃苦耐劳的精神有些缺乏，开拓进取、奋勉有为、敢于冲锋、勇于担当的锐气有所弱化。有做太平官的意识，身处领导岗位，求新、求发展意识薄弱，表率作用发挥得不够好，忽视了工作的主动性、主动性和创建性。（四）勤政廉洁意识有所

20、弱化。随着自身经济条件的改善，降低了约束标准，勤俭节约的传统美德有些淡化，对奢侈之风的极端危害性相识不足，没有引起高度重视。诚然，造成自身存在问题的缘由远不止这些，还有许多，如E1.身的固化思维方式，缺乏居安思危的深层次思索等。三、今后的努力方向和改进措施查摆问题，剖析根源，关键在干洗澡治病、解决问题。本人决心从党性原则动身，端正看法、仔细对待，在今后的工作中实行强有力措施，立行立改，取得实效。（一）求真务实办公室主任作为承上启下、协调全局、沟通内外的重要角色，要立足发展、改革的新形势、新状况，以务实的作风和良好的品质做出表率。一是增加大局意识。要站在全局高度想问题，立足本职岗位做工作。要注意

21、换位思索，真正做到想领导之所想、谋领导之所谋，及早提出比较成熟的看法和建议，供领导决策参考。要擅长从纷繁困难的事务性工作中解脱出来，理清思路，明确目标，发挥自己应有的作用。二是增加超前意识。要仔细探讨领悟组织意图和领导思路，围绕领导关切的重大问题进行广泛深化的调态探讨，为领导决策供应真实状况和牢靠依据。要广泛搜集资料，探讨各乡镇、机关单位的新状况、新阅历、新做法，借他山之石来攻玉，为领导提出决策预案。因此，在想问题、办事情时，要赶前不赶后，尽可能早半拍、快半拍，提高敏感性，增加主动性。唯其如此，才能变被动为主动，参谋才能参在点子上，助手才能助到关健处。三是增加创新意识。要强化服务理念，做深、做

22、透、做好服务工作；要以协调、协作作为服务的主要手段和方法，做到服务不越位：要围绕解决难点和热点问题开展服务，切实通过服务和协调把大家普遍关切、关注的热点焦点问题解决好，以实际行动取信于民。(一)勤政为民办公室既是实行县委、政府决议的执行部门，也是督促落实县委、政府决议的监督部门。破除官僚主义，勤政为民应当做好四件事。一是擅长走进群众。从群众中来，到群众中去，是党的各项工作能够取得胜利的一大法宝。开展群众路途教化活动，破解官僚主义，依靠的依旧是人民群众。工作中，要力戒高高在上、脱离群众、脱离实际的官老爷做派，多与群众接触，从群众中吸取才智和力气，养成问计于民的好习惯。二是勇于解难事。务实从严，是

23、每个党员干部对待工作的正确看法。要把这种看法落实到每一项工作中去，要戒除贪图淫逸、讲求舒适、怕吃苦、饱食终日、无所作为的不良作风，担当起肩上的责任,做到为官一任，作为一方。三是简化办事程序。要急群众所急、想群众所想，尽最大可能提高办事效率，加快办事速度，一切从实际动身，勤俭从政，效率为先。四是接受监督。联系群众更要信任群众，加强民主更要多听民声。工作中时时到处应当考虑到群众利益，H觉主动接受群众监督，让工作开展得更有人气和活力。（三）艰苦奋斗要统筹制定领导干部办公用房、住房、配车、秘书配备、公务接待等工作生活待遇标准，落实不赠送、不接受礼品的规定，切实解决违反规定和超标准享受待遇的各种问题。要结合治治病的要求，依据中心八项规定，边学边查边整改，比照镜子，深挖思想根源，净化心灵，摒弃享乐主义，坚持艰苦奋斗，以良好的精神状态和奋勉有为的面貌赢取人民群众信任。（四）廉洁臼律作为党员干部，无论什么时候，群众本色不能变，群众情怀不能淡。要自觉加强党性修养，牢记一心一意为人民服务的宗旨，净化思想、洗涤灵魂、增加党性、明确航向。在始终保持为人民服务中追求高雅的生活情趣、锻造健全和谐的心理状态、