植物组织培养学有图片.ppt

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1、植物组织培养学实验宜春学院生命科学与资源环境学院宜春学院生命科学与资源环境学院 园林教研室园林教研室 杨育红杨育红园艺教研室园艺教研室 卢其能卢其能 却志群却志群实验一 植物组织培养实验室参观一、目的要求一、目的要求通过本次实验，使学生掌握如何组建植物组织培养实验室；同时熟悉组培中涉及的各种仪器设备和器皿用具的使用方法。二、仪器用具二、仪器用具 组培室内的各种实验设备。三、实验内容三、实验内容1介绍合理的组培室布局2介绍实验设备和用具3介绍实验的操作规程。四、作业四、作业将本此实训内容整理成实验报告。每人设计一个植物组织培养室的组建方案。（说明设计思路）超净工作台 实验二实验二 MSMS培养基

2、母液的配制与保存培养基母液的配制与保存一、目的要求一、目的要求 通过MS培养基的母液配制和保存,掌握配制和保存培养基母液的基本技能.二、材料与用具二、材料与用具1 所需仪器及设备：天平、烧杯、定容瓶、量筒、蒸馏水、母液瓶、标签、冰箱等。2 所需药品及试剂：配制MS培养基所需的药品、生长调节物质、蒸馏水、95%酒精、0.1mol/l的NaOH、0.1mol/l的HCl三、方法步骤三、方法步骤1 1母液的配制母液的配制根据根据MSMS培养基配方表配制六种母液。（详见附表）培养基配方表配制六种母液。（详见附表）2 2母液的保存母液的保存（1 1）装瓶：将配制好的母液分别倒入瓶中，瓶上）装瓶：将配制好

3、的母液分别倒入瓶中，瓶上贴好标签，注明培养基名称、母液号、吸取量与贴好标签，注明培养基名称、母液号、吸取量与配制日期。配制日期。（2 2）储藏：将母液瓶储放在冰箱内备用。）储藏：将母液瓶储放在冰箱内备用。四、作业四、作业四、作业四、作业1 1整理实验报告。整理实验报告。2 2列一张配制列一张配制MSMS培养基母液成分表。培养基母液成分表。配制配制配制配制MSMS培养基母液成分表培养基母液成分表培养基母液成分表培养基母液成分表母液种母液种类成分成分规定定量量（mg/lmg/l）扩大大倍倍数数称称取取量量（g g）母液母液定容定容体体积（mlml）配配1L MS1L MS培养基培养基吸取量吸取量（

4、mlml）大量元大量元素素母液母液1 1NHNH4 4NONO3 316501650505082.582.5100010002020KNOKNO3 31900190095.095.0MgSOMgSO4 4.7H.7H2 2O O37037018.518.52 2CaclCacl2 2.2H.2H2 2O O44044010010022.022.050050010103 3KHKH2 2POPO4 41701701001008.58.55005001010微量元微量元素素5 5H H3 3BOBO3 36.26.250500.310.31100010002020MnSOMnSO4 4.4H.4H

5、2 2O O22.322.31.1151.115ZnSOZnSO4 4.7H.7H2 2O O8.68.60.430.43KIKI0.830.830.04150.0415NaNa2 2MoOMoO4 4.2H.2H2 2O O0.250.250.01250.0125CuSOCuSO4 4.5H.5H2 2O O0.0250.0250.001250.00125CoclCocl2 2.6H.6H2 2O O0.0250.0250.001250.00125铁盐4 4NaNa2 2-EDTA-EDTA37.337.31001001.8651.8655005001010FeSOFeSO4 4.7H.7H

6、2 2O O27.827.81.3901.390有机成有机成分分6 6肌醇肌醇1001002002005.05.02502505 5甘氨酸甘氨酸2 20.10.1烟酸烟酸0.50.50.0250.025V VB6B60.50.50.0250.025V VB1B10.10.10.0250.025实验三实验三 MSMS固体培养基的配制固体培养基的配制一一 目的要求目的要求 通过 MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。二二 材料与用具材料与用具1 所需仪器及设备：电炉、酸度计、高压湿热灭菌器2 所需药品及试剂：配制MS培养基的各种母液、生长调节物质母液、0.1mol/l NaOH、0.1m

7、ol/l Hcl、琼脂、蔗糖、蒸馏水3 其他材料：移液管、量筒、定容瓶、培养瓶、标签、铅笔。三三 方法步骤方法步骤 1 1按母液顺序和规定量，用吸管提取母液，放入盛有一按母液顺序和规定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量蒸馏水的量筒定量蒸馏水的量筒母液一母液一 20ml 20ml 母液二母液二 10ml 10ml 母液三母液三 10ml10ml母液四母液四 10ml 10ml 母液五母液五 20ml 20ml 母液六母液六 5ml 5ml 2 2加入生长调节物质：加入生长调节物质：适配制的培养基而定。适配制的培养基而定。3 3加入蔗糖：加入蔗糖：30g/l30g/l 4 4加蒸馏水定容后倒入锅中

8、加蒸馏水定容后倒入锅中 5 5加入琼脂：加入琼脂：6.5g/l6.5g/l（视琼脂质量而定）（视琼脂质量而定）,后调节后调节PHPH值值(用用1mol/l1mol/l的的NaOHNaOH或或1mol/l1mol/l的的HCL)HCL)6.6.熔化琼脂熔化琼脂:在电炉上加热溶液在电炉上加热溶液,并不断搅拌并不断搅拌,使琼脂熔使琼脂熔化化.7.7.培养基的分装培养基的分装四、作业四、作业1整理实验报告注：（1）配制培养基时母液吸取量的计算：吸取量（ml）=（培养基中某成分的规定浓度（mg/l）*配制培养基的体积（l）/母液中某成分浓度（mg/l）（2）植物激素母液吸取量计算：吸取母液量（ml）=（

9、培养基中激素浓度（mg/l）*配制培养基体积（l）/激素母液浓度（mg/ml）实验四实验四 愈伤组织的诱导愈伤组织的诱导 一、目的要求一、目的要求 本次试验，首先通过在无菌操作台上本次试验，首先通过在无菌操作台上进行无菌操作训练，使学生初步掌握组织进行无菌操作训练，使学生初步掌握组织培养的无菌操作技术。其次，通过本次实培养的无菌操作技术。其次，通过本次实验是了解并掌握愈伤组织诱导的基本程序验是了解并掌握愈伤组织诱导的基本程序和方法。和方法。二二 材料与用具材料与用具1 所需仪器及工具：超净工作台、70%酒精、95%酒精、接种器械（主要指剪刀、镊子等）、培养材料或外植体、0.1%的升汞、无菌水等

10、2 愈伤组织诱导培养基：MS+2.4-D1.0+KT0.2MS+2.4-D1.0+KT0.2 或或B5+2.4-D1.0+KT0.2B5+2.4-D1.0+KT0.2三、方法步骤三、方法步骤1 1进入实验室后用水和肥皂洗净双手，穿上灭菌过进入实验室后用水和肥皂洗净双手，穿上灭菌过的专用实验服、帽子、鞋子。的专用实验服、帽子、鞋子。2 2打开超净工作台内的吹风和紫外灯，并打开无菌打开超净工作台内的吹风和紫外灯，并打开无菌操作室内的紫外灯，照射操作室内的紫外灯，照射2020分钟（进行紫外灭菌）分钟（进行紫外灭菌）3 3进行外植体预处理（即对植物组织进行修整，去进行外植体预处理（即对植物组织进行修

11、整，去掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。）冲洗干净。）4 4照射照射2020分钟后，关闭紫外灯，打开照明灯，用分钟后，关闭紫外灯，打开照明灯，用70%70%的酒精擦拭工作台和双手，准备进行外植体的消的酒精擦拭工作台和双手，准备进行外植体的消毒和接种工作。毒和接种工作。5 5用蘸有用蘸有70%70%的酒精的纱布擦拭装有培养基的培的酒精的纱布擦拭装有培养基的培养瓶，放进工作台。养瓶，放进工作台。6 6把接种器械浸泡在把接种器械浸泡在95%95%酒精中，在火焰上灭菌酒精中，在火焰上灭菌后，放在器械架上。后，放在器械架上。7 7胡萝卜种子

12、经胡萝卜种子经75%75%乙醇浸泡乙醇浸泡30s30s，无菌水冲洗，无菌水冲洗2 2遍，再用遍，再用0.1%0.1%升汞浸泡升汞浸泡1010分钟，无菌水冲洗分钟，无菌水冲洗3-53-5次次后，接种于不含任何激素的后，接种于不含任何激素的1/2MS1/2MS固体培养基含固体培养基含（1.5%1.5%蔗糖）上，于蔗糖）上，于2424暗培养条件下萌发暗培养条件下萌发7-107-10天后，将子叶和下胚轴切成天后，将子叶和下胚轴切成0.5cm0.5cm的截段作为组织的截段作为组织培养的材料。培养的材料。8.8.进行接种。进行接种。9.9.接种完毕后接种完毕后,清理和关闭超净工作台清理和关闭超净工作台,并

13、将培养并将培养瓶放入培养室培养。瓶放入培养室培养。四、作业四、作业1.整理实验报告。2.接种一周后,观察接种材料的污染情况,并分析污染原因。3.25天后统计愈伤组织的诱导率，记录实验现象。实验五实验五 月季茎段的离体培养月季茎段的离体培养一、目的要求一、目的要求 通过本次试验，熟练掌握外植体的表通过本次试验，熟练掌握外植体的表面灭菌方法，并巩固掌握无菌操作的基本面灭菌方法，并巩固掌握无菌操作的基本要领，重点掌握一般花卉的器官的离体培要领，重点掌握一般花卉的器官的离体培养的基本程序。养的基本程序。二二 材料与用具材料与用具1 1 所需仪器及工具：超净工作台、所需仪器及工具：超净工作台、70%70

14、酒精、酒精、95%95%酒精、接种器械（主要指剪刀、镊子等）、培养酒精、接种器械（主要指剪刀、镊子等）、培养材料或外植体、材料或外植体、0.1%0.1%的升汞、无菌水等。的升汞、无菌水等。2 2 所需材料：嫩叶、嫩茎切段、顶芽或侧芽所需材料：嫩叶、嫩茎切段、顶芽或侧芽3 3 诱导培养基：诱导培养基：MS+2.4-D1.0mg/l+6-BA0.1mg/lMS+2.4-D1.0mg/l+6-BA0.1mg/lMS+2.4-D1.0mg/l+6-BA0.1mg/lMS+2.4-D1.0mg/l+6-BA0.1mg/l或或或或MS+NAA0.1mg/l+6-BA0.1mg/L+2.4-D0.5mg/

15、lMS+NAA0.1mg/l+6-BA0.1mg/L+2.4-D0.5mg/lMS+NAA0.1mg/l+6-BA0.1mg/L+2.4-D0.5mg/lMS+NAA0.1mg/l+6-BA0.1mg/L+2.4-D0.5mg/l 三、方法步骤三、方法步骤1 1进入实验室后用水和肥皂洗净双手，穿上灭菌过进入实验室后用水和肥皂洗净双手，穿上灭菌过的专用实验服、帽子、鞋子。的专用实验服、帽子、鞋子。2 2打开超净工作台内的吹风和紫外灯，并打开无菌打开超净工作台内的吹风和紫外灯，并打开无菌操作室内的紫外灯，照射操作室内的紫外灯，照射2020分钟（进行紫外灭菌）分钟（进行紫外灭菌）3 3进行外植体预处

16、理（即对植物组织进行修整，去进行外植体预处理（即对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。）冲洗干净。）4 4照射照射2020分钟后，关闭紫外灯，打开照明灯，用分钟后，关闭紫外灯，打开照明灯，用70%70%的酒精擦拭工作台和双手，准备进行外植体的消的酒精擦拭工作台和双手，准备进行外植体的消毒和接种工作。毒和接种工作。5 外植体消毒灭菌时，先用自来水冲洗2小时，洗去渗出汁液，再用70%的酒精消毒8-9秒后用0.1%的升汞消毒7-8分钟，无菌水冲洗4-5次，效果较好.接种时，用干净滤纸吸干外植体表面水分，可以明显减少污染

17、率和褐变率 6 接种完毕后,清理和关闭超净工作台,并将培养瓶放入培养室培养。四、作业四、作业1.整理实验报告。2.接种一周后,观察接种材料的污染情况,并分析污染原因。3.25天后统计茎段分化率，记录实验现象。实验六实验六 花药培养花药培养 一、目的要求一、目的要求 花药培养可应用于品种育种，即单倍体育种。同时，有的植物花药培养还能有效脱除母株所带病毒，获得无病毒苗。通过本实验，学习花药培养技术，为今后应用这一技术奠定基础。二、材料与用具二、材料与用具 1.材料：草莓花蕾2.仪器：光学显微镜、盖玻片、载玻片、超净工作台、手术剪、接种环、枪状镊子、高压灭菌器、电磁炉、培养瓶等。3.试剂：70%-7

18、5%乙醇、0.1%升汞、无菌水、醋酸洋红醋酸洋红的配制：将100ml 45%的冰醋酸红置锥形瓶中煮沸，徐徐加入0.5-1g洋红粉末（不要一次加入，以免溅沸）。继续煮沸20min（可采用回流煮沸），冷却备用。三、方法步骤三、方法步骤1.培养基配制诱导培养基：MS+6-BA0.5mg/l+KT0.1mg/l+NAA2.0mg/l分化培养基：MS+6-BA0.5mg/l+ZT2.0mg/l+NAA0.2mg/l2.材料的选择（即花粉发育时期的鉴定）选择花粉处于单核靠边起的花药培养鉴定方法：从田间采集花蕾数个，从每花蕾取花药1-2枚置载玻片上，加醋酸洋红1-2滴，用玻棒头或镊子的一头压碎花药，剔除碎片

19、加盖玻片镜鉴。通过镜鉴记录处于单核靠边期花药花蕾的外观形态，便于下次采集。通常花药单核靠边期的草莓花蕾形态是：未开放，花萼略长于花冠或花冠刚露白，花冠白色或淡绿且不松动，花药微黄且充实。3.材料预处理、消毒和接种取花粉发育处于单核靠边期取花粉发育处于单核靠边期(约约4-6mm4-6mm大小大小)的花蕾，的花蕾，放在放在44冰箱中低温预冰箱中低温预处理处理3d-5d3d-5d或不经低温处理，用或不经低温处理，用70%70%的乙醇表面消的乙醇表面消毒毒10-15s10-15s后，再经后，再经2%2%的的8484消毒液消毒消毒液消毒15min15min，无菌水清洗，无菌水清洗3-43-4次，每次次

20、每次4-4-5min5min，用无菌试纸吸干花蕾表面水，用无菌试纸吸干花蕾表面水分后，在超净工作台上剥取花药，立即接种于诱分后，在超净工作台上剥取花药，立即接种于诱导培养基上。导培养基上。4.培养观察接种后暗培养7天，再转入光照培养。组培室内温度控制在20左右，光照时间16h/d，光强1500-2000lx。四 分析讨论1 观察并记录花药的分化状况2 30天后，分析培养基对于花药培养的影响实验七 植物顶端分生组织培养脱毒一、目的要求一、目的要求 通过本次实验，了解一般园林植物的通过本次实验，了解一般园林植物的组织培养脱毒技术，并掌握顶端分生组织组织培养脱毒技术，并掌握顶端分生组织的分解方法的

21、分解方法二、材料与用具二、材料与用具 1.材料：草莓茎尖2.仪器：光学显微镜、超净工作台、手术剪、接种环、枪状镊子、高压灭菌器、电磁炉、培养瓶等。3.试剂：70%-75%乙醇、0.1%升汞、无菌水三、方法步骤三、方法步骤1.培养基配制诱导培养基：MS+6-BA0.5mg/l+KT0.1mg/l+NAA2.0mg/l分化培养基：MS+6-BA0.5mg/l+ZT2.0mg/l+NAA0.2mg/l2打开超净工作台内的吹风和紫外灯，并打开无菌操作室内的紫外灯，照射20分钟（进行紫外灭菌）3进行外植体预处理（即对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。）4照射20分钟后，关闭紫外灯，打开照明灯，用70%的酒精擦拭工作台和双手，准备进行外植体的消毒和接种工作。5 将草莓茎尖置于显微镜下，用镊子夹住茎段的后半部分，并用解刨针除去叶片及叶片原基，直至露出闪亮圆锥体，即为顶端分生组织。6 用消毒完毕的解剖刀，切下顶端分生组织，并迅速将其转接到培养基上。7 接种后暗培养7天，再转入光照培养。四 分析讨论1 观察并记录培养材料得生长状况。2 分析培养基对顶端分生组织生长和分化的影响。